王青青 王夢(mèng)雅

1.江蘇省中醫(yī)院研究院，江蘇 南京 210046；2.江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210046

蒲公英屬于菊科植物，具有利尿通淋、清熱解毒和消腫散結(jié)的功效。蒲公英飲片在臨床上得到廣泛應(yīng)用，為提高蒲公英飲片的質(zhì)量，本研究對(duì)其質(zhì)量評(píng)價(jià)及質(zhì)量控制進(jìn)行研究分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 選擇安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的高效液項(xiàng)色譜儀，型號(hào)為Agilent100、迪馬公司生產(chǎn)的色譜柱，型號(hào)為ODS，規(guī)格為5 μm。梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司生產(chǎn)的電子天平，型號(hào)為MS105DU。

1.2 材料 實(shí)驗(yàn)用材料選擇：甲醇、色譜純、三乙胺、甲酸、磷酸、磷酸二氫鈉、水純化水、分析純。實(shí)驗(yàn)用對(duì)照品為：中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供的咖啡酸。

1.3 方法 根據(jù)蒲公英中主要成分咖啡酸水溶性和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定咖啡酸的含量和得膏率作為指標(biāo)，將加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。并對(duì)水提工藝的的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行考察。

按照正交設(shè)計(jì)方案，稱取9份蒲公英原料25 g，加入相應(yīng)倍量的水，微沸之后回流提取，過(guò)濾并搖勻。從中提取5 mL，并通過(guò)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，廢去初濾液。對(duì)照品制備中，同樣使用精密測(cè)量?jī)x器進(jìn)行咖啡酸稱取，稱取量為7.2 mg，放置到50 mL量瓶中，加入甲醇到相應(yīng)刻度搖勻。精密量取2 mL，放置到10 mL量瓶中，再加入甲醇到刻度，搖勻。經(jīng)過(guò)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，廢去初濾液，得到對(duì)照品。

2 結(jié)果

將咖啡酸的含量作為蒲公英飲片質(zhì)量檢驗(yàn)的指標(biāo)，對(duì)超聲狀態(tài)下和回流狀態(tài)下兩種不同提取方法的蒲公英飲片中咖啡酸含量結(jié)果進(jìn)行分析，得到的結(jié)果沒(méi)有差異性，表明提取方法產(chǎn)生的影響不顯著。按照上述方法進(jìn)行操作之后得到，0.025 mg/mL的溶液，室溫放置一段時(shí)間，并在2 h、4 h、8 h、16 h和24 h等階段，分別進(jìn)行測(cè)定和計(jì)算，結(jié)果證明咖啡酸峰面積RSD為0.2%。證明樣品中咖啡酸的含量在24 h之內(nèi)具有穩(wěn)定性。按照建立方法，對(duì)不同產(chǎn)地的蒲公英藥材進(jìn)行炮制加工，制備成蒲公英飲片之后對(duì)含量測(cè)定，結(jié)果可以看出不同產(chǎn)地蒲公英制備的蒲公英飲片含量具有產(chǎn)一定，基本上在0.017%～0.065%之間，根據(jù)測(cè)定得到的結(jié)果，按照干燥品進(jìn)行計(jì)算，得到咖啡酸的含量不少于0.015%。特征圖譜如圖1所示。

基于特征成分關(guān)聯(lián)，對(duì)特征色譜中各特征成分進(jìn)行了相關(guān)性分析，選擇咖啡酸為基準(zhǔn)峰，并將其保留時(shí)間設(shè)定為1，計(jì)算特征峰為1～14，相對(duì)保留時(shí)間分別為0.543、0.823、0.912、0.930、0.965、1.000、1.236、1.392、1.472、1.533、1.947、2.125、2.169、2.717。

