趙立軍，姚順凱，張靜，林順全，馮波，李云

（1.四川省飼料工作總站，四川 成都 610041；2.四川省若爾蓋縣動(dòng)植物產(chǎn)品檢驗(yàn)檢疫站，四川 若爾蓋 624500）

β-受體激動(dòng)劑又叫β-興奮劑，也稱“瘦肉精”，臨床上常被用作止喘藥，因其具有加快畜禽生長(zhǎng)、降低動(dòng)物脂肪含量、提高瘦肉率等作用，在養(yǎng)殖中往往被非法使用［1-3］。β-受體激動(dòng)劑會(huì)在動(dòng)物組織中形成蓄積性殘留，通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人的肝、腎等內(nèi)臟器官產(chǎn)生毒副作用，造成肌肉震顫、心悸、眩暈、惡心等癥狀［4-5］。早在2002 年我國(guó)就明確將鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、西馬特羅、特布他林等β-受體激動(dòng)劑列為養(yǎng)殖環(huán)節(jié)禁用物質(zhì)。

為保證動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全，國(guó)家每年都將β-受體激動(dòng)劑類物質(zhì)列為重點(diǎn)監(jiān)控對(duì)象。盡管如此，仍有一些不法養(yǎng)殖場(chǎng)戶受利益驅(qū)使，違法使用“瘦肉精”類物質(zhì)，導(dǎo)致有毒有害畜產(chǎn)品流向市場(chǎng)、進(jìn)入百姓餐桌。因此，加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物尿液中β-受體激動(dòng)劑類物質(zhì)的快速準(zhǔn)確檢測(cè)十分必要［6-7］。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于動(dòng)物尿液中β-受體激動(dòng)劑類藥物多殘留分析一般采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)［8-9］和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)［10-11］等方法。該方法具有靈敏度高和準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)，但需要昂貴的儀器設(shè)備和專業(yè)的技術(shù)人員，檢測(cè)成本高，無(wú)法滿足基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)樣品進(jìn)行批量和快速檢測(cè)的需要［12-13］。

近年來(lái)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在國(guó)內(nèi)外農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)中得到廣泛普及，其所用設(shè)備成本低、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高［14-15］。商品化酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)速度快，可實(shí)現(xiàn)樣品的批量化檢測(cè)。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上針對(duì)動(dòng)物尿液中β-受體激動(dòng)劑的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒種類繁多，但產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊。操作人員由于對(duì)產(chǎn)品性質(zhì)、使用方法、注意事項(xiàng)等關(guān)鍵環(huán)節(jié)理解的偏差，往往造成檢測(cè)結(jié)果不正確、假陽(yáng)性率高，可能導(dǎo)致陽(yáng)性樣品流入市場(chǎng)［16］。

本文建立了酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的使用通則，將有效指導(dǎo)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)采購(gòu)和驗(yàn)收該類產(chǎn)品，規(guī)范操作人員的關(guān)鍵控制點(diǎn)，從而保障基層農(nóng)產(chǎn)品樣品的批量檢測(cè)和準(zhǔn)確檢測(cè)。

1 術(shù)語(yǔ)與定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本使用通則。

1.1 酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒 基于酶聯(lián)免疫技術(shù)研發(fā)的可用于檢測(cè)樣品中某種或某幾種化合物具體含量的產(chǎn)品，由多種化學(xué)或生物制品（如抗原、抗體、酶結(jié)合物、稀釋緩沖液等）組合而成。

1.2 靈敏度 試劑盒可從樣品中檢測(cè)出待測(cè)物的最低濃度，用檢測(cè)限來(lái)表示。

1.3 準(zhǔn)確度 測(cè)定值與真實(shí)值的接近程度，表示試劑盒分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，用添加回收率來(lái)表示。

1.4 精密度 在限定條件下，用某種分析方法重復(fù)測(cè)定同一均質(zhì)樣品所得測(cè)定值的彼此接近程度，表示分析結(jié)果的重現(xiàn)性，用變異系數(shù)表示。

