吳真，劉怡，林麗

1.首都醫(yī)科大學(xué) 附屬北京友誼醫(yī)院，北京 100050；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000

膽南星又名膽星[1]，是天南星與動(dòng)物膽汁共制而成的炮制加工品，味苦、微辛，性涼，功能為清熱化痰、息風(fēng)定驚。其炮制應(yīng)用歷史已900余年，炮制方法多樣且隨時(shí)代發(fā)展變遷[2-4]，主要可分為非發(fā)酵法和發(fā)酵法兩類?！吨腥A人民共和國藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國藥典》)2020年版記載，膽南星為制天南星的細(xì)粉與牛、羊或豬膽汁經(jīng)加工而成，或?yàn)樯炷闲羌?xì)粉與牛、羊或豬膽汁經(jīng)發(fā)酵加工而成[5]。然而全國各地炮制規(guī)范不統(tǒng)一、質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不一致。市場(chǎng)上膽南星的品質(zhì)參差不齊[6-7]，影響臨床療效。各級(jí)藥品監(jiān)管部門和中醫(yī)藥研究者一直致力于規(guī)范膽南星的炮制工藝，提高其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。2000年以來，多地炮制規(guī)范進(jìn)行了修編，膽南星炮制方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究取得了一定進(jìn)展。

鑒此，本文整理歷代藥籍、《中國藥典》、各地現(xiàn)行炮制規(guī)范及近年來膽南星炮制研究報(bào)道，試將歷史沿革與現(xiàn)代研究進(jìn)展對(duì)照分析，從原料、工藝、質(zhì)量鑒別等角度提出問題并進(jìn)行展望，為深入探究膽南星炮制方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 歷史沿革

1.1 歷代藥籍

膽南星始載于宋代《小兒藥證直訣》：“臘月釀牛膽中陰干百日”[8]。同時(shí)期《圣濟(jì)總錄》載：“黃牛膽內(nèi)浸三宿焙，牛膽煮一伏時(shí)暴干”[9]。釀牛膽長時(shí)間陰干法和浸牛膽煮后曝干法，雖制備時(shí)長和干燥方式不同，但兩者均有天南星粉末在牛膽中“釀”或“浸”制較長時(shí)間的記述，可視為后世發(fā)酵制膽南星法的發(fā)源?！短交菝窈蛣┚址健分惺讋?chuàng)制南星膽汁和餅法：“湯洗，焙，為末，用牛膽汁和作餅，焙干”[10]，提出對(duì)南星進(jìn)行預(yù)處理，不需長時(shí)間發(fā)酵，提高了生產(chǎn)效率?，F(xiàn)在廣為沿用的制天南星細(xì)粉與膽汁混合制備膽南星的方法由此可見雛形?！镀諠?jì)本事方》中首次提到“羊膽制”[11]?？梢娫谒未?，膽南星的炮制就存在著有或無發(fā)酵工序、用牛膽還是羊膽的不統(tǒng)一。

