周婉婷，汪 曼，周 翔，高 卓,3，李佳佳，李王勝，李思琪，王雪倩，王錄紅，劉大麗

（1國(guó)家甜菜種質(zhì)中期庫(kù)，黑龍江大學(xué)，哈爾濱 150080；2省高校甜菜遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與生態(tài)環(huán)境學(xué)院，黑龍江大學(xué)，哈爾濱 150080；3黑龍江省普通高等學(xué)校分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150080）

0 引言

鎘(Cd)是一種有毒的重金屬元素，易被植物根系吸收并富集在植物體中。當(dāng)鎘在植物體內(nèi)累積到一定程度，便會(huì)導(dǎo)致植物體內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)大量產(chǎn)生[1]，從而影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育，直接或間接影響農(nóng)作物的產(chǎn)量及質(zhì)量，并通過(guò)食物鏈富集危害人類健康。

面對(duì)重金屬污染的土壤，采用傳統(tǒng)修復(fù)方法成本高耗能大，而將抗逆性較好的能源作物種植于被污染的土壤上，既可以有效利用污染的土地資源，也能一定程度上為生物能源提供原料。甜菜(Beta vulgarisL.)是一種重要的糖料作物。甜菜塊根含糖量相對(duì)于其他作物較高[2]。20世紀(jì)70年代，當(dāng)美國(guó)第一次石油短缺，甜菜育種家們認(rèn)識(shí)到利用蔗糖生物發(fā)酵乙醇作為液體燃料時(shí)，設(shè)想開(kāi)發(fā)僅用于能源生產(chǎn)的甜菜[3]。面對(duì)土壤重金屬污染現(xiàn)狀，甜菜適應(yīng)非生物脅迫能力較強(qiáng)，通過(guò)根際的微生物促進(jìn)土壤中重金屬化合物的分解來(lái)提高根對(duì)重金屬的吸收率，從而提高甜菜對(duì)重金屬的富集來(lái)降低土壤重金屬污染程度[4]。因此，甜菜具有生物修復(fù)被鎘污染土壤的潛在能力[5]?，F(xiàn)如今，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)收益較低和農(nóng)業(yè)產(chǎn)品價(jià)格波動(dòng)導(dǎo)致農(nóng)民需求新的經(jīng)濟(jì)作物，甜菜作為生物能源和工業(yè)糖的原料可以帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益，符合當(dāng)下農(nóng)民需求?，F(xiàn)今社會(huì)對(duì)生物燃料的需求不斷增加，甜菜產(chǎn)量自然受到關(guān)注，非生物性脅迫會(huì)降低甜菜產(chǎn)量和質(zhì)量，因此，甜菜抗逆基因的研究對(duì)未來(lái)甜菜產(chǎn)量和質(zhì)量的提高有非常深遠(yuǎn)的影響。

長(zhǎng)期以來(lái)的進(jìn)化使得自然界中各種生物形成了一套代謝有毒物質(zhì)的解毒酶系統(tǒng)，從而降低了非生物性脅迫對(duì)植物體生理生化及正常生長(zhǎng)的影響[6]。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶屬于解毒酶系統(tǒng)中一個(gè)重要的酶，廣泛存在于植物的細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、線粒體、微粒體中[7]。研究表明，植物GST有多種功能，能夠催化谷胱甘肽(GSH)結(jié)合過(guò)氧化物或絡(luò)合自由態(tài)Cd[8]，也能夠通過(guò)解除活性親電子復(fù)合體來(lái)抵御一系列生物和非生物脅迫的傷害[9-10]，在抵御ROS對(duì)細(xì)胞的毒害中發(fā)揮重要作用[11]。

