萬建華詹揚(yáng)楊妮胡旭李穎萌劉文君

江中牌健胃消食片所選用的藥材包含太子參、陳皮、山藥、麥芽（炒）、山楂，具有健胃消食的作用。其上市前的成年大鼠安評(píng)實(shí)驗(yàn)方案如下：低、中、高（1.65、3.30、4.95g/kg）3個(gè)劑量分別給藥2個(gè)月，給藥期間記錄體重變化，給藥結(jié)束分別檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、酚紅排泄率、紅細(xì)胞數(shù)量、白細(xì)胞數(shù)量，并對(duì)肝臟、脾臟、腎臟和胃進(jìn)行病理分析。由于該產(chǎn)品上市近30年，當(dāng)時(shí)的安評(píng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)現(xiàn)在來看不夠全面[1，2]，同時(shí)很多患者服用健胃消食片的劑量和周期超過藥品說明書的規(guī)定，因此有必要補(bǔ)充一個(gè)更高劑量更長(zhǎng)周期的毒性研究試驗(yàn)，為臨床安全用藥提供更充分的數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑江中牌健胃消食片（江中藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，0.8g/片，生藥含量約0.7g/片，生藥含量比例為87.5%，批號(hào)：19051026），臨用前使用純化水配制成70%的溶液。

1.2 主要儀器BC-2800vet 全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀（邁瑞醫(yī)療）；Chemray 240 血生化儀（深圳雷杜生命科技）；C3510 全自動(dòng)凝血分析儀（邁瑞醫(yī)療）。Epoch 酶標(biāo)檢測(cè)儀（BioTeK），Eclipse Ci 病理顯微鏡（Nikon 公司）；RM2126 石蠟切片機(jī)（Leica 公司）；石蠟包埋機(jī)。

1.3 動(dòng)物SPF級(jí)大鼠80 只，雌雄各半，體重180～220g，購自江西中醫(yī)藥大學(xué)，許可證號(hào)SCXK（贛）2018-0003。大鼠均飼養(yǎng)于江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的SPF級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，分籠飼養(yǎng)，每籠大鼠不超過5 只，自由攝食飲水，室溫控制在20℃～25℃，相對(duì)濕度維持在40%～70%，每天光照12h，黑暗處理12h，每小時(shí)通風(fēng)≥15次。

1.4 劑量設(shè)計(jì)江中健胃消食片成人臨床用藥劑量約為0.1g·kg-1·d-1，根據(jù)體重將大鼠隨機(jī)分為高劑量組和對(duì)照組，高劑量組給藥劑量約為10g/kg，為臨床劑量的100 倍。

1.5 分組和給藥將大鼠按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和高劑量組（10g/kg），每組40 只，雌雄各半，高劑量組大鼠給予健胃消食片水溶液（70%的濃度）灌胃，對(duì)照組給予等量純水，給藥體積均為15ml/kg，每日1次，每天進(jìn)行1次一般臨床觀察并定期測(cè)定體重和攝食量。連續(xù)給藥13 周和26 周后分別剖殺1/4和1/2 的大鼠，經(jīng)過4 周的恢復(fù)期后再剖殺1/4 的大鼠，分別進(jìn)行血液學(xué)、血生化、凝血功能檢測(cè)；解剖時(shí)稱量主要臟器的濕重并對(duì)臟器組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1.6 觀察與記錄指標(biāo)生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)：體重、攝食量、一般臨床特征。血液學(xué)指標(biāo)：白細(xì)胞數(shù)目（WBC）、淋巴細(xì)胞數(shù)目（Lypmh#）、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、血小板壓積(PCT)。血生化指標(biāo)：總膽紅素（TBIL）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（r-GT）、總膽汁酸（TBA）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。凝血功能指標(biāo)：凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、纖維蛋白原（FIB）。不同部位的臟器濕重和臟器系數(shù)：心臟、肝臟、脾臟、肺、腎、大腦、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢；組織病理學(xué)檢查部位：心臟、肝臟、脾臟、胃、腎、大腦、皮膚、十二指腸。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組計(jì)量資料用±s表示，比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健胃消食片對(duì)SD 大鼠一般狀況、體質(zhì)量、攝食量的影響給藥期間各組大鼠的自主活動(dòng)、飲水、攝食及二便均正常，精神狀態(tài)良好；毛色有光澤，口、鼻、眼未出現(xiàn)異常分泌物，皮膚也未出現(xiàn)過敏現(xiàn)象。各組成年大鼠在給藥后體重均保持穩(wěn)定增長(zhǎng)。從給藥第1 周至恢復(fù)期結(jié)束，給藥組雄性大鼠的體重低于對(duì)照組（P＜0.05 或P＜0.01）；從給藥第5 周至恢復(fù)期結(jié)束，給藥組雌性大鼠的體重低于對(duì)照組（P＜0.05 或P＜0.01），見圖1、2。

