吳立茵
(遼寧省葫蘆島市綏中縣農(nóng)業(yè)事務(wù)服務(wù)中心,遼寧 葫蘆島 125200)
禽彎曲桿菌主要是由空腸彎曲桿菌引起的一種細(xì)菌性傳染病。彎曲桿菌病曾被稱之為弧菌性肝炎。本文針對(duì)鴕鳥彎曲桿菌病進(jìn)行臨床初診和實(shí)驗(yàn)室檢疫的闡釋。
Blakemore等(1939)首先對(duì)幼雞感染本病病變進(jìn)行了描述,Delaplane等(1955)最早分離出本病原菌并對(duì)其進(jìn)行了復(fù)制?,F(xiàn)已知除雞、火雞、鴨等家禽外,包括鴿、鷓鴣、鵪鶉、雉雞和部分狩獵鳥能感染本病。還從某些海鳥及水禽體中分離到了彎曲桿菌,鴕鳥患彎曲桿菌病也見有資料報(bào)道。本病主要傳染源為病鳥,通過所排出帶菌的糞便所污染的飼料、飲水構(gòu)成本病的主要傳播途徑?,F(xiàn)已從與污染環(huán)境有接觸的家蠅、蟑螂等昆蟲以及野生鳥類(麻雀)體中分離出空腸彎曲桿菌,并證明對(duì)易感動(dòng)物具有感染性。另據(jù)介紹,從5日齡~4周齡間的幼年鴕鳥對(duì)本病有較強(qiáng)的易感性。
幼齡鴕鳥在良好的飼養(yǎng)條件下病程往往是緩慢的,個(gè)別情況下也可能出現(xiàn)急性死亡(據(jù)報(bào)道,死亡率可高達(dá)40%),這取決于受感染鳥的體況、日齡、感染細(xì)菌的數(shù)量和菌株的毒力等因素。病鳥表現(xiàn)精神沉郁,不愿活動(dòng),間歇性或持續(xù)性腹瀉,食欲不振、生長發(fā)育受阻,體重逐漸下降,排綠色尿液,后期多因脫水、極度衰竭而死亡。
病程稍長死后的幼鳥可見尸體消瘦,腿部肌肉消耗、干燥呈深紫紅色,皮膚干燥、彈性降低,部分病例肝臟出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死及出血點(diǎn)。受感染的腸管擴(kuò)張,腸壁變薄、腸腔內(nèi)有多量黏液或水樣液體蓄積。部分病例還可能伴有心包積液及局限性心肌炎等病理變化。
肝表現(xiàn)漿膜水腫,病變區(qū)肝細(xì)胞索排列紊亂,肝靜脈竇間隙內(nèi)有淋巴細(xì)胞和顆粒性白細(xì)胞浸潤,使用硝酸銀浸漬處理,可發(fā)現(xiàn)膽小管增生、肥厚。受感染腸道固有層充血,單核細(xì)胞浸潤,有不等量的菌體存在。腸黏膜充血腫脹和白細(xì)胞浸潤,上皮細(xì)胞間出現(xiàn)大量杯狀細(xì)胞。腺泡和排泄管擴(kuò)張,黏液腺分泌亢進(jìn),分泌黏液中有數(shù)量不等的白細(xì)胞、紅細(xì)胞,脫落的被復(fù)上皮薪液腺及其排泄管的上皮細(xì)胞聚集,并可檢出彎曲桿菌的存在。
鴕鳥全身感染時(shí),可從肝、心、心包液、膽汁和血液中采集病料,制成細(xì)胞懸浮液進(jìn)行病原體分離。也可使用無菌拭子直接由泄殖腔中采集糞便,或在剖檢時(shí)無菌采集泄殖腔、空腸或盲腸內(nèi)容物作為樣品。為抑制糞便等病料中雜菌的生長,應(yīng)在選擇性培養(yǎng)基中添加桿菌肽、新霉素、三甲氧芐二氨嘧啶、先鋒霉素Ⅰ和黏菌素抗微等生物藥物。
彎曲桿菌的菌體可直接用感染病鳥膽汁制成涂片用相差顯微鏡進(jìn)行觀察,還可取盲腸內(nèi)容物用堿性品紅代替藏紅復(fù)染的改良革蘭氏染色法制成抹片檢查。彎曲桿菌為革蘭氏陰性,形態(tài)為逗點(diǎn)形、S型及螺旋狀的桿菌,在老齡培養(yǎng)物中,本菌呈球形,能運(yùn)動(dòng),通常有單根鞭毛。
取所制備含有抑菌物質(zhì)的組織懸浮液0.1~0.2 mL注入5~8日齡雞胚卵黃囊內(nèi)或尿囊腔。彎曲桿菌可使被接種雞胚3~5 d發(fā)生死亡,取其卵黃或尿囊液制成抹片染色,或直接用相差顯微鏡進(jìn)行檢查,能觀察到本菌的存在。死胚表現(xiàn)血管充血和肝出現(xiàn)局灶性病變。
彎曲桿菌可在Hela細(xì)胞和人上皮細(xì)胞中生長繁殖。定位于細(xì)胞內(nèi)部的侵襲性菌株,可通過固定、染色后,在電子顯微鏡下被發(fā)現(xiàn)。
選擇及增菌培養(yǎng):彎曲桿菌為微嗜氧菌,在含5%的氧氣、10%的二氧化碳和85%氮?dú)猓?2℃(最低37℃)的培養(yǎng)環(huán)境下生長良好??墒褂煤志镔|(zhì)的布魯氏瓊脂,基礎(chǔ)血瓊脂等作為選擇性培養(yǎng)基。國外使用肉湯增菌培養(yǎng)基(BEM)可明顯提高本菌檢出率,其配方如下:2號(hào)營養(yǎng)肉湯(Oxoid)1 000 mL、3號(hào)瓊脂(Oxoid)0.75 g、硫酸鐵0.5 g、偏重亞硫酸鈉0.5 g、丙酮酸鈉0.5 g、酵母浸膏(Difco)1.0 g、3號(hào)膽鹽(Dirco)1.5 g、Skirrow's抗生素添加劑(Oxoid)1瓶、脫纖人血50 mL。配制方法為將前7種成分混合,121℃高壓15 min滅菌(最終pH 7.4),涼至50℃加入后兩種成分,分裝備用。操作方法是取10 g樣品與50 mL BEM混合,制成勻漿,于微含氧環(huán)境中42℃培養(yǎng)24 h后,取增菌培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于固體選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24~72 h觀察菌落。
細(xì)菌培養(yǎng)性狀:菌落不溶血,呈半透明或灰色、扁平狀,具有融合生長的傾向;在少數(shù)情況下,可生長出隆起、無光澤、邊緣不整齊、不透明呈棕灰色的菌落。
生化特性:彎曲桿菌不發(fā)酵糖類,均能還原亞硒酸鹽,氧化酶和過氧化氫酶陰性,吲哚陰性??漳c彎曲桿菌對(duì)萘啶酮酸敏感,水解馬尿酸鹽。
使用兔制備的抗血清及被動(dòng)血凝技術(shù)對(duì)菌體O抗原進(jìn)行分型,已確定了空腸彎曲桿菌的60個(gè)血清型(Penner方法);但此血清型方法,僅限于對(duì)流行病調(diào)查時(shí)用于進(jìn)行菌體鑒定,而用于本病臨床實(shí)驗(yàn)室檢疫似乎意義不大。