王小艷

(安陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，安陽 455000)

七制香附丸由醋香附、地黃、茯苓、白芍、黃芩等22味藥材組成，文獻(xiàn)表明[1]，香附具有疏肝解郁、理氣寬中的功效，為君藥，α-香附酮是其主要藥效物質(zhì)之一；白芍具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽的作用，為臣藥，芍藥苷是白芍的主要有效成分；黃芩清熱燥濕，為佐藥，黃芩苷是其主要活性成分?！吨袊幍洹?2015年版一部)[1]僅測定白芍的含量，對其他成分未進(jìn)行測定。為了更好地控制七制香附丸的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測定芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮的含量，為完善七制香附丸的質(zhì)量控制方法提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，美國Waters公司；XS205DU型電子天平，瑞士梅特勒-托利多有限公司。

1.2 試劑與樣品

芍藥苷(批號(hào)110736-201842，97.4%)，黃芩苷(批號(hào)110715-201821,95.4%),α-香附酮(批號(hào)110748-201815，99.7%)，購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈(色譜純，J.T.BAKER)。超純水為Molecular純水機(jī)制備。七制香附丸(安陽路德藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z41021221，規(guī)格6 g/袋)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱采用Waters ZORBAX eclipse XDB C18色譜柱(4.6×250 mm，5 μm)；乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫條件見表1；檢測器為waters 2998 PDA檢測器；檢測波長230 nm(芍藥苷)、280 nm(黃芩苷)、254 nm(α-香附酮)；流速1.0 ml/min；柱溫為30 ℃。在上述色譜條件下，色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫條件

A: 對照品;B: 樣品峰;C: 陰性對照樣品圖1 高效液相色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷、黃芩苷和α-香附酮適量，加70%甲醇配置成濃度分別為0.3095 mg/ml、0.0311 mg/ml、0.0629 mg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取樣品適量，研細(xì)，取約5 g，精密稱定，精密加入70%甲醇20 ml，稱定重量，超聲提取30 min，放至室溫，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，即得。

2.4 陰性對照樣品的制備

按處方制備缺白芍、黃芩、香附的陰性對照樣品，照“2.3”項(xiàng)下方法制備相應(yīng)陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液1、2、4、8、10、20 μl，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y，A)，進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸計(jì)算，結(jié)果見表2，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表2 各成分線性關(guān)系

2.6 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。測得芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮的RSD分別為0.40%、0.20%、0.40%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12 h測定。測得芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮峰面積的RSD分別為0.60%、0.70%、1.6%。表明樣品溶液在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

同一樣品按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”色譜條件測定。結(jié)果芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮含量的RSD分別為0.2%、0.1%、0.5%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品適量，研細(xì)，精密稱取2.6 g，共6份，分別精密加入芍藥苷對照品2.240 mg、黃芩苷對照品0.289 mg、α-香附酮對照品0.444 mg，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分析。計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率測定結(jié)果

2.10 樣品含量測定

精密稱取3批樣品，每批5 g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分析，測定含有量，結(jié)果見表4。

表4 各成分含有量測定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮對照品適量，加70%甲醇制成適當(dāng)濃度的溶液，以70%甲醇為空白，在190～800 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果表明，芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮分別在230 nm、280 nm、254 nm處有最大吸收，干擾少且穩(wěn)定。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，發(fā)現(xiàn)芍藥苷、黃芩苷、α-香附酮的最佳吸收波長分別為230 nm、280 nm、254 nm，所以采用PDA檢測器進(jìn)行檢測。

3.2 提取方法的選擇

本實(shí)驗(yàn)以不同比例的甲醇、乙醇為溶劑，以芍藥苷含量、黃芩苷含量和α-香附酮含量分別為指標(biāo)，觀察回流(0.5 h、1.0 h、1.5 h)、超聲(10 min、20 min、30 min、40 min)、冷浸(1 h、2 h、3 h)不同的提取方法，結(jié)果表明70%甲醇為提取溶劑時(shí)，芍藥苷含量、黃芩苷含量和α-香附酮含量都最高，超聲30 min即可提取完全。

3.3 流動(dòng)相的選擇

本研究考察了甲醇-水、甲醇-0.2%磷酸水、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸水等流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)以乙腈-0.2%磷酸水為流動(dòng)相的色譜圖基線更平穩(wěn)，峰型和分離度都比較好，所以確定其為流動(dòng)相。

4 結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定七制香附丸中芍藥苷、黃芩苷和α-香附酮含量的方法，并對該方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，進(jìn)行了陰性干擾試驗(yàn)對比，證明該方法簡單、可行。因此增加含量測定項(xiàng)目有助于進(jìn)一步完善七制香附丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高藥品的質(zhì)量。