2.1 蒲公英飲片質(zhì)量評(píng)價(jià) 取材：中藥藥材產(chǎn)地廣泛，不同的生長(zhǎng)環(huán)境與獨(dú)特的栽培技術(shù)，使不同產(chǎn)地的藥材質(zhì)量會(huì)產(chǎn)生一定的差異性。在實(shí)際制備和生產(chǎn)蒲公英飲片的過(guò)程中，要選擇具有代表性的材料進(jìn)行投料。全覆蓋藥材產(chǎn)地，要對(duì)當(dāng)?shù)氐牡乩憝h(huán)境可能產(chǎn)生的影響進(jìn)行分析。中藥來(lái)源廣泛，因?yàn)槊Q而產(chǎn)生混淆的情況時(shí)有發(fā)生，對(duì)此，本研究從純正蒲公英的產(chǎn)地進(jìn)行取材，確保品質(zhì)的穩(wěn)定性。本研究過(guò)程中選擇的蒲公英材料來(lái)自于我國(guó)湖北、四川、河南和甘肅等地，使用DNA條形碼技術(shù)對(duì)蒲公英的品質(zhì)進(jìn)行鑒定，從源頭進(jìn)行材料質(zhì)量把關(guān)，測(cè)得蒲公英飲片的指標(biāo)與成分含量均符合我國(guó)頒布的《中國(guó)藥典》的要求，保證投料藥材的代表性與廣泛性，也保證了標(biāo)準(zhǔn)湯劑合理性和安全性[1]。

操作：本研究中的蒲公英飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑，嚴(yán)格按照國(guó)家中藥管理總局發(fā)布的《規(guī)范》中規(guī)定的工藝參數(shù)和研究數(shù)據(jù)進(jìn)行制備?；ㄈ~全草類藥物頭煎使用12倍量水，二煎使用10倍量水。蒲公英飲片的頭煎時(shí)間為30 min，二煎的時(shí)間為20 min。這種操作方法不僅保留蒲公英飲片原汁原味，同時(shí)又合理地使用現(xiàn)代化設(shè)備，制備出的蒲公英飲片以傳統(tǒng)的煎藥工藝作為基礎(chǔ)，同時(shí)提高藥物的整體質(zhì)量水平[2]。

品質(zhì)：此次研究采用標(biāo)準(zhǔn)化工藝，對(duì)蒲公英飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行制備，并且測(cè)定其中咖啡酸的含量，得到蒲公英飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑物質(zhì)傳遞的規(guī)律，從整體上把控了蒲公英飲片的質(zhì)量。指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率考察結(jié)果和指紋圖譜具有較高的相似度，考查結(jié)果證明對(duì)此次研究過(guò)程中制備的蒲公英飲片總體質(zhì)量有均一性和穩(wěn)定性，研究得到的數(shù)據(jù)有參考價(jià)值。

標(biāo)準(zhǔn)化蒲公英飲片制備和出膏率考察結(jié)果更是為后續(xù)蒲公英飲片藥物大量生產(chǎn)工藝優(yōu)化提供參考指標(biāo)，能夠有效縮短研發(fā)時(shí)間，并提高藥物整體品質(zhì)。

2.2 蒲公英飲片質(zhì)量控制 合理選擇提取溶劑：咖啡酸是蒲公英中最為重要的一種成分，根據(jù)《中國(guó)藥典》中對(duì)蒲公英的要用價(jià)值進(jìn)行分析中可以看出，咖啡酸成分的含量會(huì)影響到蒲公英的價(jià)值。而且，在單味藥物配方中，蒲公英經(jīng)過(guò)水蒸氣提取、濃縮、干燥和制備成飲片，在實(shí)驗(yàn)探究的過(guò)程中，如果提取溶劑為水，則咖啡酸的含量可能會(huì)受到水分的影響而出現(xiàn)含量變化。《中國(guó)藥典》規(guī)定蒲公英飲片中咖啡酸的含量在0.02%以上，本研究得出的蒲公英飲片中咖啡酸含量在0.04%以上，得膏率為20%以上。由此可以看出，合理選擇提取溶劑，不僅可以保證蒲公英飲片配方中咖啡酸含量高，又可以確保水溶性成分增多，是一種合理的提取方法[3]。