圖1 雄性SD 大鼠體重變化

圖2 雌性SD 大鼠體重變化

2.2 健胃消食片對(duì)SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響與對(duì)照組相比，在給藥中期，高劑量組雄性和雌性大鼠血常規(guī)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；給藥末期，高劑量組雄性大鼠WBC和Lymph#降低（P＜0.05），MCV和MCH 升高（P＜0.05）；雌性大鼠PCT 升高（P＜0.05）?；謴?fù)期結(jié)束時(shí)，指標(biāo)均恢復(fù)至正常水平，結(jié)果見表1、2。

2.3 健胃消食片對(duì)SD大鼠血生化及凝血功能的影響與對(duì)照組相比，在給藥中期，高劑量組雄性和雌性大鼠血生化和凝血指標(biāo)無明顯差異（P＞0.05）；給藥末期，高劑量組雄性大鼠TBA、HDL-C和APTT 降低（P＜0.05）；雌性大鼠TBIL、r-GT和FIB降低（P＜0.05），APTT 升高（P＜0.01）；恢復(fù)期結(jié)束，雌性大鼠TBIL 降低（P＜0.01），其它指標(biāo)均恢復(fù)至正常水平，見表3、4。

2.4 健胃消食片對(duì)SD大鼠臟器濕重和臟器系數(shù)的影響與對(duì)照組相比，在給藥中期，高劑量組雄性大鼠肝臟、大腦、腎臟、胸腺和附睪的濕重降低（P＜0.05），大腦和睪丸的臟器系數(shù)升高（P＜0.05）；雌性大鼠心臟、脾臟、胸腺的臟器系數(shù)升高（P＜0.05 或P＜0.01）。給藥末期，高劑量組雄性大鼠肝臟、脾臟、胸腺的濕重降低（P＜0.05 或P＜0.01），心臟、大腦、腎臟、肺、睪丸和附睪的臟器系數(shù)升高（P＜0.05 或P＜0.01）；雌性大鼠心臟和腎臟的臟器系數(shù)升高。恢復(fù)期結(jié)束，高劑量組雄性大鼠心臟和腎臟的臟器濕重降低（P＜0.05或P＜0.01），大腦的臟器系數(shù)升高（P＜0.05）；雌性大鼠胸腺的濕重降低，大腦、腎臟和卵巢的臟器系數(shù)升高（P＜0.05 或P＜0.01），見表5、6。

表1 各組雄鼠不同時(shí)間點(diǎn)血常規(guī)比較（±s）

表1 各組雄鼠不同時(shí)間點(diǎn)血常規(guī)比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05

指標(biāo) 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復(fù)期結(jié)束（每組5 只）對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組WBC（×109/L） 5.11±1.23 5.21±1.50 5.38±1.52 3.50±1.11a 8.13±1.57 9.48±3.85 Lymph#（×109/L） 4.12±0.89 4.56±1.12 4.25±1.34 2.68±0.79a 6.10±1.21 7.25±2.66 MCV（fl） 52.69±2.31 55.69±3.59 51.83±1.63 56.75±1.89a 55.63±3.44 53.85±1.79 MCH（pg） 18.21±0.51 18.11±0.32 16.64±0.65 18.33±0.60a 18.73±0.96 18.08±0.67 PCT（%） 0.40±0.04 0.44±0.07 0.44±0.08 0.44±0.05 0.64±0.06 0.62±0.04

表2 各組雌鼠不同時(shí)間點(diǎn)血常規(guī)比較（±s）

表2 各組雌鼠不同時(shí)間點(diǎn)血常規(guī)比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05

