張亞茹 張偉濤 王 碩 李術(shù)娜 郭偉婷 王樹(shù)香 李紅亞*

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定071000；2.河北省畜牧總站，河北石家莊050035；3.石家莊市畜牧技術(shù)推廣站，河北石家莊050006）

近年來(lái)，因抗生素在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的廣泛應(yīng)用而引起的病原菌耐藥性、藥物殘留及環(huán)境污染等問(wèn)題日益凸顯。歐盟、日本和韓國(guó)等國(guó)家和地區(qū)已全面禁止抗生素類添加劑在動(dòng)物飼料中的應(yīng)用。2019年7月，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部亦發(fā)文公告自2020年起全面禁止抗生素類飼料添加劑。尋找安全且綠色的抗生素替代品成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。益生菌作為抗生素最有潛力的代替品之一，日益受到人們的廣泛關(guān)注。

益生菌是一類含有活菌或其代謝產(chǎn)物的生物制劑，因其具有安全可靠、無(wú)殘留、無(wú)抗藥性、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)而備受關(guān)注。大量研究表明益生菌的益生作用廣泛，除了能發(fā)揮抑菌作用外，還能調(diào)節(jié)腸道菌群組成、機(jī)體免疫機(jī)能、血糖和血脂代謝等功能。因此益生菌在食品保健、醫(yī)藥及畜牧養(yǎng)殖等領(lǐng)域中得到較好的應(yīng)用。芽孢桿菌除了能夠增強(qiáng)動(dòng)物免疫力、改善動(dòng)物體內(nèi)微生態(tài)環(huán)境、助消化等益生功能外，還具有產(chǎn)芽孢、快速繁殖、高耐受性等特點(diǎn)，被認(rèn)為是最有應(yīng)用前景的抗生素替代品之一。本課題組前期從西門塔爾牛新鮮糞便中篩選到了一株枯草芽孢桿菌N2-10，并證實(shí)該菌株能通過(guò)產(chǎn)生以脂肽類物質(zhì)為主的抑菌物質(zhì)來(lái)抑制大腸桿菌、沙門氏菌及金黃色葡萄球菌等病原菌。為進(jìn)一步全面評(píng)價(jià)枯草芽孢桿菌N2-10 的益生作用，本文就該菌株對(duì)胃腸道環(huán)境的耐受性、腸道黏附性、細(xì)胞表面疏水性、抗生素敏感性、體外抗氧化能力及產(chǎn)酶情況進(jìn)行體外評(píng)價(jià)，旨在為枯草芽孢桿菌N2-10 作為益生菌在畜牧養(yǎng)殖和飼料中的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)，以期為替代抗生素提供更多的選擇。

1 材料和方法

1.1 菌株與培養(yǎng)基

試驗(yàn)菌株：枯草芽孢桿菌N2-10菌株由本課題組分離；大腸桿菌（Escherichia coli）CICC-10004、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CICC10306 均購(gòu)自中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。以上菌株保存于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)牧與飼用微生物協(xié)同創(chuàng)新平臺(tái)。

營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）培養(yǎng)基：牛肉膏5.0 g、蛋白胨10.0 g、氯化鈉5.0 g，蒸餾水1 000 ml，pH值7.2～7.5。

營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）培養(yǎng)基：含2%瓊脂的固體NB 培養(yǎng)基。

發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉13.0 g、葡萄糖10.0 g、大豆粉13.0 g，蒸餾水1 000 ml。

1.2 菌株的發(fā)酵培養(yǎng)

將N2-10 菌株接種于NB 培養(yǎng)基中，于(37±0.5) ℃、150 r/min搖床培養(yǎng)18 h，制得芽孢桿菌N2-10菌液。以8%接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，相同培養(yǎng)條件下培養(yǎng)48 h，得發(fā)酵液。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 人工胃、腸液耐受性評(píng)價(jià)