宋代之后，膽南星炮制法各有沿用、發(fā)展和創(chuàng)新。

在本文所收載的元至民國時(shí)期的17項(xiàng)膽南星炮制歷史資料中，12種為釀牛膽長時(shí)間陰干法，歸為發(fā)酵法。元、明時(shí)期的發(fā)酵工藝與宋代基本相同，操作流程記述更為詳細(xì)，出現(xiàn)了認(rèn)為延長發(fā)酵時(shí)間、增加牛膽汁加入次數(shù)可改善膽南星質(zhì)量的觀點(diǎn)?！痘钣仔臅份d：“剉碎，用臘月黃牛膽釀經(jīng)一夏用”[12]。《丹溪心法》中載：“須用黃牯牛膽，臘月粉南星，親手修合，風(fēng)干，隔一年用。牛膽須入三、四次者佳”[13]。明代《本草綱目》記載：“造南星法：以南星生研末，臘月取黃牯牛膽汁，和劑納入膽中，系懸風(fēng)處干之，年久者彌佳”[1]。明晚期出現(xiàn)了更為復(fù)雜的膽星炮制方法?！毒霸廊珪肥蛰d的抱龍丸方中所用膽星注明用“九制”[14]。清代《幼幼集成》較詳細(xì)地記錄了九制牛膽南星制法：“取牛膽一枚，傾出膽汁于碗內(nèi)，將南星末和勻，仍復(fù)裝入膽皮內(nèi)，懸有風(fēng)無日處使其陰干，有膽之時(shí)將前膽剖破取出，南星末仍以膽汁和勻裝入懸之，能裝過九膽誠為至寶任彼真正牛黃莫能及此?！盵15]九制膽南星需用9個(gè)牛膽，膽汁用量大、制作復(fù)雜、藥效顯著，但關(guān)于制造需用的時(shí)間則有不同記載，有用二三年者[16]，有說“至九年才褐色爾”“九年成功者最佳”[17]。

未查到其他古籍文獻(xiàn)記載浸牛膽煮后曝干法。該法可能演變?yōu)閷⑻炷闲欠叟c牛膽汁混合發(fā)酵后蒸制的方法[18]?，F(xiàn)在，全國多地仍在使用膽汁混合發(fā)酵蒸制法。

制南星膽汁和餅法亦未見其他古籍文獻(xiàn)記載。無發(fā)酵工序的膽南星制法古籍中相對(duì)少見，如“姜汁浸一夕牛膽拌炒”[19]。在明清較為盛行將生天南星加其他輔料制過后，再研末入牛膽，陰干。制天南星的方法有“姜汁浸炒”[20]、“滾湯明礬或姜汁拌和泡用”[21]、“同桃仁研爛曬干”[22]、“漂天南星、川貝母各半，研極細(xì)末”[17]。雖同為置牛膽內(nèi)陰干，這類方法都沒有如前述發(fā)酵法注明所需時(shí)間，故難以判定干燥過程是否伴有發(fā)酵。

古法多用牛膽汁，且多注有“臘月黃牯牛膽”，認(rèn)為其膽汁質(zhì)佳[1]。羊膽制南星未見宋以后古籍記載?！吨兴幣谥平?jīng)驗(yàn)集成》載，可以豬膽汁制膽南星[23]。

1.2 歷版《中國藥典》及全國炮制規(guī)范

《中國藥典》1977年版第一次收載膽南星[24]，包括其性狀、顯微和理化鑒別方法。《中國藥典》1985年版修訂了膽南星的用量和功能主治[25]，之后歷版《中國藥典》均沿用1985年版膽南星標(biāo)準(zhǔn)至今。自1977年被《中國藥典》收載，膽南星一直按獨(dú)立品種列項(xiàng)。在《全國中藥炮制規(guī)范》1988年版中，膽南星被作為天南星的炮制品收載，規(guī)定了2種制法，制南星與膽汁混合蒸制法，或生南星與膽汁混合發(fā)酵后蒸制法。量化了天南星與膽汁投料配比、蒸制時(shí)間、發(fā)酵時(shí)間和次數(shù)，寫明牛(或豬、羊)膽汁或膽膏粉均可用于制備膽南星[26]。