指標(biāo) 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復(fù)期結(jié)束（每組5 只）對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組WBC（×109/L） 4.15±1.21 4.35±0.69 3.69±1.16 4.05±0.76 5.48±1.14 6.03±1.31 Lymph#（×109/L） 3.21±0.51 3.11±0.42 3.00±0.96 3.18±0.55 4.33±0.70 4.83±0.85 MCV（fl） 54.23±2.11 57.10±4.20 58.04±1.72 54.2±2.30 57.53±3.35 58.53±2.40 MCH（pg） 17.89±0.22 17.66±1.20 18.74±0.53 17.38±0.66 19.58±1.47 19.95±0.84 PCT（%） 0.41±0.04 0.39±0.05 0.40±0.06 0.42±0.06a 0.60±0.07 0.59±0.05

表3 各組雄鼠不同時(shí)間點(diǎn)血生化與凝血功能比較（±s）

表3 各組雄鼠不同時(shí)間點(diǎn)血生化與凝血功能比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05

指標(biāo) 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復(fù)期結(jié)束（每組5 只）對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組TBA(μmol/L) 11.62±3.49 13.94±3.86 47.00±21.32 24.02±6.23a 30.75±11.59 27.43±10.63 TBIL(μmol/L) 12.84±1.90 11.71±1.55 10.30±1.47 10.39±1.07 10.68±2.02 10.40±1.82 HDL-C(mmol/L) 0.34±0.08 0.29±0.02 0.33±0.03 0.22±0.10a 0.24±0.12 0.19±0.70 r-GT(U/L) 2.26±0.51 2.61±1.30 3.78±1.07 4.32±0.38 3.73±0.48 3.98±0.47 APTT（s） 26.56±1.19 30.33±5.46 35.70±7.98 27.73±1.26a 30.32±3.96 30.88±3.89 FIB（g/L） 1.70±0.20 1.90±0.50 1.55±0.19 1.48±0.30 1.49±0.40 1.45±0.40

表4 各組雌鼠不同時(shí)間點(diǎn)血生化與凝血功能比較（±s）

表4 各組雌鼠不同時(shí)間點(diǎn)血生化與凝血功能比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05，bP＜0.01

指標(biāo) 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復(fù)期結(jié)束（每組5 只）對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組TBA(μmol/L) 27.93±16.93 26.45±7.45 28.65±15.32 58.85±29.73 36.50±18.35 29.83±6.62 TBIL(μmol/L) 15.33±3.46 12.30±2.43 10.96±2.88 10.89±0.92a 10.40±0.83 8.97±1.00b HDL-C(mmol/L) 0.46±0.08 0.41±0.16 0.43±0.19 0.31±0.18 0.34±0.09 0.33±0.18 r-GT(U/L) 1.94±0.96 2.75±1.20 4.04±0.51 3.63±0.71a 5.28±2.05 5.89±2.59 APTT（s） 28.43±1.71 28.63±1.40 29.65±3.79 34.83±2.82a 25.59±3.89 28.67±3.68 FIB（g/L） 1.25±0.30 1.13±0.13 1.15±0.13 0.90±0.08b 1.20±0.18 1.27±0.45

表5 各組雄鼠不同時(shí)間點(diǎn)臟器重量和系數(shù)比較（±s）

表5 各組雄鼠不同時(shí)間點(diǎn)臟器重量和系數(shù)比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05，bP＜0.01

