譚勇，黃鼎，杜沛霖*，黃榮韶，黃國(guó)林，姚紹嫦，趙立春，俞鵬

1.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530200；2.廣西壯瑤藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530200

龍珠果PassiflorafoetidaL.為西番蓮科西番蓮屬多年生草質(zhì)藤本植物。該植物多生長(zhǎng)于海拔60～150 m的荒山草坡或灌叢中，分布在我國(guó)的福建、臺(tái)灣、廣東、海南、廣西、云南等省[1]。其果實(shí)甘甜可食，以地上部分入藥，具有清熱解毒、清肺止咳之功效，臨床多用于治療肺熱咳嗽、小便混濁、癰瘡腫毒、外傷性眼角膜炎、淋巴結(jié)炎等癥[2]。龍珠果中主要含有黃酮類化合物，其中主要成分有牡荊素、異牡荊素、葒草素、異葒草素等[3]。中藥揮發(fā)油具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌等藥效[4-6]。已有研究表明，同種藥材不同藥用部位揮發(fā)油含量存在差異[7]。目前關(guān)于龍珠果揮發(fā)油的研究尚未見報(bào)道。因此，本研究采用氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)分析龍珠果不同部位揮發(fā)油含量，為其品質(zhì)評(píng)價(jià)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

1 材料

1.1 試藥

龍珠果藥材采于南寧市良慶區(qū)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定學(xué)教研室譚勇教授鑒定為西番蓮科植物龍珠果Passiflorafoetida L.全草，標(biāo)本保存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定實(shí)驗(yàn)室(ZJ201903)；乙酸乙酯(分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司)。

1.2 儀器

FW177型中藥粉碎機(jī)(永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司)；ALC-210.2型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；TSQ8000EVO型高靈敏度串接氣質(zhì)連用儀(賽默飛世爾科技有限公司)。

2 方法

2.1 色譜條件

采用TG-SQC色譜柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，柱溫采用程序升溫，初始溫度為40 ℃，保持1 min；然后以8 ℃·min-1的速度升至300 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度為280 ℃，采用不分流模式，載氣為氦氣(99.999%)，流量1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量1 μL。

2.2 質(zhì)譜條件

Trace1300s TSQ8000氣質(zhì)聯(lián)用儀，電子轟擊離子源(EI)；離子源溫度300 ℃；掃描質(zhì)量為m/z50～450。

2.3 樣品溶液制備

分別取龍珠果的果實(shí)、萼片、莖、葉新鮮材料，切碎后分別取5 g樣品置于100 mL錐形瓶中，加乙酸乙酯20 mL浸泡2 h，4000 r·min-1離心5 min(離心半徑為13.5 cm)，精密吸取上清液1 mL，微孔濾膜濾過，續(xù)濾液用無(wú)水硫酸鈉除水，即得到龍珠果各部位揮發(fā)性成分，收率分別為0.17%、0.08%、0.11%、0.05%。

2.4 質(zhì)譜信息檢索

對(duì)樣品進(jìn)行GC-MS分析后得到總離子流圖，各分離組分利用mainlib質(zhì)譜庫(kù)檢索，結(jié)合相對(duì)保留時(shí)間和相關(guān)參考文獻(xiàn)確定化學(xué)成分。

3 結(jié)果與分析

3.1 龍珠果不同部位揮發(fā)性成分GC-MS圖及化合物信息

經(jīng)數(shù)據(jù)處理并用峰面積歸一化法，從總離子流色譜圖(見圖1)中計(jì)算各組分的相對(duì)含量，將各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)mainlib質(zhì)譜庫(kù)檢索，結(jié)合保留時(shí)間(tR)和文獻(xiàn)報(bào)道[6]，初步鑒定出了31種化合物(見表1)。

注：A.根；B.莖；C.萼片；D.葉。圖1 龍珠果不同部位揮發(fā)性成分的GC-MS總離子流圖

表1 龍珠果不同部位揮發(fā)性成分比較

續(xù)表1

3.2 龍珠果不同部位揮發(fā)性成分分析

按表1所列出的化合物信息，龍珠果揮發(fā)性成分有6種類型：醛類、醇類、酮類、烯類、烷烴類、苯類。

龍珠果果實(shí)中共鑒定出13種化合物，相對(duì)含量之和占果實(shí)中揮發(fā)性成分總量的79.33%。其中相對(duì)含量較高的化合物有2-甲基-Z，Z-3，13-二烯醇(36.31%)、正二十一烷(20.53%)、二十五烷(4.17%)、6-壬基-5，6-二氫-2氫-吡喃-2-酮(4.14%)、角鯊烯(4.03%)。

龍珠果萼片中共鑒定出15種化合物，相對(duì)含量之和占萼片中揮發(fā)性成分總量的88.03%。其中相對(duì)含量較高的化合物有2-甲基-Z，Z-3，13-二烯醇(21.38%)、6-壬基-5，6-二氫-2氫-吡喃-2-酮(19.71%)、正二十一烷(12.76%)、乙酸銨(12.76%)、二十五烷(9.54%)。

龍珠果莖中共鑒定出12種化合物，相對(duì)含量之和占莖中揮發(fā)性成分總量的94.99%。其中相對(duì)含量較高的化合物有2-甲基-Z，Z-3，13-二烯醇(34.83%)、正二十一烷(28.92%)、甲苯(18.98%)、1，3，5-環(huán)庚三烯(5.17%)、二十五烷(2.02%)。

龍珠果葉中共鑒定出12種化合物，相對(duì)含量之和占葉中揮發(fā)性成分總量的84.12%。其中相對(duì)含量較高的化合物有2-甲基-Z，Z-3，13-二烯醇(33.73%)、正二十一烷(17.99%)、二十五烷(9.69%)、甲苯(14.79%)。

其中，龍珠果果實(shí)、萼片、莖、葉有3個(gè)共有成分，分別為二十五烷、2-甲基-Z，Z-3，13-二烯醇、正二十一烷，但是含量存在一定差異。龍珠果的果實(shí)、萼片、莖、葉有14個(gè)特有成分。特有成分占揮發(fā)性成分的45.16%，表明龍珠果的不同部位成分差異較大。

4 討論

已有研究表明，龍珠果干燥葉中牡荊素質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0.073%)是干燥莖中質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0.004 1%)的17.8倍，說明不同部位有效成分含量存在差異[8]。本研究采用GC-MS分析龍珠果果實(shí)、萼片、莖、葉4個(gè)不同部位的揮發(fā)性成分，共鑒定出31個(gè)成分。龍珠果不同部位有3個(gè)共有成分，相對(duì)含量存在一定差異；有14個(gè)成分是龍珠果不同部位所特有的。表明龍珠果不同部位揮發(fā)性成分與相對(duì)含量差異較大。本研究結(jié)果將為龍珠果藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定和臨床用藥提供參考。