范昆，付麗，張義坤，武海斌，孫瑞紅，曲健祿*

(1.山東省果樹研究所，山東泰安 271000；2.泰安市泰山風(fēng)景名勝區(qū)管理委員會桃花源管理區(qū))

桃枝枯病是桃樹的主要病害之一，隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整、效益農(nóng)業(yè)的發(fā)展，近年來發(fā)生、危害逐年加重，主要癥狀表現(xiàn)為春梢抽生后基部發(fā)黑，枝條逐漸枯死，樹勢減弱，甚至桃樹整株枯死，嚴(yán)重影響桃樹樹勢和產(chǎn)量，可造成桃樹減產(chǎn)20%～50%[1]。

目前，桃樹枝枯病的防治主要依靠化學(xué)防治方法。丁香菌酯是一種甲氧基丙烯酸甲酯類化合物，通過鎖住細胞色素b和c1之間的電子傳遞而阻止細胞的ATP合成，從而抑制其線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用。具有保護、治療、鏟除、滲透、內(nèi)吸活性作用，而且能在植物體內(nèi)、土壤和水中很快降解。辛菌胺，是一種環(huán)保型氨基酸類高分子聚合物殺菌劑，是新一代高科技、環(huán)保型、高效廣譜、低毒殺菌劑。辛菌胺的作用機理是在水溶液中能產(chǎn)生電離，親水基部分含有強烈的正電性，吸附通常呈負電的各類細菌、病毒從而抑制了細菌、病毒的繁殖，凝固病菌蛋白質(zhì)，使病菌酶系統(tǒng)變性，加上聚合物形成的薄膜堵塞了這部分微生物的離子通道，使其立即窒息死亡，從而達到最佳的殺菌效果。殺菌廣譜，具有內(nèi)吸性和極強的滲透性，還具有雙向輸導(dǎo)作用，同時具有保護、治療、鏟除和調(diào)養(yǎng)四大功能。

本研究對丁香菌酯和辛菌胺兩種不同作用機制的藥劑進行防治桃枝枯病研究，并對其進行科學(xué)復(fù)配，開展室內(nèi)聯(lián)合毒力測定并進行田間藥效試驗，篩選出對桃樹枝枯病具有明顯防效的新型配方制劑，以期提高病害防治的安全性和有效性，以及延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

供試藥劑：96%丁香菌酯原藥，吉林省八達農(nóng)藥有限公司；30%辛菌胺母藥，陜西省西安嘉科農(nóng)化有限公司；20%丁香菌酯懸浮劑200倍液，吉林省八達農(nóng)藥有限公司；1.2%辛菌胺醋酸鹽水劑，山東勝邦綠野化學(xué)有限公司；3%甲基硫菌靈糊劑，日本曹達株式會社；430g/L戊唑醇懸浮劑，安道麥馬克西姆有限公司。

丁香菌酯、辛菌胺原藥分別先用少量N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、丙酮溶解，配成10000μg/mL的母液，再以0.2%的體積分?jǐn)?shù)加入乳化劑Tween-80，于冰箱中4℃下貯藏備用，使用時以無菌水稀釋至適當(dāng)濃度。

供試病原菌及培養(yǎng)基：桃枝枯病菌(Phomopsisamygdali)；PSA培養(yǎng)基(馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，去離子水1000mL)。

1.2 試驗方法

1.2.1 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑對病原菌的室內(nèi)聯(lián)合毒力測定

單劑毒力測定方法[2]：先將供試藥劑配制成7個濃度梯度(丁香菌酯：0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg/kg；辛菌胺1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0mg/kg)。將病原菌于PDA培養(yǎng)基上26℃預(yù)培養(yǎng)4天，用直徑7mm的打孔器在靠近菌落邊緣的同一圓周上打取菌餅，接種到含有不同藥劑濃度的培養(yǎng)基平板上，每皿一片，置于26℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)4天，用十字交叉法測定各處理的菌落生長直徑，以清水為對照，每濃度處理重復(fù)4次。測定菌落徑向線性生長量，確定藥劑對菌落生長的抑制率。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑對菌株的有效抑制中濃度EC50值。