1.3 全國各省級(jí)地方炮制規(guī)范

由于歷史原因，全國各地的炮制方法一直不能統(tǒng)一。本文對(duì)現(xiàn)行各省級(jí)膽南星炮制規(guī)范進(jìn)行整理，與20世紀(jì)90年代同類統(tǒng)計(jì)結(jié)果[4]進(jìn)行比較，認(rèn)為各地膽南星炮制規(guī)范漸趨統(tǒng)一，更加貼近全國規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，但炮制工藝、膽汁用量、發(fā)酵時(shí)間等仍存在差異。全國現(xiàn)行的30個(gè)省市炮制規(guī)范中有18個(gè)收載了膽南星，共列有31種炮制方法，見表1。其中，5種方法與全國規(guī)范方法一相同，2種方法與全國規(guī)范方法二相同。每100 kg天南星膽汁用量最大的700 kg，最小64 kg，55%的方法采用了天南星與膽汁1∶4的配比。在膽汁來源方面，江西規(guī)定用牛膽汁，四川規(guī)定用豬膽汁，北京、內(nèi)蒙古、浙江3地僅注明膽汁，其余各地均明確可使用牛(或豬、羊)的膽汁。河北、湖北等地取消了地方規(guī)范中的膽南星品種，直接執(zhí)行全國標(biāo)準(zhǔn)。北京原有4種炮制方法，現(xiàn)只保留1種。加大黃制膽南星等地域特點(diǎn)突出的方法不再收錄。

表1 全國各省市膽南星炮制概況

各地炮制方法可分為發(fā)酵法和混合法兩類，安徽等11省市同時(shí)收載兩類方法，北京等7省市僅有發(fā)酵法，湖南收2種發(fā)酵法、1種混合法共3種方法，甘肅收1種發(fā)酵法、2種混合法共3種方法。從收載情況看，發(fā)酵法沿用更廣，又有多次發(fā)酵法和單次發(fā)酵法。多次發(fā)酵生產(chǎn)周期更長，最長1年，部分省份明確了發(fā)酵終點(diǎn)性狀指標(biāo)，沒有規(guī)定具體時(shí)間，生產(chǎn)者可根據(jù)環(huán)境溫度等調(diào)節(jié)時(shí)長以獲得合格的發(fā)酵效果。單次發(fā)酵法耗時(shí)更少(3～25 d)，一些發(fā)酵用時(shí)短的方法使用了制南星為原料?；旌戏ㄓ昧暇鶠橹颇闲?，生產(chǎn)周期最短，僅數(shù)小時(shí)。

炮制方法沿革有序?；旌蠍炢绶ㄅc《太平和劑局方》制南星膽汁和餅法很相近。酒蒸膽南星[27]、川貝膽南星等古法傳承得以保留，但一些需耗時(shí)數(shù)年，不符合大規(guī)模生產(chǎn)實(shí)際的方法未再收載。

少數(shù)省市制定了高于《中國藥典》2015年版的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，薄層色譜鑒定膽南星中的膽酸類成分含量，增加了水分、灰分、浸出物檢測(cè)項(xiàng)[28]。

2 現(xiàn)代研究進(jìn)展

2.1 膽汁來源、用量對(duì)膽南星質(zhì)量的影響

“膽星，意不重南星而重膽汁，借星以收取汁用，非如他藥監(jiān)制也”[29]，古人認(rèn)為膽汁在膽南星制備中不是一般認(rèn)知的輔料，應(yīng)當(dāng)被視為主要原料之一。膽汁成分是膽南星現(xiàn)代研究中的重要方向，膽酸類成分測(cè)定多見于文獻(xiàn)[30-32]，近年來也出現(xiàn)了關(guān)于膽汁來源、用量對(duì)膽南星質(zhì)量影響的研究報(bào)道。

傳統(tǒng)膽星炮制多用牛膽汁，少用羊膽汁。前期市場(chǎng)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，因豬膽汁價(jià)廉易得，市售膽南星多為豬膽汁所制。傳統(tǒng)理論認(rèn)為，牛、豬、羊膽汁性能不盡相同。陳江寧等[33]采用高效液相色譜電霧式檢測(cè)器法(HPLC-CAD)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，豬、牛、羊膽汁制膽南星中膽酸類成分存在差異，牛膽汁制膽南星中膽酸類成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于羊膽汁和豬膽汁制膽南星，不同膽汁制膽南星對(duì)干酵母致小鼠熱證模型的體溫變化影響會(huì)隨時(shí)間變化呈不同趨勢(shì)。另有研究顯示，牛、羊、豬膽汁制膽南星對(duì)脂多糖誘發(fā)的急性肺損傷大鼠均具有保護(hù)作用，可能是通過抑制炎癥因子的釋放改善肺組織的病理形態(tài)和氧化應(yīng)激造成的損傷，牛膽南星、羊膽南星較豬膽南星在保護(hù)急性肺損傷方面表現(xiàn)出一定優(yōu)勢(shì)[34]。以上研究提示，3種膽汁制膽南星均具有清熱化痰作用，?；蜇i、羊膽汁均可用于制備膽南星，具備合理性，不同膽汁制膽南星藥效學(xué)研究存在差異，其機(jī)制尚需深入研究和重復(fù)檢驗(yàn)。