現(xiàn)已證實(shí)GST廣泛存在于原核生物和真核生物中，參與多種有毒代謝產(chǎn)物和外源性化合物的解毒。在20世紀(jì)90年代初期，GST基因首先在玉米中被發(fā)現(xiàn)[12]，此后不斷有大量植物GST基因被發(fā)掘。植物GST基因的主要功能在于解除外源毒素及內(nèi)源性有毒代謝物的侵害，催化還原型谷胱甘肽的疏基與多種親電性和親脂性底物結(jié)合，生成水溶性的化合物，從而降低底物的毒性[13-14]。此外，植物GST還能影響植物生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素的合成并影響氧化應(yīng)激和其他刺激，在植物抵抗非生物性脅迫中發(fā)揮著重要作用[15]。因此，GST基因常應(yīng)用于改良植物、提高作物抗逆性等研究[16]。有研究表明不同苧麻品種中，部分BnGST基因受鎘脅迫積極響應(yīng)，判斷其與抗鎘脅迫機(jī)制有關(guān)[17]。Kilili等[18]在番茄中，共鑒定出5個(gè)同源的Tau類GST，其中Tau類GST參與了廣泛的氧化應(yīng)激反應(yīng)所涉及的催化和調(diào)節(jié)功能網(wǎng)絡(luò)。鎘脅迫下水稻GST蛋白質(zhì)復(fù)合體會(huì)產(chǎn)生特異性表達(dá)，植株通過(guò)蛋白質(zhì)互作提高GSH的含量，在GSTs家族蛋白的作用下，可以有效降低鎘對(duì)水稻植株的毒害作用[19]。利用生物信息學(xué)分析和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行表達(dá)分析表明，水稻GST家族基因在植物生長(zhǎng)發(fā)育和抵御各種生物和非生物脅迫方面發(fā)揮著重要作用[20]。

目前，盡管已經(jīng)證實(shí)了植物的鎘耐受、積累與GSTs相關(guān)，但是其在鎘脅迫下精確的作用機(jī)制還有待研究，尤其是甜菜BvGSTU9基因的研究較少，可以通過(guò)其他植物GST基因的研究結(jié)果可以推斷出該基因在抵御重金屬鎘脅迫可以發(fā)揮一定作用。因此，本研究以甜菜為研究材料，通過(guò)前期生物信息學(xué)分析篩選出BvGSTU9基因，運(yùn)用在線軟件進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，分析該基因氨基酸理化性質(zhì)、基因結(jié)構(gòu)、組織特異性表達(dá)模式，再通過(guò)進(jìn)一步的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析該基因在鎘脅迫下的表達(dá)量變化，從而進(jìn)一步分析BvGSTU9基因在甜菜抵抗重金屬脅迫過(guò)程中的功能，為將來(lái)深入探究GST基因在應(yīng)答鎘脅迫的分子機(jī)理中發(fā)揮的功能和作用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

甜菜品種為‘780016B/12優(yōu)’，取材于國(guó)家甜菜種質(zhì)資源中期庫(kù)，于2020年11月—2021年4月進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)甜菜BvGSTU9(LOC104894060)基因序列用生物信息學(xué)的方法分析蛋白基本性質(zhì)、結(jié)構(gòu)等。將甜菜在溫室中水培，預(yù)培養(yǎng)4周后，進(jìn)行鎘脅迫處理。在營(yíng)養(yǎng)液中加入不同濃度的CdCl2，濃度梯度分別設(shè)置為0.1、0.5、1.0 mmol/L，時(shí)間梯度分別為0、6、12、24 h，每個(gè)處理3次重復(fù)。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)該基因的表達(dá)情況。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 甜菜BvGSTU9生物信息學(xué)分析 使用ProtParam(https://web.expasy.org/protparam)分析了蛋白質(zhì)序列的長(zhǎng)度，等電點(diǎn)(pI)，平均親疏水性，蛋白質(zhì)分子量(MW)和不穩(wěn)定系數(shù)。對(duì)甜菜GST蛋白序列利用SMART、NCBI Conserved Domain search(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)、Pfam(http://pfam.xfam.org/search)分析，采用Blastx搜索其他物種的相似蛋白，并通過(guò)Clustalx與MEGA7.0，重新編輯第一列為該序列名稱，將文件保存為fasta格式和meg格式。導(dǎo)入meg格式文件，參數(shù)設(shè)置為默認(rèn)，使用鄰居連接方法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。采用DNAMAN6.0進(jìn)行氨基酸多序列比對(duì)，保存對(duì)比結(jié)果。

使用SignalP-5.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)進(jìn)行信號(hào)肽預(yù)測(cè)，通過(guò)TMHMM(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)分析跨膜結(jié)構(gòu)域的數(shù)目。采用SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_sopma.pl)預(yù)測(cè)BvGSTU9蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)；利用SWISS-MODEL(https://swiss model.expasy.org/interac tive)工具預(yù)測(cè)三級(jí)結(jié)構(gòu)。使用Cell-PLoc2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/cgi-bin/PlantmPLoc.Cgi)進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析。