臟器 指標(biāo) 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復(fù)期（每組5 只）對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組心臟 臟器重量 1.89±0.54 1.51±0.22 1.61±0.21 1.54±0.19 1.90±0.26 1.57±0.14a臟器系數(shù) 0.33±0.07 0.35±0.04 0.28±0.03 0.33±0.03b 0.33±0.04 0.32±0.02肝臟 臟器重量 14.93±2.94 10.47±1.61a 12.78±1.52 10.29±1.68b 12.29±1.63 11.79±1.70臟器系數(shù) 2.55±0.14 2.42±0.32 2.26±0.13 2.21±0.19 2.10±0.16 2.36±0.18a脾臟 臟器重量 1.15±0.18 0.97±0.32 1.03±0.14 0.80±0.11b 0.87±0.03 0.80±0.14臟器系數(shù) 0.20±0.01 0.22±0.06 0.18±0.03 0.17±0.01 0.15±0.01 0.16±0.02大腦 臟器重量 2.24±0.05 2.17±0.05a 2.11±0.11 2.02±0.24 2.17±0.18 2.18±0.08臟器系數(shù) 0.39±0.07 0.50±0.04a 0.37±0.03 0.44±0.04b 0.37±0.04 0.44±0.02a腎臟 臟器重量 1.86±0.31 1.46±0.24a 1.70±0.15 1.58±0.16 1.66±0.09 1.45±0.19a臟器系數(shù) 0.32±0.02 0.34±0.04 0.30±0.03 0.34±0.02b 0.29±0.02 0.29±0.03肺 臟器重量 2.23±0.28 1.95±0.70 2.08±0.19 2.00±0.24 2.25±0.09 1.86±0.16b臟器系數(shù) 0.39±0.06 0.45±0.14 0.37±0.02 0.43±0.04b 0.39±0.03 0.37±0.02胸腺 臟器重量 0.63±0.09 0.41±0.09a 0.35±0.13 0.24±0.04a 0.33±0.09 0.27±0.10臟器系數(shù) 0.09±0.05 0.09±0.02 0.06±0.03 0.05±0.01 0.06±0.02 0.05±0.02腎上腺 臟器重量 0.09±0.06 0.07±0.01 0.04±0.01 0.04±0.01 0.03±0.02 0.04±0.01臟器系數(shù) 0.02±0.01 0.02±0.00 0.01±0.00 0.01±0.00a 0.01±0.00 0.01±0.00睪丸 臟器重量 3.50±0.50 3.71±0.58 3.43±0.72 3.71±0.42 3.76±0.24 3.69±0.24臟器系數(shù) 0.62±0.16 0.86±0.10a 0.61±0.13 0.80±0.07b 0.65±0.07 0.74±0.08附睪 臟器重量 0.93±0.15 0.70±0.04a 0.85±0.06 0.83±0.09 0.85±0.09 0.78±0.12臟器系數(shù) 0.17±0.05 0.16±0.01 0.15±0.02 0.18±0.02b 0.15±0.02 0.16±0.03

表6 各組雌鼠不同時(shí)間點(diǎn)臟器重量和系數(shù)比較（±s）

表6 各組雌鼠不同時(shí)間點(diǎn)臟器重量和系數(shù)比較（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05，bP＜0.01

臟器 指標(biāo) 給藥中期（每組5 只） 給藥末期（每組10 只） 恢復(fù)期（每組5 只）對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組 對(duì)照組 高劑量組心臟 臟器重量 0.96±0.12 1.02±0.11 1.10±0.09 1.08±0.14 1.28±0.13 1.15±0.16臟器系數(shù) 0.35±0.02 0.38±0.02a 0.33±0.02 0.37±0.04b 0.36±0.04 0.36±0.04肝臟 臟器重量 7.85±0.74 7.74±1.46 8.35±1.02 7.50±0.95 9.16±0.59 8.39±1.08臟器系數(shù) 2.84±0.07 2.90±0.32 2.49±0.25 2.54±0.14 2.59±0.21 2.67±0.40脾臟 臟器重量 0.62±0.03 0.67±0.08 0.68±0.11 0.61±0.08 0.67±0.08 0.65±0.04臟器系數(shù) 0.19±0.00 0.25±0.02b 0.20±0.03 0.21±0.03 0.19±0.02 0.21±0.02大腦 臟器重量 2.02±0.19 1.99±0.18 1.94±0.11 1.85±0.10 2.01±0.13 1.97±0.06臟器系數(shù) 0.73±0.06 0.75±0.07 0.58±0.05 0.63±0.08 0.57±0.04 0.63±0.04a肺 臟器重量 1.33±0.11 1.40±0.15 1.69±0.22 1.52±0.31 1.86±0.31 1.86±0.32臟器系數(shù) 0.48±0.09 0.53±0.02 0.51±0.07 0.52±0.13 0.53±0.08 0.59±0.08腎臟 臟器重量 0.96±0.12 0.94±0.13 1.08±0.11 1.02±0.12 1.13±0.11 1.14±0.08臟器系數(shù) 0.35±0.02 0.35±0.02 0.32±0.02 0.35±0.01b 0.32±0.03 0.36±0.01a胸腺 臟器重量 0.25±0.08 0.25±0.08 0.29±0.12 0.24±0.04 0.26±0.01 0.18±0.06a臟器系數(shù) 0.09±0.04 0.12±0.04a 0.09±0.03 0.08±0.01 0.07±0.00 0.06±0.02腎上腺 臟器重量 0.06±0.02 0.09±0.03 0.04±0.01 0.04±0.01 0.03±0.01 0.04±0.01臟器系數(shù) 0.02±0.00 0.03±0.02 0.01±0.00 0.01±0.00 0.01±0.00 0.01±0.00卵巢 臟器重量 0.28±0.08 0.22±0.09 0.22±0.09 0.23±0.08 0.24±0.01 0.25±0.01臟器系數(shù) 0.10±0.02 0.08±0.04 0.07±0.03 0.08±0.02 0.07±0.00 0.08±0.01b子宮 臟器重量 0.73±0.17 1.17±0.67 0.79±0.18 0.82±0.41 0.89±0.31 0.79±0.30臟器系數(shù) 0.26±0.05 0.46±0.30 0.23±0.05 0.30±0.15 0.25±0.09 0.25±0.09