李澤煜等[35]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)及負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式測(cè)定原料3種配比(膽汁∶天南星分別為3∶1、1∶1、1∶3)的膽南星膽酸類成分含量，結(jié)果表明，存在明顯差異，膽汁比例大，則膽南星的解熱、祛痰作用良好，反之作用減弱，但對(duì)止咳作用影響較小，認(rèn)為膽汁與天南星比例不宜低于1∶1。本次檢索未查找到關(guān)于多次、大量添加膽汁所制膽南星或“九制膽南星”與按全國炮制規(guī)范所示天南星與膽汁比例為1∶4所制膽南星的成分及藥效比較研究。

2.2 炮制工藝對(duì)膽南星成分及質(zhì)量的影響

20世紀(jì)，研究者采用濃縮膽汁混合制[36]、提高發(fā)酵溫度[37]、坨悶制[38]等手段對(duì)混合法、發(fā)酵法進(jìn)行改進(jìn)，以縮短炮制時(shí)間，提高生產(chǎn)效率。僅從生產(chǎn)效率角度考察，混合法優(yōu)于發(fā)酵法?，F(xiàn)代研究在評(píng)價(jià)炮制方法時(shí)更加重視炮制過程對(duì)提高有效成分含量和藥效的影響。有文獻(xiàn)報(bào)道，混合蒸制法制膽南星中主要含有結(jié)合型膽汁酸類成分，發(fā)酵制膽南星中含游離型膽汁酸類成分，膽南星炮制發(fā)酵過程可使膽汁中的結(jié)合型膽汁酸類成分發(fā)生斷鏈分解，而轉(zhuǎn)化為游離型膽汁酸[39-42]，膽南星中膽汁酸類成分及其含量可以作為膽南星質(zhì)量控制的指標(biāo)[43-44]。朱燕飛等[45]在運(yùn)用主成分分析(PCA)分析膽南星混合蒸制加工過程中不同工藝參數(shù)對(duì)飲片薄層色譜圖譜整體影響時(shí)，驗(yàn)證了豬膽汁來源和不同蒸制時(shí)間對(duì)成品膽南星物質(zhì)基礎(chǔ)均有影響，提示PCA所獲參照因子可作為膽南星成品質(zhì)控的計(jì)量手段。唐思園[46]認(rèn)為，不同發(fā)酵原料和條件能影響膽南星品質(zhì)。37 ℃干燥條件下，以牛膽粉為原料制備膽南星，可獲得膽汁酸類物質(zhì)含量高的膽南星發(fā)酵產(chǎn)物。李瑤[47]研究發(fā)酵法和混合法制膽南星在炮制前后成分變化，顯示炮制后較天南星或制天南星，兩者草酸鈣針晶數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)破壞；黃酮類成分夏佛托苷、異夏佛托苷及多糖含量均降低。表明2種炮制法均有降低天南星毒性的作用。相較混合制膽南星，發(fā)酵制膽南星中黃酮類成分及多糖含量降低更為明顯，并新生成糖胺類等成分，結(jié)合型膽汁酸轉(zhuǎn)化為游離型膽汁酸，混合制膽南星中則主要含有結(jié)合型膽汁酸。應(yīng)當(dāng)注意，本文所獲有關(guān)文獻(xiàn)多為基于豬膽汁制膽南星的研究，牛、羊膽汁制膽南星是否會(huì)有其他結(jié)果，尚待研究。鑒于發(fā)酵法和混合法制備的膽南星在成分、性狀等方面的差異，是否能等效替代，需要更多藥效學(xué)數(shù)據(jù)支持。發(fā)酵法菌種篩選、溫度濕度控制等方向的研究未見報(bào)道。

