王叢，梁群

(1.南通市中醫(yī)院，江蘇 南通；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱)

0 引言

膿毒癥(Sepsis)是重癥領(lǐng)域死亡率極高的疾病之一，其發(fā)病率全球每年新增數(shù)百萬(wàn)，其中超過(guò)1/4 的人死亡[1]。中醫(yī)將膿毒癥歸結(jié)為 “外感熱病”、“溫毒”、“疔瘡走黃”、“疽毒內(nèi)陷”的范疇。膿毒癥的發(fā)病機(jī)制是十分復(fù)雜的過(guò)程，與多種細(xì)胞因子、炎性遞質(zhì)和凝血系統(tǒng)的激活等有著十分密切的關(guān)系，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，關(guān)于膿毒癥的中醫(yī)藥研究也越來(lái)越深入。因單純西藥治療存在抗生素耐藥現(xiàn)象，故考慮中西醫(yī)結(jié)合治療能獲得更好的治療效果。隨著中醫(yī)藥在臨床及科學(xué)研究中的廣泛應(yīng)用，運(yùn)用中藥實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)治療膿毒癥成為研究熱點(diǎn)，為攻克此危重疾病提供新思路。金蕎麥合劑是南通市中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，具有清熱解毒、排膿生肌的作用。因金蕎麥中富含黃酮類、萜類、酶類及多種有效成分，在中醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中都有著廣泛的應(yīng)用[2]。本實(shí)驗(yàn)將金蕎麥合劑作用于膿毒癥急性肺損傷大鼠，運(yùn)用肺組織中炎性因子的變化證實(shí)金蕎麥治療膿毒癥急性肺損傷的作用機(jī)制，為中藥治療膿毒癥提供分子水平的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)別SD 雄性大鼠60 只(許可證號(hào)SCXK(京) 2016-0006)，由南通市中醫(yī)院合作實(shí)驗(yàn)室代為購(gòu)買，體重180g-220g。普通專用飼料喂養(yǎng)于溫度22℃±4℃，相對(duì)濕度40%-70%，自然光線的實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)過(guò)1 周的適應(yīng)性飼養(yǎng)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物及儀器

金蕎麥合劑(蘇藥制字Z04000162)是南通市中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，取金蕎麥單品按照中國(guó)藥典2005 版嚴(yán)格進(jìn)行制作主要成分金蕎麥，主要功效：清熱解毒，排膿生肌，劑量500mL/瓶，產(chǎn)品批號(hào)：20190830。實(shí)驗(yàn)室/檢驗(yàn)科儀器：離心機(jī)型號(hào)SORVALL ST8/8R，電子稱：哈爾濱量具廠生產(chǎn)。ADVIA240 全自動(dòng)生化分析儀(德國(guó)西門子)；CytoFLEX 流式細(xì)胞儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(Abcam公司)。

2 造模及試驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物模型制備

SPF 級(jí)SD 雄 性 大 鼠( 體 重：180-220g)60 只 隨 機(jī) 分 為空白組、模型組及實(shí)驗(yàn)組，各20 只。模型組與實(shí)驗(yàn)組采用于腹腔內(nèi)注射LPS 10mg/kg 并在氣管內(nèi)灌注 LPS 0.5mL/kg(20μg/mL)，觀察大鼠的一般狀態(tài)，稱量體重記錄大鼠呼吸頻率、豎毛、尿便情況等生命體征；建立膿毒癥急性肺損傷大鼠模型[3-4]。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法

SD 雄性大鼠60 只，隨機(jī)分為：空白組20 只、模型組20 只、金蕎麥組20 只。按照D2=D1×K2/K1×W1/W2，D 為藥物劑量，K 為常數(shù) (大鼠為 9.1 人為 1.6)動(dòng)物體質(zhì)量1(kg)換算大鼠用藥劑量?？瞻捉M：灌胃給予0.9%生理鹽水10mL/kg，早中晚各給藥1 次，連續(xù)干預(yù) 3 d。模型組：造模后灌胃給予0.9%生理鹽水10mL/kg；早中晚各給藥1 次，連續(xù)干預(yù) 3 d。實(shí)驗(yàn)組：造模后灌胃給予金蕎麥合劑10mL/kg；早中晚各給藥1 次，連續(xù)干預(yù) 3 d。

2.3 標(biāo)本采集及檢測(cè)

造模后2h 待大鼠麻醉蘇醒后開(kāi)始進(jìn)行觀察評(píng)分記錄生命體征，記為實(shí)驗(yàn)第1 天，試驗(yàn)周期為3 天，3 天后腹主動(dòng)脈采血進(jìn)行檢測(cè)，將大鼠放在體重稱上稱重，以10%水合氯醛(0.4 mL/100 g)腹腔麻醉，無(wú)睫毛反射后大鼠仰臥操作臺(tái)，固定門齒及四肢，胸腹部備皮，沿腹部正中線切開(kāi)向胸部剪開(kāi)，充分暴露肺臟，用組織剪將肺組織剪成所需大小的碎塊，部分肺組織液氮凍存，部分送病理包埋分別行HE 染色、ELISA 檢測(cè)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組膿毒癥急性肺損傷HE 染色觀察肺組織病理變化