1.3.2 鎘脅迫下基因的表達(dá)分析 Trizol試劑盒(Invitrogen)提取甜菜葉總的RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，利用KOD-PlusNeo高保真酶(TOYOBO)PCR擴(kuò)增目的基因全長(zhǎng)。使用SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)熒光定量試劑盒進(jìn)行qRT-PCR，反應(yīng)體系為(20 μL)：1.0 μL cDNA，10.0 μL 2×SuperReal PreMix Plus，0.4 μL 50×ROX Reference Dye，正反向引物各0.6 μL，7.4 μL ddH2O。qRT-PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性30 s；94℃變性5 s，60℃熒光信號(hào)采集30 s，40個(gè)循環(huán)。檢測(cè)每份樣品的目的基因和內(nèi)參基因Ct值，3次重復(fù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用相對(duì)定量2-ΔΔCt方法計(jì)算qRT-PCR結(jié)果，利用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計(jì)熒光定量PCR試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析，將分析結(jié)果導(dǎo)入Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì)制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 甜菜BvGSTU9基因生物信息學(xué)分析

2.1.1BvGSTU9基因的序列分析 甜菜BvGSTU9基因cDNA全長(zhǎng)925 bp，通過(guò)NCBI的ORF finder查詢得到BvGSTU9的開(kāi)放閱讀框（圖1），且用BLAST可以匹配到。結(jié)果表明編碼區(qū)長(zhǎng)度為675 bp，翻譯的蛋白質(zhì)有224個(gè)氨基酸。對(duì)氨基酸的理化性質(zhì)進(jìn)行分析，結(jié)果表明，該蛋白質(zhì)分子式為C1187H1826N278O350S6，等電點(diǎn)pI為4.74，消光系數(shù)為280 nm，半衰周期在哺乳動(dòng)物（體外）、酵母（體內(nèi)）和大腸桿菌（體內(nèi)）中分別為30、20 h以上和10 h以上。脂肪系數(shù)為94.02，不穩(wěn)定系數(shù)為44.75，這些結(jié)果表明BvGSTU9是不穩(wěn)定蛋白質(zhì)。

圖1 BvGSTU9基因編碼框

NCBI Conserved domains分析得出BvGSTU9基因?yàn)楹蠫位點(diǎn)的N末端結(jié)構(gòu)域（藍(lán)色）和含有H位點(diǎn)的C末端結(jié)構(gòu)域（綠色），屬于植物Tau類谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因家族的成員之一（圖2）。

圖2 BvGSTU9蛋白保守功能域預(yù)測(cè)

2.1.2 BvGSTU9蛋白與其他植物GST蛋白的多序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析 為了進(jìn)一步明確BvGSTU9與其他植物GST蛋白之間的進(jìn)化關(guān)系，通過(guò)NCBI網(wǎng)站BLAST進(jìn)行對(duì)比，選擇類內(nèi)氨基酸序列同一性大于50%，類間氨基酸序列同源性小于30%[21]進(jìn)行分析。結(jié)果顯示BvGSTU9蛋白氨基酸序列與菠菜SoGST(Spinacia oleracea,XM_022004611.1)氨基酸序列相似度為76.60%；與藜麥CqGST(Chenopodium quinoa,XM_021878393.1)氨基酸序列相似度為75.07%。將BvGSTU9的氨基酸序列與藜麥和菠菜GST氨基酸序列進(jìn)行多序列比對(duì)（圖3），得到的GST蛋白序列比對(duì)的一致性為78.40%，保守結(jié)構(gòu)域較短，且氨基酸相似度較低。有研究表明，不同植物不同類型的GST序列之間的差異還是比較大的。用軟件MEGA6.0（鄰近法）構(gòu)建BvGSTU9蛋白與其他16種同源性較高的植物GST蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)（圖4），結(jié)果表明，在進(jìn)化關(guān)系中，BvGSTU9蛋白與菠菜最近。

圖3 BvGSTU9與其他植物GST的氨基酸序列比對(duì)

圖4 BvGSTU9和其他植物中GSTs蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

2.1.3 甜菜BvGSTU9基因結(jié)構(gòu)分析 外顯子/內(nèi)含子的分布結(jié)構(gòu)在某些基因家族進(jìn)化中起著重要作用。本研究對(duì)甜菜BvGSTU9基因和其他16種植物的GSTs進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)分析（圖5）。由圖可知，大多數(shù)基因都含有2個(gè)外顯子和內(nèi)含子，同時(shí)也有2個(gè)基因(CsGSTU9-like，MeGSTU10)不具有UTR結(jié)構(gòu)。BvGSTU9基因外顯子/內(nèi)含子結(jié)構(gòu)與CqGSTU9-like基因，JrGSTU9-like基因非常相似，推斷其功能可能存在相似之處。