2.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

《中國藥典》2015年版所載性狀、顯微、理化鑒定標(biāo)準(zhǔn)難以全面檢查和反映膽南星的品質(zhì)。建議增加灰分、水分、黃曲霉的檢查?；曳謾z查可有效鑒別摻雜泥沙等雜質(zhì)的膽南星偽品[48]。水分、黃曲霉檢查可保證發(fā)酵制膽南星的衛(wèi)生和安全性。膽南星薄層鑒別法的研究開展較多，但方法差異較大，選用展開劑、顯色劑、對(duì)照品都不一致[49-52]。由于目前膽南星炮制原料和工藝的不統(tǒng)一，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，尋找一種能廣泛適用且具檢測(cè)意義的薄層鑒別方法還需要做大量工作。李欣逸等[53]采用電子鼻技術(shù)建立氣味指紋圖譜，不同發(fā)酵時(shí)間及不同膽汁比例的膽南星氣味有顯著差別，為膽南星定性鑒別提供一種新的思路。蔡宇憶[54]建立了以總黃酮、總多糖、核苷、膽酸為指標(biāo)的灰色關(guān)聯(lián)分析法，綜合評(píng)價(jià)膽南星質(zhì)量。

2.4 傳統(tǒng)炮制方法的保護(hù)性研究

一些傳統(tǒng)的膽南星炮制法因操作復(fù)雜，耗時(shí)耗力，難以適應(yīng)現(xiàn)代化生產(chǎn)，但不應(yīng)因此被遺忘而失傳。在走訪中，筆者了解到有飲片廠正在金世元大師等指導(dǎo)下，恢復(fù)古法“九制膽南星”的生產(chǎn)。在炮制過程中保留影像及數(shù)據(jù)資料，對(duì)不同發(fā)酵節(jié)點(diǎn)的微生物菌群種類和數(shù)量、藥物性狀和成分變化進(jìn)行檢測(cè)記錄，整理分析，開展九制膽南星與普通飲片的藥效學(xué)比較研究。守正創(chuàng)新，有助于研究了解古代炮制思想，探尋膽南星藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)豐富中藥飲片品種，滿足市場(chǎng)不同層次的需求。古法炮制還給后人留下很多思考空間，如用“臘月黃牛膽”是因?yàn)榕D月牛膽汁成分有利于膽南星發(fā)酵，還是臘月溫度適宜菌種生長，亦或是出于避免腐敗的考慮。

3 展望與建議

膽南星炮制發(fā)展中始終存在著發(fā)酵法與混合法不統(tǒng)一、不同膽汁選用的問題，現(xiàn)代研究已從成分和藥效方面證明了2種炮制方法、3種膽汁原料的存在具有一定的合理性，也發(fā)現(xiàn)了炮制方法、膽汁來源、膽汁用量對(duì)膽南星成分和藥效有不同的影響。深入研究這些差異與炮制減毒、改變藥性之間的關(guān)聯(lián)，加強(qiáng)膽南星藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，找到能夠充分代表膽南星質(zhì)量的指標(biāo)，才能科學(xué)篩選原料與炮制方法的優(yōu)勢(shì)組合。在沒有結(jié)論前，筆者建議應(yīng)將使用不同膽汁原料的膽南星分開標(biāo)注，如牛膽南星、豬膽南星，特殊制法如“九制”可單獨(dú)列出，分別規(guī)范選料、制法、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等，以便于監(jiān)督管理、合理定價(jià)和臨床選用。