林柳任 竇晨 鄭永仁 馬云淑 孫赟 程欣

摘 要 目的：研究羥基喜樹(shù)堿納米粒在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及組織分布特征，并探討其靶向性。方法：將雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組，每組6只，分別單劑量尾靜脈注射羥基喜樹(shù)堿納米粒和市售羥喜樹(shù)堿注射液（4 mg/kg，以羥基喜樹(shù)堿計(jì)），在給藥后5、30、60、120、240、360、480、600、720 min時(shí)于眼底靜脈叢取血500 μL，采用高效液相色譜法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)血漿中羥基喜樹(shù)堿的含量，以DAS 3.0等軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。另取雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組，每組24只，分別單劑量尾靜脈注射羥基喜樹(shù)堿納米粒和市售羥喜樹(shù)堿注射液（0.6 mg/kg，以羥基喜樹(shù)堿計(jì)），在給藥后30、60、120、240 min時(shí)于腹主動(dòng)脈取血并摘取心、肝、脾、肺、腎、腦，采用高效液相色譜法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)血漿及組織中羥基喜樹(shù)堿的含量，考察其分布特征及靶向性。結(jié)果：羥基喜樹(shù)堿納米粒和市售羥喜樹(shù)堿注射液在大鼠體內(nèi)均符合二室模型，羥基喜樹(shù)堿納米粒的AUC0-720 min和AUC0-∞分別為市售羥喜樹(shù)堿注射液的1.89和1.87倍，MRT0-720 min和MRT0-∞為2.74和3.00倍，t1/2β為2.75倍，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;給藥后30 min時(shí)，羥基喜樹(shù)堿納米粒和注射液在肺中濃度最高;隨著時(shí)間的推移，藥物逐漸向肝部位積累，在60 min時(shí)肝藥濃度達(dá)到最高。羥基喜樹(shù)堿納米粒在肝的相對(duì)攝取率最大（6.28）;以肝為靶向器官，其在心、脾、肺、腎、腦和血漿中的靶向效率均大于羥喜樹(shù)堿注射液;給藥后30～120 min，羥基喜樹(shù)堿納米粒在心、肺（除給藥后30 min外）、腎、腦、血漿中的選擇性指數(shù)均顯著高于羥喜樹(shù)堿注射液（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：羥基喜樹(shù)堿納米粒延長(zhǎng)了藥物的半衰期、提高了其血藥濃度、延長(zhǎng)了其體內(nèi)作用時(shí)間，且肝靶向性顯著。

關(guān)鍵詞 羥基喜樹(shù)堿;納米粒;藥動(dòng)學(xué);組織分布;靶向性;大鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE：To study the pharmacokinetics and tissue distribution characteristics of Hydroxycamptothecin （HCPT） nanoparticles in rats， and to investigate their targeting. METHODS： Male SD rats were randomly divided into 2 groups， with 6 rats in each group. They were given HCPT nanoparticles and HCPT injection （4 mg/kg based on HCPT） via tail vein respectively. 500? μL fundus venous plexus blood were sampled at 5， 30， 60， 120， 240， 360， 480， 600 and 720 min after administration. The plasma concentration of HCPT in rats were measured by HPLC at different time points. The pharmacokinetic parameters were calculated by DAS 3.0 software. Male SD rats were randomly divided into two groups， with 24 rats in each group. They were given HCPT nanoparticles and HCPT injection （0.6 mg/kg based on HCPT） via tail vein， respectively. Blood was immediately taken from the abdominal aorta， and heart， liver， spleen， lung， kidney and brain were removed at 30， 60，120， 240 min after administration. The plasma and tissue concentration of HCPT in rats were measured by HPLC. The distribution of HCPT in each tissue and targeting were investigated. RESULTS： HCPT nanoparticles and its injection conformed to a two-compartment model in rats. Compared with HCPT injection， AUC0-720 min and AUC0-∞ increased by 1.89 and 1.87 times respectively，? MRT0-720 min and MRT0-∞ increased by 2.74 and 3.00 times respectively， t1/2β increased by 2.75 times， with statistical significance （P<0.05）. At 30 min after administration， HCPT nanoparticles and HCPT injection had the highest concentration in lung; with the passage of time， the drug gradually accumulated in the liver and reached the highest concentration at 60 min. The relative liver uptake rate of HCPT nanoparticles was the highest （6.28）.? Taking liver ad target organ， and the targeting efficiencies of it in heart， spleen， lung， kindey， brain and plasma were higher than those of HCPT injection. The selectivity index of HCPT nanoparticles in heart， lung （except for 30 min after administration）， kidney， brain and plasma were significantly higher than those of HCPT injection at 30-120 min after administration. CONCLUSIONS： HCPT nanoparticles extend the half-life of the drug， increase its plasma concentration， and prolong its action time in vivo， with significant liver targeting.