混配藥劑聯(lián)合毒力測定[3]： 在單劑毒力測定的基礎(chǔ)上，將供混配的丁香菌酯、辛菌胺按體積比例分別設(shè)置10∶1、5∶1 、2∶1 、1∶1、1∶2 、1∶5 、1∶10 、1∶15 、1∶20 、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40、1∶45、1∶50共15個配比，配制成最終質(zhì)量濃度為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/kg 7個系列濃度的含藥PDA培養(yǎng)基，確定藥劑對菌落生長的抑制率。每處理(每菌株每濃度水平)重復(fù)4次，以不加藥劑的PDA培養(yǎng)基作為對照，求出混配藥劑對菌株的有效抑制中濃度EC50值，利用孫云沛法(1960)計算混配劑的共毒系數(shù)CTC，評價混配劑的協(xié)同增效作用。

試驗數(shù)據(jù)均由Microsoft Excel 2003、DPS數(shù)據(jù)處理工作平臺進行統(tǒng)計分析，計算出每種藥劑的EC50值、95%置信限區(qū)間。

抑制生長率(%) = [(對照菌落直徑- 處理菌落直徑) / (對照菌落直徑-菌餅直徑) ]×100

毒力指數(shù)TI=(標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/供試藥劑EC50)×100

混配劑實際毒力指數(shù)ATI=(標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/混配制劑EC50)×100

混配劑理論毒力指數(shù)TTI=單劑A的TI × PA+單劑B的TI × PB(PA和PB分別為混配劑中有效成分的百分含量)

共毒系數(shù)CTC=混配劑的實際毒力指數(shù)ATI/混配劑的理論毒力指數(shù)TTI × 100

增效作用判斷：CTC≥120，具有增效作用；80

1.2.2 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑的田間藥效試驗

1.2.2.1 試驗園基本情況 試驗地點在山東省泰安市西苑莊桃園。田間試驗供試品種為倉方早生。樹齡均為7年，株行距為3m×4m，選取樹勢相當(dāng)、病情相近、管理措施一致的植株作為試材，歷年枝枯病發(fā)生較重。

1.2.2.2 試驗設(shè)計 按照1.2.1試驗獲得的丁香菌酯、辛菌胺最佳配比配制20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑。

20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑有效成分用量(下同)133.3、200、333.3mg/kg；20%丁香菌酯懸浮劑250mg/kg；1.2%辛菌胺醋酸鹽水劑60mg/kg；43%戊唑醇懸浮劑172mg/kg；70%甲基硫菌靈可濕性粉劑1000mg/kg及空白對照處理。每4株樹為一個小區(qū)，重復(fù)4次，小區(qū)隨機排列，并掛牌標(biāo)示。

1.2.2.3 試驗方法 于6月份發(fā)病初期進行葉面噴霧處理，每次施藥間隔10～15天，共施藥3次。最后一次施藥及其藥后14天調(diào)查各處理小區(qū)的發(fā)病率和病情指數(shù)，調(diào)查時每株樹東、南、西、北4個方向共80個新枝(每方向20個)，計算調(diào)查發(fā)病率和病情指數(shù)，采用DMRT法統(tǒng)計分析試驗結(jié)果，同時調(diào)查桃樹是否受所施藥劑的影響而產(chǎn)生藥害，以及藥害的癥狀類型和受害程度[4]。

桃枝枯病的田間病情分級分6 級，具體如下:0級，全株無病；1級，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條周長的50%，10%以下葉片凋萎；3級，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條周長的51%～100% ，11%～30% 葉片凋萎；5級，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條1 周，31%～50% 葉片凋萎，枝條輕度枯萎；7級，桃樹枝條病斑環(huán)繞枝條1周，51%～70% 葉片凋萎、落葉，枝條中度枯萎；9級，桃樹枝枝條病斑環(huán)繞枝條1周，70%以上葉片凋萎、落葉，枝條枯死。

