武勝科

[摘要]目的：研究微生物檢驗(yàn)在流行性感冒病毒檢測(cè)中的價(jià)值。方法：選取當(dāng)?shù)剌爡^(qū)醫(yī)院2019年4月至2020年4月前來(lái)就診的148例表現(xiàn)流行性感冒癥狀病人進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。觀察檢驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果：經(jīng)檢驗(yàn)共100例患者確診，陽(yáng)性率67.57%。結(jié)論：對(duì)流行性感冒患者進(jìn)行微生物檢驗(yàn)?zāi)苡行z出病原體，該檢驗(yàn)方式具有顯著價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]微生物檢驗(yàn);流行性感冒;流感病毒

[中圖分類號(hào)]R511.7;R446.5

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2096-5249（2021）24-0176-02

流行性感冒由流感病毒引起，該疾病在春季、冬季發(fā)病率較高。患者感染后表現(xiàn)出發(fā)熱、肌肉酸痛、全身無(wú)力、咳嗽等癥狀[1]?；颊吒腥竞?至14天內(nèi)可自愈，但也有重癥病人生命受到威脅[2]。經(jīng)微生物檢驗(yàn)?zāi)軌蛎鞔_致病原因，為此本研究通過(guò)微生物檢驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，分析其價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料選取當(dāng)?shù)剌爡^(qū)醫(yī)院2019年4月至2020年4月前來(lái)就診的148例表現(xiàn)流行性感冒癥狀病人為對(duì)象。男性70例，女性78例，年齡23-65歲，平均31.91±3.75歲。兩組基本資料具有可比性（P>0.05）。

1.2方法采集148例疑似患者咽拭子、鼻拭子等樣本，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。具體如下：（1）樣本處理：1在病人癥狀早期或者恢復(fù)階段采集血清樣本。采集份數(shù)兩份，樣本置于冰壺中保存以待檢測(cè)。48h內(nèi)接種，若不能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)接種需將樣本置于低溫環(huán)境下保存。2生理鹽水處理棉拭子，將其放置5min。采集漱液，用無(wú)菌燒杯保存。3樣液充分震蕩后在4°C條件下靜置5至10min，使其沉淀。4樣液沉淀后取3ml上清液于燒杯中，添加青霉素以及鏈霉素。在4°C條件下靜置2h，準(zhǔn)備接種。（2）培養(yǎng)：將病毒分離并進(jìn)行培養(yǎng)。動(dòng)物分離培養(yǎng)成本高，細(xì)胞、雞胚培養(yǎng)是最常見(jiàn)方法。1雞胚培養(yǎng)。將標(biāo)本于羊膜腔、雞胚尿囊腔中進(jìn)行接種，接種前需選擇日齡適當(dāng)?shù)慕臃N物。孵育溫度控制在35°C，時(shí)間為2至3天。每天翻卵觀察孵育情況，頻率2次/d，若雞胚在2小時(shí)內(nèi)死亡內(nèi)死亡則應(yīng)當(dāng)放棄。孵育成功后收集羊水以及尿囊液，開(kāi)展血凝試驗(yàn)。若實(shí)驗(yàn)結(jié)果為血凝陽(yáng)性，利用特異性抗體開(kāi)展抑制試驗(yàn)。通過(guò)抑制試驗(yàn)鑒別病毒的類型、亞型。若血凝試驗(yàn)結(jié)果為陰性，需要再一次在雞胚中盲傳。2細(xì)胞培養(yǎng)。將標(biāo)本于傳代狗、猴的腎細(xì)胞之以及原代人的胚腎中進(jìn)行接種。于35°C條件下進(jìn)行孵育，時(shí)間為10至14天。孵育期間每天觀察培養(yǎng)情況，有無(wú)病變出現(xiàn)。若病變出現(xiàn)應(yīng)當(dāng)開(kāi)展血凝試驗(yàn)。若無(wú)病變出現(xiàn)則將當(dāng)每隔2小時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。若孵育時(shí)間周期內(nèi)依然無(wú)病變出現(xiàn)應(yīng)當(dāng)開(kāi)展盲傳一代。（3）病毒鑒定：在細(xì)胞聚集過(guò)程中，不同流行性感冒病毒經(jīng)對(duì)其對(duì)應(yīng)的紅細(xì)胞敏感。利用特異性抗體對(duì)血凝試驗(yàn)為陽(yáng)性結(jié)果的分離株進(jìn)行抑制試驗(yàn)。鑒別病毒的類型、亞型。