KEYWORDS? ?Hydroxycamptothecin; Nanoparticles; Pharmacokinetics; Organization distribution; Targeting; Rat

中圖分類(lèi)號(hào) R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）02-0164-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.02.07

羥基喜樹(shù)堿（Hydroxycamptothecin）是一種具有高效抗癌作用的活性生物堿，臨床上常用以輔助治療各類(lèi)原發(fā)性肝癌、胃癌、食道癌等惡性腫瘤[1-3]。羥基喜樹(shù)堿在堿性環(huán)境中易開(kāi)環(huán)生成溶于水的羧酸衍生物，故臨床上多以此衍生物的鈉鹽作為注射液使用[4]。但因羥基喜樹(shù)堿開(kāi)環(huán)衍生物的生物利用度低、半衰期短，在體內(nèi)吸收慢且毒副作用大，其臨床應(yīng)用上受到了很大的限制[5]。近年來(lái)，納米粒的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，其作為藥物載體，具有制備工藝簡(jiǎn)單、保護(hù)藥物不被降解、促進(jìn)藥物吸收、優(yōu)化并改善藥物在體內(nèi)的分布特征等優(yōu)點(diǎn)[6]。基于此，本課題組前期成功制備了羥基喜樹(shù)堿納米粒。為進(jìn)一步探討其體內(nèi)的緩釋作用及靶向性，本研究以市售羥喜樹(shù)堿注射液為參照，比較了羥基喜樹(shù)堿納米粒在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)及組織分布特征，旨在為該制劑的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

實(shí)驗(yàn)所用儀器有：Waters e2695型高效液相色譜（HPLC）儀（包括2998型二極管陣列檢測(cè)器、717型自動(dòng)進(jìn)樣器、1525型元梯度輸液泵，美國(guó)Waters公司）、190 Plus PALS型納米激光粒度儀（美國(guó)Brookhaven Instruments公司）、TGL-16G型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）、FS-300N型超聲波處理器（上海生析超聲儀器有限公司）、DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市予化儀器有限責(zé)任公司）、XK96-A型快速混勻機(jī)（江蘇新康醫(yī)療器械有限公司）、XHF-1型高速分散器（寧波新芝生物科技有限公司）、CP124C-OHAUS型電子天平（奧豪斯儀器常州有限公司）、HSC-12A型氮吹儀（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）。

1.2 藥品與試劑

實(shí)驗(yàn)所用藥品和試劑有：羥基喜樹(shù)堿對(duì)照品（彭州茂源生物科技公司，批號(hào)170401，純度≥99%）、喜樹(shù)堿對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，成都得思特生物技術(shù)有限公司，批號(hào)DST180310-028，純度≥98%）、羥喜樹(shù)堿注射液（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)19010510，規(guī)格10 mL ∶ 10 mg）、聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇-葉酸（PLGA-PEG-FA，分子量18.5 kDa，重慶浦諾維生物科技有限公司）、聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA，分子量13 kDa，濟(jì)南岱罡生物科技有限公司）、全氟戊烷（PFP，美國(guó)Strem Chemicals公司）、細(xì)胞膜熒光探針DiR碘化物（美國(guó)Biotium公司）、聚乙烯醇（PVA，分子量89～98 kDa，水解度99%，美國(guó)Sigma公司）、二甲基亞砜（DMSO，廣州賽國(guó)生物技有限公司，純度≥99%）、肝素鈉注射液（常州千紅生化制藥股份有限公司，批號(hào)151903017A，規(guī)格2 mL ∶ 5 000 U）等;甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，雄性，體質(zhì)量（250±20）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（湘）2019-0004。所有大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)于云南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 羥基喜樹(shù)堿納米粒的制備