參照劉秀俠等報(bào)道的方法配制人工胃液與腸液。配制后的溶液經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm）除菌，備用。分別將菌液按照10%的接種量（V/V）轉(zhuǎn)接至pH值2.0、3.0、4.0 的人工模擬胃液中，混勻，放入41 ℃恒溫水浴鍋中，不斷震蕩。5 min后計(jì)時(shí)，3 h后取出，平板計(jì)數(shù)，計(jì)算存活率。吸取1 ml經(jīng)pH值2人工胃液處理后的菌液，加入到9 ml人工腸液中，混勻，置于41 ℃恒溫水浴鍋中震蕩。5 min后開(kāi)始計(jì)時(shí)，4 h后取出，平板計(jì)數(shù)，計(jì)算存活率。以無(wú)菌水處理為對(duì)照，每組設(shè)3次平行。

1.3.2 腸道黏附性評(píng)價(jià)

1.3.2.1 菌懸液的制備及染色

分別將菌株N2-10、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌接種至NB 培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h 后，取菌液放于滅菌離心管中于4 ℃、4 500 r/min 離心10 min，收集菌體沉淀。用PBS溶液沖洗菌體3次，制成菌液。

取各菌液8 ml，分別與2 ml 10 μg/ml 的Hoechst 33258 染色液混勻，37 ℃下避光染色30 min，用PBS溶液沖洗2 次，收集各菌體懸浮于10 ml 的PBS 溶液中備用。

1.3.2.2 腸上皮細(xì)胞懸液的制備

腸上皮細(xì)胞的制備參照華榮虹等報(bào)道的方法：在超凈臺(tái)中，取10 cm的新鮮雞回腸，用無(wú)菌PBS溶液反復(fù)沖洗。將除凈內(nèi)容物的腸末端結(jié)扎，用蔗糖緩沖液灌入腸管至輕微膨脹，結(jié)扎腸段的另一端。室溫靜置30 min 后，解開(kāi)一端結(jié)扎線，棄去腸內(nèi)溶液，再注入EDTA 緩沖液（蔗糖緩沖液量的1/2）灌充后結(jié)扎。將腸段放入37 ℃的無(wú)菌PBS溶液中處理30 min，每隔3 min 輕揉腸壁。后將腸段中的EDTA 溶液收集至離心管中，縱向剪開(kāi)腸段，用載玻片輕刮黏膜表面到離心管中，反復(fù)吹打細(xì)胞懸液后，于4 ℃、3 000 r/min離心10 min，棄上清，沉淀用PBS 溶液懸浮離心反復(fù)洗滌3次，最后用10 ml PBS溶液懸浮，立刻用于黏附試驗(yàn)。

1.3.2.3 腸黏液蛋白的制備

腸黏液蛋白的制備參照張璐報(bào)道的方法：在超凈臺(tái)中，取15 cm 的新鮮雞回腸，先用PBS 溶液沖洗，然后在PBS溶液中剪開(kāi)腸管，洗滌，除去腸道內(nèi)容物。將腸段轉(zhuǎn)移至15 ml PBS溶液中，用載玻片輕刮腸黏膜表面的黏液不斷攪拌。在4 ℃、8 000 r/min離心15 min。吸取上清液至離心管中，加入2 倍體積的無(wú)水乙醇混勻，離心，收集沉淀。沉淀懸浮于15 ml PBS 溶液中，-20 ℃保存，待用。

1.3.2.4 細(xì)胞黏附性測(cè)定

采用熒光法測(cè)定菌株N2-10 對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附性。取已染色的菌液1 ml 與等量腸上皮細(xì)胞懸液混勻，37 ℃孵育1 h，3 000 r/min 離心10 min，收集沉淀。PBS 溶液懸浮洗滌4 次，最后將沉淀懸浮于5 ml PBS溶液中。測(cè)定菌懸液的熒光強(qiáng)度F1（激發(fā)波長(zhǎng)為340 nm，吸收波長(zhǎng)為460 nm）。以染色的菌液1 ml與4 ml PBS溶液的混懸液為對(duì)照F0，每組3個(gè)平行。