如圖1 所示為大鼠肺組織HE 染色后病理學(xué)變化情況(100×)，空白組(1-1)：病理切片均肺泡完好，視野中未見(jiàn)肺泡塌陷，未見(jiàn)水腫、充血及炎性滲出液，未見(jiàn)明顯肺泡壁增厚。模型組(1-2)：不同程度的肺泡塌陷，炎性滲出及出血。金蕎麥干預(yù)組(1-3)：視野中視野中肺泡明顯充盈，塌陷減輕，水腫減輕，炎性滲出少，充血情況減輕。

3.2 膿毒癥急性肺損傷大鼠各項(xiàng)指標(biāo)的比較結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)模型組與空白組比較其炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10 釋放明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)說(shuō)明造模成功。當(dāng)金蕎麥組與模型組比較其炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10 釋放明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)說(shuō)明金蕎麥降低膿毒癥急性肺損傷大鼠肺組織炎性因子釋放(見(jiàn)表1)。

圖1 小鼠的肺組織病理改變

表1 各組膿毒癥大鼠炎性因子數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較

4 討論

因膿毒癥的死亡率一直居高不下使得膿毒癥備受醫(yī)學(xué)界關(guān)注，關(guān)于膿毒癥發(fā)病機(jī)制及治療手段的研究越來(lái)越多，膿毒癥的急性肺損傷是常見(jiàn)器官損傷之一，以出現(xiàn)肺水腫、肺不張、呼吸衰竭、出現(xiàn)低氧血癥為主要表現(xiàn)，其起病急、病程長(zhǎng)、預(yù)后差是急危重癥中死亡率高的疾病。近些年關(guān)于膿毒癥的研究證實(shí)其發(fā)病機(jī)制與炎癥、凝血、免疫等多方面因素相關(guān)。炎癥因子的激活不僅是膿毒癥發(fā)病機(jī)制同時(shí)是加重急性肺損傷的主要因素，有效控制急性肺損傷炎性因子的釋放，是治療膿毒癥急性肺損傷的有效手段之一[5-6]。膿毒癥治療主要以抗感染等對(duì)癥支持為主。在祖國(guó)醫(yī)學(xué)的記載中并沒(méi)有關(guān)于膿毒癥的論述，依據(jù)其疾病特點(diǎn)經(jīng)病因病機(jī)總結(jié)為“正虛毒損，脈絡(luò)瘀阻”，總結(jié)各醫(yī)家治療膿毒癥的觀點(diǎn)得出膿毒癥主要從清熱解毒、活血化瘀、通腑降濁、扶正固本四個(gè)方面進(jìn)行[7]。結(jié)合中醫(yī)理論中異病同治、同病異治的理論基礎(chǔ)，在治療上當(dāng)靈活變化，辨證論治，主次分明，精準(zhǔn)治療。

本實(shí)驗(yàn)研究中運(yùn)用南通市中醫(yī)院的院內(nèi)制劑金蕎麥合劑干預(yù)膿毒癥急性肺損傷大鼠，觀察大鼠肺組織中炎癥因子的變化，從而證實(shí)金蕎麥治療膿毒癥急性肺損傷的作用機(jī)制。金蕎麥合劑取金蕎麥單品制成，避免了因中藥復(fù)方制劑藥味多、成分極其復(fù)雜，加上配伍比例的不同，煎煮方法和時(shí)長(zhǎng)的不同帶來(lái)的研究困難，金蕎麥合劑方藥成分穩(wěn)定，避免中藥復(fù)方的弊端。其主要性狀為紅棕色液體，具有清熱解毒、排膿生肌的作用。起初金蕎麥合劑廣泛應(yīng)用于臨床治療肺癰，因其療效顯著目前臨床上用于肺膿腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管肺炎、肺炎、肺纖維化等疾病的治療，其中對(duì)治療肺膿腫有突出的療效[8-11]。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)金蕎麥中富含黃酮類、萜類、酶類及多種揮發(fā)性成分，在中醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中都有著廣泛的應(yīng)用[12]。金蕎麥中的有效成分黃酮類是在治療多種疾病時(shí)都具有積極作用，其中清除自由基抗氧化、抗菌、抗炎、抗腫瘤的作用被多方醫(yī)家所證實(shí)。本研究得出金蕎麥有效降低膿毒癥急性肺損傷大鼠炎癥反應(yīng)，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究為中醫(yī)藥治療膿毒癥又提供了有力的依據(jù)。為中醫(yī)藥治療急危重癥提供研究基礎(chǔ)。