精密稱(chēng)取羥基喜樹(shù)堿對(duì)照品約63 mg，溶于DMSO 1.5 mL中，超聲（功率480 W，頻率40 kHz）處理30 min，即得質(zhì)量濃度為42 mg/mL的羥基喜樹(shù)堿混懸液;在該混懸液中加入PLGA 25 mg、5 mg/mL DiR碘化物溶液（溶劑為乙酸乙酯）0.1 mL，作為油相1（O1）。吸取PFP 300 μL，加入至O1相中，于避光冰浴下超聲（功率105 W，頻率25 kHz，下同）乳化366 s，得到乳化后的油相1′（O1′）。另稱(chēng)取PLGA-PEG-FA 75 mg，溶于乙酸乙酯0.5 mL中作為油相2（O2）。將O2相加入到O1′相中，于避光冰浴下超聲乳化10 s，得到O1′/O2初乳;將上述初乳加入到5 mg/mL PVA水溶液[水相（W）]中，于避光冰浴下超聲乳化180 s，得到O1′/O2/W預(yù)復(fù)乳;攪拌下，加入水75 mL進(jìn)行稀釋?zhuān)覝叵掠谕L(fēng)櫥內(nèi)避光攪拌過(guò)夜;最后將上述乳液于4 ℃下以10 000 r/min離心15 min，棄去上清液，收集沉淀以水5 mL進(jìn)行分散，即得羥基喜樹(shù)堿納米粒。檢測(cè)該納米粒平均粒徑為（743.65±4.31）nm，平均Zeta電位為（16.24±0.45）mV;載藥量為31.8%（重復(fù)測(cè)定3次）。

2.2 羥基喜樹(shù)堿分析方法的建立

采用HPLC法進(jìn)行檢測(cè)。

2.2.1 色譜條件 以Zorbax Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱;以0.1%三乙胺水溶液（用磷酸調(diào)pH至3.0）-乙腈（73 ∶ 27，V/V）為流動(dòng)相;流速為0.6 mL/min;柱溫為30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為384 nm;進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.2 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱(chēng)取羥基喜樹(shù)堿對(duì)照品適量，用甲醇溶解制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的貯備液，再用甲醇進(jìn)一步稀釋制成質(zhì)量濃度分別為36、24、18、12、6、3、1.5、0.3、0.15、0.075 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4 ℃下密封保存，備用。

2.2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的配制 精密稱(chēng)取喜樹(shù)堿對(duì)照品1.0 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為100 mg/L的內(nèi)標(biāo)溶液，于4 ℃下密封保存，備用。

2.2.4 血漿和組織勻漿的制備 于大鼠眼眶取血，采集的血樣置于含有肝素鈉的離心管中，以6 000 r/min離心10 min，分離血漿，于-20 ℃下保存，備用。摘取大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干水分，稱(chēng)定質(zhì)量后加生理鹽水研磨，制成組織勻漿，于4 ℃下保存，備用。

2.2.5 樣品預(yù)處理 精密吸取大鼠血漿或組織勻漿樣品200 μL，置于2 mL離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，渦旋混勻3 min，再加入乙腈1.2 mL，靜置5 min后，以6 000 r/min離心10 min，吸取上清液1.0 mL，以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)眉状?00 μL渦旋3 min復(fù)溶，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，待測(cè)。