菌株對(duì)腸細(xì)胞的黏附率（%）=F1/F0×100

1.3.2.5 腸黏液蛋白黏附性測(cè)定

將腸黏液蛋白懸浮液于4 ℃條件下解凍，采用熒光法測(cè)定菌株N2-10 對(duì)腸黏液蛋白的黏附性。分別取1 ml黏液蛋白加入到10支1.5 ml離心管中，4 ℃過(guò)夜，蛋白包被在離心管上。棄上清液，用PBS 溶液洗滌2次，除去未包被好的黏液蛋白。分別取各染色菌液1 ml 加入到蛋白包被的離心管中，溫箱37 ℃孵育1 h 后棄去上清液，PBS 溶液洗滌2 次。再加入1 ml PBS 充分震蕩，使黏附在壁上的菌懸浮于PBS 中，測(cè)其熒光值F2。以染色的菌液1 ml 與4 ml PBS 的混懸液為對(duì)照F0，每組3個(gè)平行。

菌株對(duì)腸黏液蛋白黏附率（%）=F2/F0×100

1.3.2.6 競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)

參照張璐報(bào)道的方法，測(cè)定菌株N2-10對(duì)供試病原菌的黏附阻斷能力。分別取500 μl 染色的病原菌和500 μl 未染色的枯草芽孢桿菌N2-10 于包被好蛋白的離心管中，于37 ℃孵育1 h 后棄去上清液，洗滌離心管3次。加入1 ml PBS充分震蕩，使黏附在壁上的菌懸浮于PBS溶液中，測(cè)定熒光值F3，每組設(shè)置3個(gè)平行。以1.3.2.5中的F2為對(duì)照。

菌株對(duì)病原菌阻斷率（%）=F3/F2×100

1.3.3 細(xì)胞表面疏水性評(píng)價(jià)

參照碳烴化合物（BATH）黏著方法測(cè)定細(xì)胞表面的疏水性。取1 ml枯草芽孢桿菌N2-10菌液加入9 ml無(wú)菌PBS 溶液中，制成菌懸液。取2 ml 的菌懸液與2 ml的正十六烷混合于漩渦振蕩器上充分振蕩后靜置分層。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定水相部分在600 nm波長(zhǎng)下的吸光度值（OD1）。對(duì)照為不加正十六烷的菌懸液，測(cè)吸光度值為OD2。試驗(yàn)在1 h內(nèi)完成。

細(xì)胞表面疏水性（%）=（OD2-OD1）/OD2×100

1.3.4 抗生素敏感性評(píng)價(jià)

1.3.4.1 耐藥性測(cè)定

采用濾紙片抑菌圈法測(cè)定枯草芽孢桿菌N2-10對(duì)抗生素的敏感性。取4 ml 枯草芽孢桿菌N2-10 菌液加入到100 ml融化的NA培養(yǎng)基（45 ℃左右）中，搖勻后倒平板。待枯草芽孢桿菌N2-10 的指示菌平板凝固后，分別將吸有25 μg/ml抗生素溶液的滅菌濾紙片（直徑9 mm）以合適的間距置于平板上，每組3個(gè)平行。于37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄抑菌圈情況。

1.3.4.2 最小抑菌濃度（MIC）

參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)，采用平皿二倍稀釋法。向融化的NA培養(yǎng)基（45 ℃左右）中加入抗生素藥液至終濃度分別為100.0、50.0、25.0、12.5、6.25 μg/ml和3.0 μg/ml，倒平板。待平板凝固后，吸取枯草芽孢桿菌N2-10菌液70 μl 接種到不同濃度的抗生素平板上，涂布均勻，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落，無(wú)菌生長(zhǎng)的平皿中所含藥物的最小濃度即為最小抑菌濃度（MIC）。

1.3.5 體外抗氧化能力評(píng)價(jià)

1.3.5.1 鐵離子還原能力（ferric reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）測(cè)定

FRAP工作液的配制及測(cè)定參照孟歌等報(bào)道的方法，繪得Fe2+標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為y=0.606 9x-0.030 4，相關(guān)R2=0.998 3。