圖5 甜菜BvGSTU9基因進(jìn)化樹(shù)和其他植物GST基因結(jié)構(gòu)

2.1.4 跨膜結(jié)構(gòu)、信號(hào)肽預(yù)測(cè)和亞細(xì)胞定位 使用軟件TMHMM 2.0對(duì)甜菜BvGSTU9蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測(cè)。結(jié)果表明，BvGSTU9既不存在跨膜結(jié)構(gòu)域，也未發(fā)現(xiàn)膜內(nèi)的氨基酸序列，為膜外非膜蛋白。信號(hào)肽序列分析表明，甜菜BvGSTU9蛋白無(wú)信號(hào)肽，并且不存在剪切位點(diǎn)。由此推測(cè)，甜菜BvGSTU9蛋白為非分泌型蛋白，可能不進(jìn)行蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，直接在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中起作用。使用Cell-PLoc2.0對(duì)甜菜BvGSTU9進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示，其生命活動(dòng)的主要場(chǎng)所為細(xì)胞質(zhì)。綜合以上結(jié)果分析，可以推測(cè)出甜菜BvGSTU9蛋白在游離核糖體上合成蛋白多肽，然后由引導(dǎo)肽將蛋白質(zhì)導(dǎo)向靶位點(diǎn)，然后基本上在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮作用。

2.1.5 蛋白疏水性/親水性分析 如圖6所示，通過(guò)PROTSCALE來(lái)預(yù)測(cè)BvGSTU9蛋白的疏水系數(shù)。結(jié)果表明，其親水性最強(qiáng)值為-2.70；疏水性最強(qiáng)值為2.35，親水平均值為-0.246。總體來(lái)看，該蛋白親水性表現(xiàn)較強(qiáng)，為親水蛋白。

圖6 BvGSTU9蛋白的親疏水性

2.1.6 甜菜BvGSTU9蛋白二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 根據(jù)SOPMA預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)（圖7），結(jié)構(gòu)表明該蛋白質(zhì)主要由α-螺旋、β-折疊、無(wú)規(guī)則卷曲、和延伸鏈組成，其中α-螺旋占50.45%，β-折疊為5.36%，無(wú)規(guī)則卷曲為27.68%，延伸鏈為16.52%。將甜菜BvGSTU9的氨基酸序列提交到SWISSMODEL在線軟件，采用同源建模法，預(yù)測(cè)該蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)（圖8）。結(jié)果顯示，該蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)主要由α-螺旋、無(wú)規(guī)則卷曲、折疊結(jié)構(gòu)構(gòu)成，與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果基本一致。

圖7 甜菜BvGSTU9蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

圖8 甜菜BvGSTU9蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

2.2 鎘脅迫下甜菜BvGSTU9基因的表達(dá)分析

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，甜菜BvGSTU9基因在未受鎘脅迫植株中表達(dá)量較低。0.1 mmol/L和0.5 mmol/L鎘脅迫后，BvGSTU9基因相對(duì)表達(dá)量明顯升高，在處理12 h時(shí)達(dá)到最大值，相對(duì)表達(dá)量較0 h上升了4倍左右，之后表達(dá)量下降。鎘脅迫處理濃度為1.0 mmol/L時(shí)，相對(duì)表達(dá)量在12 h最高，到24 h時(shí)相對(duì)表達(dá)量已經(jīng)低于對(duì)照（圖9）。這說(shuō)明該基因與鎘脅迫存在著一定的應(yīng)答關(guān)系。