2.5 健胃消食片對(duì)SD大鼠臟器組織病理的影響在給藥中期、給藥末期和恢復(fù)期結(jié)束時(shí)分別剖殺大鼠，對(duì)其主要臟器進(jìn)行病理分析發(fā)現(xiàn)，高劑量組和對(duì)照組胃和十二指腸均出現(xiàn)了輕微上皮細(xì)胞脫落，脾臟局部可見脾小結(jié)擴(kuò)張，肝臟膽管輕度增生等，上述病變表現(xiàn)的程度均較輕微，在各時(shí)期出現(xiàn)病變大鼠的數(shù)量和病變程度也未見明顯差異。

3 討論

研究結(jié)果顯示，從給藥開始，高劑量組大鼠體重增長(zhǎng)相對(duì)于對(duì)照組明顯減緩，認(rèn)為長(zhǎng)期高劑量服用健胃消食片可延緩實(shí)驗(yàn)大鼠的體重增長(zhǎng)。

給藥中期，高劑量組和對(duì)照組的血常規(guī)、血生化和凝血功能相比較，均無異常波動(dòng)；給藥末期，高劑量組的血常規(guī)、血生化和凝血功能中的少數(shù)指標(biāo)出現(xiàn)了輕微波動(dòng)；恢復(fù)期結(jié)束，高劑量組所有血常規(guī)、凝血功能及生化指標(biāo)絕大多數(shù)恢復(fù)正常。這提示長(zhǎng)期高劑量服用健胃消食片可對(duì)大鼠血常規(guī)、血生化和凝血功能產(chǎn)生影響，但幅度較輕微，且大多未偏離文獻(xiàn)報(bào)道的同齡大鼠數(shù)值范圍[3～7]，同時(shí)這種影響在停藥后大多可逆，不構(gòu)成永久性機(jī)體損傷。

同時(shí)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)的不同時(shí)期發(fā)現(xiàn)大鼠多個(gè)臟器的濕重和臟器系數(shù)出現(xiàn)異常波動(dòng)[8，9]，但呈現(xiàn)一個(gè)共同的規(guī)律，即高劑量組相對(duì)于對(duì)照組臟器濕重降低，臟器系數(shù)升高。已有研究表明一些影響動(dòng)物食欲或消化吸收的藥物可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重增長(zhǎng)明顯減緩，同時(shí)臟器濕重增加也會(huì)減緩，但體重增長(zhǎng)減緩的幅度要比臟器濕重減緩的幅度大許多，這時(shí)相關(guān)的臟器系數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)會(huì)出現(xiàn)不能準(zhǔn)確反映檢驗(yàn)者目的的顯著性差異[10，11]。結(jié)合本次實(shí)驗(yàn)高劑量組大鼠體重增長(zhǎng)明顯減緩，因此推斷這次實(shí)驗(yàn)臟器濕重降低和臟器系數(shù)升高多是由此導(dǎo)致的。而且主要臟器的病理分析顯示，高劑量組大鼠主要臟器的病理檢查未發(fā)現(xiàn)異常，多為自發(fā)性病變[12～15]，基本可判定臟器濕重和臟器系數(shù)的異常波動(dòng)無毒性意義。

綜上，10g/kg 高劑量健胃消食片灌胃26 周對(duì)幼齡期SD 大鼠的肝功能指標(biāo)和凝血指標(biāo)具有輕微影響，但無明顯毒性反應(yīng)；同時(shí)未對(duì)臟器產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性的損傷。故認(rèn)為健胃消食片的無毒性反應(yīng)劑量（no observed adverse effect level, NOAEL）不低于10g/kg，相當(dāng)于臨床成人劑量的100 倍。