樣品FRAP 測(cè)定：取枯草芽孢桿菌N2-10 發(fā)酵液5 000 r/min、離心20 min。取100 μl 上清液加入到3.9 ml 2,4,6-三吡啶基三嗪(TPTZ)工作液中，經(jīng)35 ℃水浴30 min，593 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定OD 值。根據(jù)OD 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的Fe2+濃度，定義為FRAP值。

1.3.5.2 ABTS+自由基清除能力測(cè)定

ABTS+自由基工作液的制備：吸取176 μl 的140 mmol/l過(guò)硫酸鉀加入到10 ml ABTS（7 mmol/l）溶液中，室溫下避光反應(yīng)12 h。

ABTS+自由基清除能力的測(cè)定，參照孟歌等報(bào)道的方法，用60%體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液將ABTS+自由基工作液在734 nm 波長(zhǎng)下的吸光度值調(diào)至(0.700±0.020)。取100 μl 枯草芽孢桿菌N2-10 發(fā)酵上清液，加入到3.9 ml的ABTS+自由基工作液中，充分混勻，常溫放置10 min，測(cè)定其在734 nm 波長(zhǎng)下的OD 值（A1）。以添加100 μl 60%體積分?jǐn)?shù)的乙醇為空白對(duì)照（A0），每組設(shè)3 個(gè)平行。發(fā)酵上清液對(duì)ABTS+自由基的清除率用下列公式計(jì)算。

ABTS+自由基清除率（%）=（A0-A1）/A0×100

1.3.6 菌株體外產(chǎn)酶能力

挑取枯草芽孢桿菌N2-10 分別接種于產(chǎn)纖維素酶、淀粉酶和蛋白酶的鑒別培養(yǎng)基上，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以鑒別培養(yǎng)基平板上透明圈（或脫色圈）直徑的大小及快慢來(lái)定性檢測(cè)各種酶的產(chǎn)生情況。酶活力測(cè)定參照Fernandes等報(bào)道的方法。

1.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

采用Excel 2007 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用SPSS 23.0 軟件的one-way ANOVA 程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，以Duncan's法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05 和P＜0.01 作為差異顯著和極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 胃腸道耐受性評(píng)價(jià)

枯草芽孢桿菌N2-10 在體外模擬胃腸道環(huán)境中的存活率，如表1 所示。在pH 值2、3 的胃酸環(huán)境下，較對(duì)照存活率極顯著下降（P＜0.01），pH值4的胃酸環(huán)境下，存活率顯著下降（P＜0.05），但存活率均較高，在80%以上，且不同酸性環(huán)境下存活率差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明該菌對(duì)胃酸環(huán)境耐受力較強(qiáng)。將在pH值2 的人工胃液中處理3 h 后的菌株N2-10 繼續(xù)在人工腸液中處理4 h，菌株的存活率下降至36.1%。

表1 枯草芽孢桿菌N2-10在體外模擬胃腸道環(huán)境中的存活率

2.2 黏附性評(píng)價(jià)

枯草芽孢桿菌N2-10對(duì)雞腸上皮細(xì)胞、黏液蛋白的黏附性以及對(duì)2株供試病原菌的黏附阻斷能力，如表2 所示。菌株N2-10 對(duì)腸上皮細(xì)胞有極好的黏附性，黏附率為78.31%，極顯著高于大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的黏附率（P＜0.01）。同時(shí)，枯草芽孢桿菌N2-10 對(duì)腸黏液蛋白也表現(xiàn)出一定的黏附性，黏附率為45.50%，與金黃色葡萄球菌的黏附率45.12%相近，但極顯著低于大腸桿菌的黏附率96.19%（P＜0.01）?？莶菅挎邨U菌N2-10對(duì)2株供試病原菌均表現(xiàn)出黏附抑制作用，且對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制能力差異極顯著（P＜0.01）。其中，菌株N2-10 能完全阻斷金黃色葡萄球菌對(duì)腸黏液蛋白的黏附，對(duì)大腸桿菌有部分阻斷作用，阻斷率為58.40%。

表2 枯草芽孢桿菌N2-10的黏附性評(píng)價(jià)結(jié)果(%)

2.3 疏水性評(píng)價(jià)(見(jiàn)表3)