2.2.6 專(zhuān)屬性考察 取大鼠空白血漿和空白心、肝、脾、肺、腎、腦組織勻漿樣品，空白血漿和各組織勻漿+羥基喜樹(shù)堿（6 mg/L）樣品，大鼠尾靜脈注射給藥30 min后的含藥血漿和含藥組織勻漿樣品，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理（各空白生物樣品不加內(nèi)標(biāo)）后，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，羥基喜樹(shù)堿與內(nèi)標(biāo)色譜峰的峰形對(duì)稱(chēng)且分離度好，保留時(shí)間分別為12.6、31.4 min，且無(wú)內(nèi)源性雜質(zhì)干擾，表明方法專(zhuān)屬性好，詳見(jiàn)圖1。

2.2.7 線性關(guān)系考察 精密吸取大鼠空白血漿和空白心、肝、脾、肺、腎、腦組織勻漿各200 μL，加入“2.2.2”項(xiàng)下羥基喜樹(shù)堿系列標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，分別制成質(zhì)量濃度分別均為0.025、0.05、0.1、0.5、1、2、4、6、8、12、16 mg/L的系列血漿樣品和0.05、0.1、0.5、1、2、4、6、8、12 mg/L的系列組織樣品，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（x，mg/L）為橫坐標(biāo)、待測(cè)成分與內(nèi)標(biāo)峰面積比值（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果，血漿樣品中羥基喜樹(shù)堿檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.025～16 mg/L（r>0.999），定量下限為0.025 mg/L;各組織樣品中該成分檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍均為0.05～12 mg/L（r>0.99），定量下限均為0.5 mg/L，詳見(jiàn)表1。

2.2.8 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密吸取空白血漿和空白心、肝、脾、肺、腎、腦組織勻漿各200 μL，按“2.2.7”項(xiàng)下方法制成定量下限（0.025 mg/L）以及低、中、高質(zhì)量濃度（0.1、1、8 mg/L，濃度按預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置，下同）的血漿樣品和定量下限（0.05 mg/L）以及低、中、高質(zhì)量濃度（0.5、2、8 mg/L，濃度按預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)置，下同）的組織樣品，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。其中，同日內(nèi)連續(xù)測(cè)定5次考察日內(nèi)精密度;每日測(cè)定1次、連續(xù)測(cè)定5 d考察日間精密度;以實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度的百分比考察準(zhǔn)確度，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果，血漿樣品和各組織樣品中羥基喜樹(shù)堿的日內(nèi)、日間RSD均小于10%，準(zhǔn)確度均大于75%，符合方法學(xué)要求[7]。

2.2.9 提取回收率 精密吸取空白血漿和空白心、肝、脾、肺、腎、腦組織勻漿各200 μL，按“2.2.8”項(xiàng)下方法制成低、中、高質(zhì)量濃度的血漿樣品和組織樣品各5份，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄羥基喜樹(shù)堿與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比（A1）;另取空白血漿和空白心、肝、脾、肺、腎、腦組織勻漿各200 μL，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理后，加入羥基喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)溶液使其質(zhì)量濃度與上述相同，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積之比（A2），以A1/A2×100%計(jì)算提取回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果，血漿樣品和各組織樣品的提取回收率均大于80%（RSD<10%，n=5）。

2.2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2.8”項(xiàng)下方法制備低、中、高質(zhì)量濃度的血漿樣品和組織樣品，分別于室溫放置24 h、-20 ℃放置24 h、反復(fù)凍融（-20℃～室溫）3次后，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。每樣品重復(fù)測(cè)定5次，結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果，血漿樣品和各組織樣品在上述條件下放置，穩(wěn)定性良好（RSD<10%，n=5），符合方法學(xué)要求[7]。

2.3 藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)