1.5 定量限 符合準(zhǔn)確度和精密度要求的試劑盒可定量檢測(cè)的濃度。

2 產(chǎn)品質(zhì)量要求

2.1 外觀要求 試劑盒外包裝應(yīng)潔凈、無(wú)破損；內(nèi)包裝應(yīng)無(wú)破損、無(wú)裂痕、無(wú)滲漏。標(biāo)簽清晰，包括品名、批號(hào)、保存條件、檢測(cè)限、有效期信息。盒內(nèi)各組分完整，與說(shuō)明書(shū)描述一致。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 線性相關(guān)系數(shù)r≥0.99；拐點(diǎn)數(shù)≤2個(gè)。

2.3 靈敏度 靈敏度與說(shuō)明書(shū)標(biāo)注的靈敏度一致。

2.4 準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度范圍在60%～120%。

2.5 精密度 批內(nèi)變異系數(shù)≤15%；批間變異系數(shù)≤20%。

3 使用方法

3.1 樣品處理 若待檢動(dòng)物尿液澄清，則直接取樣品進(jìn)行檢測(cè)；若尿液渾濁，需過(guò)濾或離心后取上清液進(jìn)行檢測(cè)。

3.2 樣品檢測(cè) 取出所需酶標(biāo)板條和試劑置于平整的臺(tái)面上，放置至說(shuō)明書(shū)要求的溫度，并按照說(shuō)明書(shū)描述進(jìn)行操作，同時(shí)做添加回收率實(shí)驗(yàn)。

3.3 添加回收率實(shí)驗(yàn) 將空白樣品添加為各β-受體激動(dòng)劑定量限1 倍或2 倍的濃度，制備成陽(yáng)性樣品。取兩份同一濃度樣品按說(shuō)明書(shū)描述進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算后，得出添加回收率，其相對(duì)偏差應(yīng)不大于15%。

3.4 結(jié)果分析

3.4.1 百分吸光度的計(jì)算 百分吸光度等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的吸光度平均值（雙孔）除以零標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度平均值，再乘以100%。

3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光度為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品系列濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.4.3 定量分析 將樣品百分吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算所對(duì)應(yīng)的β-受體激動(dòng)劑濃度，再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣品中β-受體激動(dòng)劑藥物的實(shí)際濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性的樣品應(yīng)經(jīng)儀器確證方法進(jìn)行確證。

4 注意事項(xiàng)

4.1 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前應(yīng)檢查試劑盒的保存條件和有效期，仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)確認(rèn)其適用范圍，并按要求準(zhǔn)備所需器材。檢查試劑盒內(nèi)、外包裝是否潔凈、完整，標(biāo)簽是否清晰，材料、試劑是否齊全。

4.2 尿液樣品應(yīng)收集在潔凈干燥、不含任何防腐劑的塑料杯或玻璃容器中，并及時(shí)檢測(cè)；若不能及時(shí)檢測(cè)，可在2～8 ℃下冷藏保存24 h，若需長(zhǎng)期保存需置于-20 ℃以下冷凍，切忌反復(fù)凍融。

4.3 尿液樣品在檢測(cè)前需放置至試劑盒說(shuō)明書(shū)要求的溫度。

4.4 實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將所有試劑和所需板條的溫度放置至說(shuō)明書(shū)指定溫度，實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)配有溫控設(shè)施，避免陽(yáng)光直射。

4.5 取出需要數(shù)量的板條，將剩余的板條按說(shuō)明書(shū)要求存放。

4.6 實(shí)驗(yàn)前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否潔凈，避免污染。

4.7 每種試劑使用前均須搖勻，避免接觸皮膚。

4.8 實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同的試劑時(shí)應(yīng)更換吸頭。加液時(shí)應(yīng)避免吸頭觸碰板孔內(nèi)壁。

4.9 洗板過(guò)程中如出現(xiàn)板孔干燥，會(huì)造成標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈線性、重復(fù)性差。因此洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

4.10 部分產(chǎn)品恒溫孵育過(guò)程要求避光操作，應(yīng)將反應(yīng)板條置于暗處或用蓋板膜封住微孔板。

4.11 不得使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

4.12 嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)要求儲(chǔ)存試劑盒及未使用的試劑材料。