表3 枯草芽孢桿菌N2-10的細(xì)胞表面疏水性

枯草芽孢桿菌N2-10 的疏水率為31.9%，表明該菌株具有中度疏水性能，利于其在腸道內(nèi)定植。

2.4 抗生素敏感性(見(jiàn)表4)

表4 枯草芽孢桿菌N2-10對(duì)抗生素的敏感性

由表4可知，枯草芽孢桿菌N2-10對(duì)青霉素、氯霉素、慶大霉素、阿奇霉素和克林霉素敏感，而對(duì)四環(huán)素、磺胺類和頭孢類抗生素較不敏感。青霉素、氯霉素、慶大霉素、阿奇霉素和克林霉素對(duì)菌株N2-10的最小抑菌濃度（MIC）為3 μg/ml，四環(huán)素的MIC為50 μg/ml、磺胺甲噁唑和頭孢噻肟鈉的MIC為100 μg/ml。25 μg/ml慶大霉素和青霉素對(duì)N2-10菌株抑制作用最強(qiáng)，抑菌圈可達(dá)30 mm和27 mm。

2.5 體外抗氧化及產(chǎn)酶能力(見(jiàn)圖1、表5)

枯草芽孢桿菌N2-10 表現(xiàn)出較強(qiáng)的體外抗氧化活性：FRAP 為0.488 mmol/l，對(duì)ABTS+自由基的清除率可達(dá)90.47%（表5）。

N2-10 菌株還具有產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶及纖維素酶的能力。定性鑒別試驗(yàn)及酶活力測(cè)定結(jié)果分別如圖1和表5所示。

3 討論

不斷開(kāi)發(fā)新的菌種資源，并對(duì)菌株安全性和有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)是獲得更優(yōu)良的益生菌的必要前提和保障。本研究針對(duì)前期獲得能抑制腸道病原菌的枯草芽孢桿菌N2-10的體外益生特性進(jìn)行深入探討，以期為其作為益生菌在畜牧養(yǎng)殖和飼料生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

圖1 菌株產(chǎn)酶能力檢測(cè)結(jié)果

表5 枯草芽孢桿菌N2-10的抗氧化和產(chǎn)酶能力

首先，益生菌必須能耐受胃的酸性條件，才能到達(dá)結(jié)腸，使之處于可生存狀態(tài)，發(fā)揮其積極作用。這就要求益生菌除能耐受胃酸外，還要耐受腸道中膽鹽形成的高滲環(huán)境。人和動(dòng)物胃液酸性高，正常pH 值2.0，進(jìn)食后可達(dá)到4.0。本文研究發(fā)現(xiàn)菌株N2-10在含胃蛋白酶、pH值2～4范圍內(nèi)人工胃液中的存活率均在80%以上，與楊偉平等研究中的益生枯草芽孢桿菌的胃酸耐受能力相似，但明顯優(yōu)于周明等對(duì)豬源枯草芽孢桿菌的研究結(jié)果。雖然在pH值2的人工胃液中處理3 h 后，再經(jīng)人工腸液中處理4 h，菌株的存活率下降至36.1%，但是其對(duì)于腸道膽鹽環(huán)境的耐受性仍顯著優(yōu)于其他益生菌，如大腸桿菌Nissle 1917（EcN）。