取大鼠12只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食不禁水12 h，隨機(jī)分為受試組（給予自制羥基喜樹(shù)堿納米粒）和參照組（給予市售羥喜樹(shù)堿注射液），每組6只。各組大鼠均單次尾靜脈注射相應(yīng)藥物4 mg/kg（以羥基喜樹(shù)堿計(jì)，劑量設(shè)置參考文獻(xiàn)[8]），分別在給藥后5、30、60、120、240、360、480、600、720 min時(shí)于眼底靜脈叢取血500 μL，分離血漿，按“2.2.5”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠體內(nèi)羥基喜樹(shù)堿的血藥濃度。使用DAS 3.0軟件和Graphpad Prism 7軟件計(jì)算羥基喜樹(shù)堿的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)并作圖，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果，自制羥基喜樹(shù)堿納米粒和市售羥喜樹(shù)堿注射液在大鼠體內(nèi)均符合二室模型，其藥-時(shí)曲線及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)圖2、表5。與羥喜樹(shù)堿注射液比較，羥基喜樹(shù)堿納米粒的AUC0-720 min、AUC0-∞均顯著升高，MRT0-720 min、MRT0-∞、t1/2β均顯著延長(zhǎng)（P<0.05），其中納米粒AUC0-720 min和AUC0-∞分別為注射液的1.89和1.87倍，MRT0-720 min和MRT0-∞分別為注射液的2.74和3.00倍，t1/2β為注射液的2.75倍;同時(shí)，給藥360 min后，羥喜樹(shù)堿注射液在血漿中難以被檢出，而羥基喜樹(shù)堿納米粒在給藥720 min后仍能被檢出，表明納米?？裳娱L(zhǎng)羥基喜樹(shù)堿的半衰期并延長(zhǎng)其在體內(nèi)的作用時(shí)間。

2.4 組織分布實(shí)驗(yàn)與靶向性評(píng)價(jià)

2.4.1 組織分布實(shí)驗(yàn) 另取大鼠48只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食不禁水12 h，隨機(jī)分為受試組（給予自制羥基喜樹(shù)堿納米粒）和參照組（給予市售羥喜樹(shù)堿注射液），每組24只。各組大鼠均單次尾靜脈注射相應(yīng)藥物0.6 mg/kg（以羥基喜樹(shù)堿計(jì)，劑量設(shè)置參照文獻(xiàn)[9]和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果），分別在給藥后30、60、120、240 min時(shí)于腹主動(dòng)脈取血0.5 mL，分離血漿;然后迅速摘取其心、肝、脾、肺、腎、腦組織制成組織勻漿;按“2.2.5”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理后，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程計(jì)算各個(gè)時(shí)間點(diǎn)羥基喜樹(shù)堿的質(zhì)量濃度，結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果，給藥后30 min時(shí)，羥基喜樹(shù)堿納米粒及其注射液在肺中濃度最高;隨著時(shí)間的推移，藥物逐漸向肝部位積累，在60 min時(shí)肝藥濃度達(dá)到最高，此時(shí)羥基喜樹(shù)堿納米粒的肝藥濃度是其注射液的6.02倍。此外，羥基喜樹(shù)堿納米粒肝藥濃度的下降速率低于羥喜樹(shù)堿注射液，提示羥基喜樹(shù)堿納米粒在肝臟中有一定的蓄積。