1.3觀察指標(biāo)本研究觀察指標(biāo)為微生物檢驗(yàn)結(jié)果。記錄樣本檢出的陽(yáng)性率，陽(yáng)性率=陽(yáng)性例數(shù)/總樣本數(shù)*100%。

1.4統(tǒng)計(jì)方法SPSS17.0軟件分析數(shù)據(jù)，率計(jì)數(shù)資料采用c2檢驗(yàn)，并以率（%）表示，（P<0.05）表示數(shù)據(jù)差異明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

經(jīng)檢驗(yàn)共100例患者確診，陽(yáng)性率67.57%，具體結(jié)果如表1所示。

3討論

流行性感冒在春冬季節(jié)較為常見(jiàn)，該疾病任何年齡皆可見(jiàn)，幼兒、體質(zhì)薄弱者感染風(fēng)險(xiǎn)較高。流感易控制，治療難度低，且多數(shù)病人可自愈，但重癥流感對(duì)病人的生命健康有危險(xiǎn)隱患[3]。學(xué)齡前兒童是重癥流感危險(xiǎn)人群，該疾病也是導(dǎo)致6個(gè)月以下嬰兒死亡的原因之一。此外老年患者、合并基礎(chǔ)疾病人群感染流感后病情加重，促進(jìn)基礎(chǔ)疾病的發(fā)展。Frederick等人[4]通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)Alere試驗(yàn)、Liat試驗(yàn)均不能同時(shí)確保對(duì)甲流、乙流具有較高的敏感度，早期診斷有利于開(kāi)展對(duì)癥治療。通過(guò)微生物檢驗(yàn)?zāi)軌蛎鞔_致病原因，流行性感冒病毒感染是引起流行性感冒的重要原因，飛沫傳播是流感病毒的主要傳播方式。飛沫中攜帶流感病毒，而其在空氣中能夠生存約30分鐘。當(dāng)與病人處于同一環(huán)境或接觸其私人物品后流感病毒會(huì)從口鼻、眼睛黏膜處經(jīng)呼吸系統(tǒng)進(jìn)入人體。流感病毒侵犯呼吸道黏膜的上皮細(xì)胞，因此病人在感染后會(huì)表現(xiàn)出呼吸道反應(yīng)。