病情指數(shù)、防效等參照黃國洋的方法，數(shù)據(jù)統(tǒng)計利用DPS軟件完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑對桃枝枯病病原菌的聯(lián)合毒力室內(nèi)測定結(jié)果

丁香菌酯、辛菌胺單劑及15個不同配比的混配藥劑對桃枝枯病菌的毒力測定結(jié)果見表1、2。結(jié)果表明，丁香菌酯、辛菌胺及其混配制劑，對桃枝枯病菌菌絲生長具有較強的抑制活性，其中丁香菌酯與辛菌胺的配比在1∶2～1∶45之間時，對供試病原菌的共毒系數(shù)均在120以上，表明這兩種殺菌劑在此配比下具有很好的協(xié)同增效作用，尤其是配比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20的共毒系數(shù)(CTC)分別為154.59、168.75、176.24、161.10，協(xié)同增效作用更為顯著。

表1 2種藥劑對桃枝枯病菌的毒力室內(nèi)測定結(jié)果

表2 丁香菌酯與辛菌胺不同比例混配對桃枝枯病菌的毒力室內(nèi)測定結(jié)果

2.2 丁香菌酯與辛菌胺混配藥劑對桃枝枯病的田間防治效果

綜合評價室內(nèi)聯(lián)合毒力測定結(jié)果，選擇1∶10作為丁香菌酯和辛菌胺的最佳復(fù)配比例，制備20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑用于田間藥效試驗。結(jié)果(表3)顯示，末次施藥當(dāng)日、藥后20天，20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑各藥劑處理對桃枝枯病防治效果分別為88.70～91.91%、91.05%～93.39%，均具有較好的田間防治效果，20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑有效成分用量333.3mg/kg的防效顯著優(yōu)于對照藥劑20%丁香菌酯SC 250mg/kg、1.2%辛菌胺醋酸鹽水劑60mg/kg、43%戊唑醇SC 172mg/kg、70%甲基硫菌靈WP 1000mg/kg的防治效果。

表3 20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑防治桃枝枯病的藥效結(jié)果

3 討論

丁香菌酯、辛菌胺具有不同的作用機制[5，6]，兩者復(fù)配可對病原菌多位點作用，擴大殺菌譜，提高防效，降低農(nóng)藥施用量，延緩抗藥性的產(chǎn)生。本試驗對兩種供試藥劑室內(nèi)聯(lián)合毒力測定結(jié)果表明，丁香菌酯、辛菌胺混配對桃枝枯病菌防治相對于單劑防治具有顯著的增效作用。從共毒系數(shù)來看，丁香菌酯與辛菌胺的配比在1∶2～1∶45之間時，對桃枝枯病菌的增效作用最為顯著。

綜合考慮室內(nèi)聯(lián)合毒力測定結(jié)果及田間實際用藥量的需要，選擇1∶10作為丁香菌酯、辛菌胺復(fù)配制劑的最佳復(fù)配比例，并按此比例進行復(fù)配制劑的制備和田間防病效果驗證。綜合考慮田間防效、有效成分用量成本及抗藥性風(fēng)險等因素，推薦20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑的最佳施用濃度為1500倍～600倍(有效成分用量133.3～333.3mg/kg)，使用前直接以成品制劑形式桶混，或直接單劑形式兌水混勻配置所需濃度，全植株均勻噴霧施用。

目前，未見有丁香菌酯與辛菌胺進行復(fù)配防治桃枝枯病的藥劑登記及文獻報道。通過不同作用機制藥劑的混配及新型藥劑的應(yīng)用，有利于擴大防治譜、延緩抗藥性的產(chǎn)生[3]。因此，20%丁香菌酯·辛菌胺水分散粒劑作為桃枝枯病防治及延緩病原菌抗藥性發(fā)生發(fā)展的混配制劑具有較好的推廣應(yīng)用潛力。然而，為進一步明確丁香菌酯與辛菌胺復(fù)配對桃枝枯病的防治效果，仍需開展多年多地區(qū)的田間試驗驗證。