2.4.2 靶向性評(píng)價(jià) 納米給藥系統(tǒng)屬于靶向給藥系統(tǒng)，主要評(píng)價(jià)指標(biāo)有相對(duì)攝取率（Re）、靶向效率（Te）、選擇性指數(shù)（Si），其中Re和Te反映整個(gè)代謝過(guò)程的靶向性，Si反映各時(shí)間點(diǎn)的靶向性，其數(shù)值越大即靶向性越強(qiáng)[10-12]。Re=AUCt/AUCc（AUC為AUC0-720 min，t為靶向制劑，c為非靶向制劑），Te=AUCT/AUCNT（T為靶器官，NT為非靶器官，下同），Si=cT/cNT。結(jié)果，羥基喜樹(shù)堿納米粒在肝的Re值最大，為6.28（>1），表明羥基喜樹(shù)堿納米粒對(duì)肝具有較強(qiáng)的靶向性，因此推測(cè)肝為靶器官。此外，羥基喜樹(shù)堿納米粒在血漿中的Re值為1.40（>1），進(jìn)一步反映自制納米粒具有一定的長(zhǎng)循環(huán)作用[13]。后續(xù)以肝作為靶器官計(jì)算Te值和Si值，結(jié)果見(jiàn)表7、表8。對(duì)比各組織的Te值發(fā)現(xiàn)，羥基喜樹(shù)堿納米粒均高于羥喜樹(shù)堿注射液，尤其在心、腎、腦和血漿中Te值均大于6，表明相比于羥喜樹(shù)堿注射液，納米粒能提高藥物在各組織內(nèi)的蓄積量[12]。對(duì)比兩藥在各時(shí)間點(diǎn)的Si值發(fā)現(xiàn)，除在肺組織（30 min）外，羥基喜樹(shù)堿納米粒的Si值均大于1，表明各時(shí)間點(diǎn)藥物在肝中的濃度普遍高于其他組織，肝靶向性顯著;且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，肝靶向性明顯強(qiáng)于羥喜樹(shù)堿注射液。經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，在給藥后30～240 min時(shí)間段內(nèi)，羥基喜樹(shù)堿納米粒在心、肺（除給藥后30 min外）、腎、腦、血漿中的Si值均顯著高于羥喜樹(shù)堿注射液（P<0.05或P<0.01）。

3 討論

PLGA-PEG類(lèi)嵌段共聚物具有良好的生物相容性和機(jī)械性能[14]，其作為納米粒外殼，能明顯提高難溶性藥物羥基喜樹(shù)堿親水性，發(fā)揮緩釋作用并提高藥物生物利用度，因此其相應(yīng)制劑具有長(zhǎng)循環(huán)及被動(dòng)靶向能力[15]。雖然PLGA-PEG外殼能依靠高滲透長(zhǎng)滯留（EPR）效應(yīng)將藥物被動(dòng)靶向到腫瘤部位，但無(wú)法進(jìn)一步提高腫瘤部位的藥物累積量[16]。為了進(jìn)一步提高對(duì)腫瘤組織的靶向效率，本研究在PLGA-PEG表面連接了小分子靶向基團(tuán)葉酸，借助后者能與腫瘤組織或細(xì)胞表面的葉酸受體特異性結(jié)合的性質(zhì)，實(shí)現(xiàn)腫瘤組織靶向性。

藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，羥基喜樹(shù)堿納米粒通過(guò)尾靜脈注射進(jìn)入大鼠體內(nèi)后，其AUC、MRT、t1/2β均顯著高于或長(zhǎng)于羥喜樹(shù)堿注射液，說(shuō)明納米粒在血漿中作用時(shí)間更長(zhǎng)、消除更慢、體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)效果更好。組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論羥基喜樹(shù)堿納米粒還是羥喜樹(shù)堿注射液，藥物在肝和肺中的濃度均普遍高于其他組織，表現(xiàn)出羥基喜樹(shù)堿趨向肝、肺蓄積的特性，這可能與羥基喜樹(shù)堿主要經(jīng)過(guò)肝代謝且肺部巨噬細(xì)胞較多，容易攝取藥物等有關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17-18]。由于納米載藥系統(tǒng)改變了藥物在體內(nèi)的分布特征，導(dǎo)致納米粒在體內(nèi)的分布與羥基喜樹(shù)堿注射液相比有較大的差異。且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，羥基喜樹(shù)堿納米粒的肝藥濃度高于注射液，但羥基喜樹(shù)堿納米粒是否會(huì)產(chǎn)生潛在的毒性，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的證實(shí)。此外，通過(guò)Te、Re、Si等3個(gè)靶向指標(biāo)可以看出羥基喜樹(shù)堿納米粒的肝靶向性顯著，且優(yōu)于羥喜樹(shù)堿注射液。

綜上所述，羥基喜樹(shù)堿納米粒延長(zhǎng)了藥物的半衰期、提高了其血藥濃度、延長(zhǎng)了其體內(nèi)作用時(shí)間，且肝靶向性顯著。

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（收稿日期：2020-09-27 修回日期：2020-12-11）

（編輯：鄒麗娟）