流感病毒分A、B、C三種類型，A型病毒容易引起抗原性發(fā)生變異，B型病毒低致病性，通常不會(huì)造成流感大面積的暴發(fā)，C型病毒抗原性穩(wěn)定，不會(huì)造成流感大面積的暴發(fā)，但嬰幼兒、免疫能力低下人群是患病高危人群[5]。流感病毒屬于RNA病毒。其具有包膜大多數(shù)呈球形。新分離流感病毒形態(tài)也可表現(xiàn)為絲狀。核心、基質(zhì)蛋白以及外層包膜是病毒構(gòu)成。核酸、核蛋白（NP）組成其核心。在其核心中存儲(chǔ)了病毒信息遺傳物、酶。病毒信息遺傳物為單鏈RNA，其節(jié)段中能夠編碼結(jié)構(gòu)、功能蛋白。A型、B型、C型流感病毒中前兩種病毒的基因組可分成8個(gè)節(jié)段，而后者可分成7個(gè)節(jié)段。這一特征導(dǎo)致了病毒復(fù)制過(guò)程中發(fā)生基因重組的幾率較高，易產(chǎn)生新病毒株。此外不同亞型的病毒對(duì)同一細(xì)胞的敏感性存在差異，因此在微生物檢驗(yàn)的病毒分離培養(yǎng)環(huán)節(jié)中培養(yǎng)結(jié)果會(huì)受到影響。NP包裹病毒RNA的每一個(gè)節(jié)段，其作為病毒衣殼表現(xiàn)為對(duì)稱的螺旋形狀。患者被流感病毒感染后臨床癥狀較多，以發(fā)熱、畏寒、肌肉酸痛、頭痛、咳嗽等癥狀為主。流感具有易傳染、發(fā)病率、治療難度低的特點(diǎn)。0至4°C條件下流行性感冒病毒存活時(shí)間較長(zhǎng)，可達(dá)數(shù)周之久，為此春季、冬季為流感高發(fā)季。病毒在56°C條件下生存之間不超過(guò)30分鐘，耐熱性差，同時(shí)對(duì)紫外線較為敏感。而在-70°C的低溫環(huán)境中流行性感冒病毒能夠長(zhǎng)期生存?；颊咴诟腥竞蟀Y狀表現(xiàn)的時(shí)間存在差異性，這是由于病人的免疫能力、身處環(huán)境以及侵入機(jī)體的病毒量影響潛伏期[6]。免疫能力低下的人群更容易患病且更容易表現(xiàn)出癥狀。病毒經(jīng)呼吸道進(jìn)入機(jī)體，會(huì)感染呼吸系統(tǒng)上皮細(xì)胞。在其進(jìn)入機(jī)體后若免疫體系統(tǒng)不能及時(shí)分泌抑制物將其消滅將會(huì)引起細(xì)胞變形，使其進(jìn)入臨近細(xì)胞并產(chǎn)生子代病毒，因此臨床中有部分病人腸粘膜遭受損傷。根據(jù)病人體質(zhì)、病毒侵入量等潛伏期通常在1至4天，雖然流感疾病容易控制且治愈率高，但若發(fā)展為重癥、危重癥則將威脅生命，嬰幼兒、慢性基礎(chǔ)疾病、老年人等患病后風(fēng)險(xiǎn)更大。臨床中有大量關(guān)于微生物檢驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)流感病毒的研究，均證實(shí)該項(xiàng)技術(shù)的可靠性。韓志國(guó)等人[7]提出經(jīng)微生物檢驗(yàn)對(duì)病毒的分離培養(yǎng)的分離鑒定效果更好，該檢測(cè)技術(shù)優(yōu)于PCR核酸檢測(cè)。同時(shí)通過(guò)微生物檢驗(yàn)還能進(jìn)行抗原性分析，為臨床治療提供了可靠的依據(jù)。邢軍華團(tuán)隊(duì)[8]表明流感病人傳染性強(qiáng)，容易從呼吸道侵入，經(jīng)微生物檢查能夠快速確診，對(duì)病人進(jìn)行對(duì)癥治療。在邢軍華團(tuán)隊(duì)研究中疑似病人經(jīng)微生物檢驗(yàn)陽(yáng)性率高達(dá)67.86%。其團(tuán)隊(duì)證實(shí)了微生物檢驗(yàn)的價(jià)值。須注意的是機(jī)體在感染流感病毒后的排毒時(shí)間約為5天，感染后的半天至1天內(nèi)排毒量達(dá)到最高[9]。因此病人在出現(xiàn)流行性感冒癥狀后應(yīng)當(dāng)早期進(jìn)行診斷采集樣本，確保病毒存活率。同時(shí)采樣時(shí)間與收樣時(shí)間之間間隔過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響病毒的培養(yǎng)分離效果，因此醫(yī)院在采樣后應(yīng)當(dāng)及時(shí)培養(yǎng)，患者需要提高就診意識(shí)盡早到院檢查，提高診斷效率。

研究證實(shí)，對(duì)流行性感冒患者進(jìn)行微生物檢驗(yàn)?zāi)苡行z出病原體，確保患者早期確診，及時(shí)治療，該檢驗(yàn)方式具有顯著價(jià)值。

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