其次，黏附性對(duì)于益生菌在腸道中的定植至關(guān)重要。優(yōu)良的黏附特性不僅可以確保益生菌避免因腸道的收縮和蠕動(dòng)而被迅速排出，還能阻斷病原體通過(guò)空間相互作用或特定的細(xì)胞受體堵塞而附著，從而將它們從腸道中清除。本文選取革蘭氏陰性菌大腸桿菌和革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌為供試病原菌，采用熒光法對(duì)比發(fā)現(xiàn)：枯草芽孢桿菌N2-10對(duì)雞上皮細(xì)胞的黏附性能遠(yuǎn)高于金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，對(duì)腸道黏液蛋白的黏附作用與金黃色葡萄球菌相似，但低于大腸桿菌。在競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)中，菌株N2-10能完全阻斷金黃色葡萄球菌對(duì)腸黏液蛋白的黏附，而對(duì)大腸桿菌表現(xiàn)出部分黏附抑制作用，阻斷率為58.4%。眾所周知，動(dòng)物腸道中生存著大量的微生物，這些微生物定植于腸道的黏膜表面，與腸道黏膜共同建立起一層穩(wěn)定的生物屏障。曾東等的研究則表明：黏附力較強(qiáng)的菌株能在宿主體內(nèi)很好地定植，并通過(guò)菌株的競(jìng)爭(zhēng)作用降低致病菌的黏附力。菌株N2-10 對(duì)腸上皮細(xì)胞和黏液蛋白黏附性能較佳，且對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均表現(xiàn)出黏附抑制作用。同時(shí)前期研究也表明：菌株能產(chǎn)生抑制大腸桿菌等病原菌的脂肽類抑制物質(zhì)，由此可推測(cè)：菌株N2-10進(jìn)入動(dòng)物腸道后，能黏附于腸黏膜表面而定植，并能明顯抑制致病菌黏附，甚至能通過(guò)產(chǎn)生脂肽類抑菌物質(zhì)殺死病菌，從而調(diào)節(jié)、改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，提高腸道微生態(tài)的穩(wěn)定性。另外，益生菌菌株的黏附通常與細(xì)胞表面的疏水性、細(xì)胞外成分和蛋白質(zhì)譜等性質(zhì)有關(guān)。具有高疏水性的細(xì)菌細(xì)胞通常與黏膜細(xì)胞有很強(qiáng)的相互作用。經(jīng)測(cè)定，菌株N2-10的疏水率為31.9%，表現(xiàn)出一定的疏水能力，這也解釋了菌株N2-10對(duì)腸上皮細(xì)胞和腸黏液蛋白的黏附作用。

再者，隨著益生菌的廣泛使用，其安全性成為人們廣泛關(guān)注的重點(diǎn)?？股孛舾行允欠治鼍暝趹?yīng)用中安全使用的重要特征。菌株N2-10 對(duì)多種類型的抗生素敏感，能保證其在使用過(guò)程中安全可控，防止因其過(guò)度增殖而造成危害。

此外，氧化應(yīng)激會(huì)破壞機(jī)體內(nèi)正常的氧化和抗氧化系統(tǒng)間的平衡，從而引起細(xì)胞和組織的生理和病理反應(yīng)。氧化應(yīng)激會(huì)影響畜禽的健康，降低生產(chǎn)性能，對(duì)畜牧生產(chǎn)造成較為廣泛的危害。人們?cè)诓粩嚅_(kāi)展抗氧化劑的研究，以減少氧化應(yīng)激給生產(chǎn)帶來(lái)的損失。本文通過(guò)FRAP和ABTS法測(cè)定了菌株N2-10的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)其FRAP能達(dá)到0.488 mmol/l，對(duì)ABTS+自由基的清除率可達(dá)到90.47%，與孟歌等報(bào)道的靈芝發(fā)酵液的抗氧化活性相當(dāng)。說(shuō)明了枯草芽孢桿菌N2-10可產(chǎn)生抗氧化活性物質(zhì)，能有效清除體內(nèi)過(guò)量自由基，從而提高機(jī)體免疫能力，具有對(duì)抗氧化應(yīng)激的潛力。

最后，益生菌定植后，它們會(huì)釋放相關(guān)的消化酶和其他必要的生長(zhǎng)因子，可促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)同化，從而防止腸道失調(diào)和促進(jìn)生長(zhǎng)。試驗(yàn)證明菌株N2-10 可產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶及纖維素酶，可在一定程度上促進(jìn)飼料營(yíng)養(yǎng)成分的消化代謝，提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能。

4 結(jié)論

綜上，枯草芽孢桿菌N2-10 耐受胃腸道內(nèi)環(huán)境、在腸道中定植、能阻斷病原菌金黃色葡萄球菌和大腸桿菌在腸道內(nèi)的黏附，并具有產(chǎn)酶和抗氧化活性，有較強(qiáng)的應(yīng)用潛力。