圖9 甜菜BvGSTU9基因在不同濃度、不同時(shí)間梯度下的表達(dá)分析

3 討論與結(jié)論

在重金屬的脅迫下，植物體對(duì)所需離子的吸收、運(yùn)輸、滲透和調(diào)節(jié)等過(guò)程會(huì)受到影響，從而影響細(xì)胞代謝，導(dǎo)致植物生長(zhǎng)發(fā)育受阻。而植物GST基因在植物耐逆性發(fā)揮重要作用，該基因在非生物脅迫條件下被誘導(dǎo)表達(dá)，同時(shí)參與植物細(xì)胞的外源性解毒與內(nèi)源性代謝，并發(fā)揮谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的作用，催化GSH與有害物質(zhì)的結(jié)合，最終解除外源有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的損害[22]。Tripathi等[23]鑒定了水稻中的兩種谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶，它們?cè)诟勘磉_(dá)較為明顯，有助于鎘離子的封存。Srivastava等[24]在前人的研究基礎(chǔ)上，將擬南芥中的OSGSTU30進(jìn)行轉(zhuǎn)化，結(jié)果顯示該基因在應(yīng)對(duì)鎘逆境脅迫和干旱脅迫可以發(fā)揮作用。戚元成等[25]從鹽地堿蓬中克隆并轉(zhuǎn)化擬南芥，轉(zhuǎn)基因擬南芥在非生物性脅迫下GST基因過(guò)量表達(dá)，GST基因的過(guò)量表達(dá)能使鹽脅迫下轉(zhuǎn)基因擬南芥正常生長(zhǎng)。王景榮等[26]對(duì)甜瓜CmGST基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，同時(shí)在離子毒害時(shí)對(duì)CmGST基因的活性進(jìn)行表達(dá)量檢測(cè)，結(jié)果證明，CmGST基因參與了對(duì)根系分泌物介導(dǎo)的自毒脅迫響應(yīng)?？梢?jiàn)，GST在植物響應(yīng)生物逆境脅迫中發(fā)揮重要作用。

此外，植物GSTs的相對(duì)表達(dá)量和各種非生物性脅迫的應(yīng)對(duì)密切相關(guān)[27]，其中，含有Tau保守結(jié)構(gòu)域的GST亞家族基因，參與植物眾多的非生物性脅迫響應(yīng)。在前期對(duì)能源甜菜鎘逆境脅迫的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究中，發(fā)現(xiàn)BvGSTU9基因積極響應(yīng)鎘脅迫且顯著性相對(duì)較高。本研究以能源甜菜為材料，通過(guò)生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示BvGSTU9基因?qū)儆赥au類GST基因家族。該基因全長(zhǎng)925 bp，開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)675 bp，該基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)有224個(gè)氨基酸，與菠菜和藜麥GST蛋白的氨基酸序列相似度最高，其原因可能是這些植物同屬于藜科，推測(cè)其有相似的功能。Edwards等[28]研究結(jié)果中提到大多數(shù)GST基因定位于細(xì)胞質(zhì)，少部分定位于細(xì)胞核，BvGSTU9基因亞細(xì)胞定位于細(xì)胞質(zhì)，與其結(jié)論一致。前期實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)克隆和大腸桿菌體外重組表達(dá)甜菜目的基因BvGST，發(fā)現(xiàn)該基因可以在一定程度上提高宿主菌在鎘逆境下的生存率，并且過(guò)量表達(dá)的BvGST蛋白的酶活性被進(jìn)一步的誘導(dǎo)調(diào)控，從而提高了植株對(duì)非生物脅迫的耐受力[29]。為了進(jìn)一步研究甜菜BvGST基因在鎘逆境脅迫下的相對(duì)表達(dá)量變化情況，本研究用0.1、0.5、1.0 mmol/L的CdCl2處理后的甜菜進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR來(lái)檢測(cè)相對(duì)表達(dá)量的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在不同濃度的鎘脅迫處理?xiàng)l件下，均能誘導(dǎo)甜菜BvGSTU9基因表達(dá)上調(diào)，與以往研究結(jié)果基本一致。在相同處理時(shí)間條件下，CdCl2濃度為0.5 mmol/L時(shí)該基因的相對(duì)表達(dá)量達(dá)到最高值。隨著處理時(shí)間的增加，相對(duì)表達(dá)量整體呈現(xiàn)出先增加后減少的趨勢(shì)。由此推斷，甜菜BvGST基因可能參與應(yīng)對(duì)鎘脅迫，并在鎘逆境脅迫下發(fā)揮著重要的作用。

總之，本研究通過(guò)對(duì)甜菜BvGSTU9基因的生物信息學(xué)分析以及鎘逆境脅迫下的表達(dá)分析，結(jié)合以往的報(bào)道揭示了甜菜BvGSTU9基因在應(yīng)對(duì)鎘脅迫下可能響應(yīng)脅迫，證明了BvGSTU9基因是甜菜抗鎘脅迫重要的響應(yīng)基因。目前，已經(jīng)有較多關(guān)于GST生理生化活性與植物抗性的研究報(bào)道，不同類型的GST基因已被克隆并成功轉(zhuǎn)化到多種植物中，但是以甜菜為研究對(duì)象的研究并不是很充分，在今后的研究中需要深入了解其解毒機(jī)制，這對(duì)于緩解重金屬污染現(xiàn)狀以及提高甜菜產(chǎn)量和質(zhì)量的研究和進(jìn)一步對(duì)BvGST基因進(jìn)行研究奠定基礎(chǔ)。