明確評(píng)價(jià)工藝指標(biāo)：根據(jù)蒲公英飲片制備領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)研究可以看出，如果有兩項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)同時(shí)存在，那么在蒲公英飲片質(zhì)量評(píng)定中，主要采用的方法為兩項(xiàng)指標(biāo)加權(quán)評(píng)價(jià)方法。這種評(píng)價(jià)方法能在兩項(xiàng)指標(biāo)變化趨勢(shì)不一致的情況下，突顯出優(yōu)越性。但是，在選擇工藝指標(biāo)時(shí)，主要是根據(jù)以往的工作經(jīng)驗(yàn)確定的。因?yàn)椴煌乃幉脑凇端幍洹分杏胁煌囊?guī)定，無(wú)論是藥理活性成分還是總體提取物對(duì)于最終產(chǎn)品的藥效會(huì)產(chǎn)生不同的影響[4]。根據(jù)本研究能看出，在實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有引入權(quán)重概念，主要是因?yàn)槠压嬈锌Х人岬暮恳钥偺崛∥锏暮恐笜?biāo)變化趨勢(shì)具有一致性。由此可以看出，本研究所采用的方法是一種有利于提高得膏率的方法，對(duì)于蒲公英飲片的質(zhì)量能起到較好的控制效果。

科學(xué)規(guī)定咖啡酸含量：根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域的資料研究可以看出，不同產(chǎn)地蒲公英其中含有的咖啡酸的含量會(huì)有較大的差異性。一般情況下，蒲公英中的咖啡酸含量會(huì)從0.10%～0.36%不等，所以，不同產(chǎn)地的蒲公英飲片作為有原料生產(chǎn)值得的配方中，咖啡酸含量也會(huì)參差不齊。制定完善的含量控制標(biāo)準(zhǔn)，是確保蒲公英飲片質(zhì)量的重要手段。

3 討論與結(jié)論

在本研究中，經(jīng)過(guò)測(cè)量得到原材料中咖啡酸含量為0.02%，多批樣品測(cè)定結(jié)果表明咖啡酸的含量均在0.04%以上。制備工藝最終得到蒲公英飲片的咖啡酸含量為0.04%，提取工藝的得到率為36%。所以，從理論上分析，蒲公英飲片和蒲公英原材料中的咖啡酸含量基本持平。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與理論折算有較大的差異性。而且，因?yàn)槠压⒅锌Х人峋哂腥苡谒奶匦?，在高溫條件下的正交試驗(yàn)中，具有不穩(wěn)定性。當(dāng)溫度回流到100攝氏度左右時(shí)，也會(huì)有其他成分轉(zhuǎn)化成為咖啡酸。根據(jù)相關(guān)規(guī)定可以得出，蒲公英咖啡酸不能低于0.02%，本研究所得到的蒲公英飲片中咖啡酸的含量不低于0.4 mg/g[5-7]。

在研究的過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)雖然嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定進(jìn)行操作，并將水溶劑作為蒲公英飲片的溶劑，在微沸騰狀態(tài)下提取1 h之后制備得到成品。但是，其中包括咖啡酸在內(nèi)的酚酸類有效成分仍有不穩(wěn)定性，并且遇光會(huì)分解。本實(shí)驗(yàn)制備蒲公英飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑按照《藥典》與相關(guān)技術(shù)要求中規(guī)定的工藝參數(shù)與數(shù)據(jù)進(jìn)行制備，花葉全草類藥物頭煎加水量為12倍，二煎加水量為10倍，飲片頭煎時(shí)間為30 min，二煎時(shí)間為20 min。這種藥物煎煮方法不僅能保留重要湯劑原本的特性，而且也運(yùn)用了現(xiàn)代煎藥設(shè)備，制備的蒲公英飲片湯劑基于傳統(tǒng)工藝，也實(shí)現(xiàn)了工藝優(yōu)化升級(jí)的目的。雖然其中咖啡酸的含量已經(jīng)超過(guò)《中國(guó)藥典》中關(guān)于蒲公英飲片中咖啡酸含量的規(guī)定，但是不能完全排除其他成分轉(zhuǎn)化影響。所以，其中是否有其他成分損失，蒲公英飲片配方的實(shí)際應(yīng)用質(zhì)量仍有待進(jìn)一步研究[8]。

綜上所述，本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)探究的方法，制備蒲公英飲片，并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行分析，探討出合理的蒲公英飲片質(zhì)量控制辦法，為今后相關(guān)領(lǐng)域的研究提供參考。