行冰玉
[摘 要] 本研究以秦嶺美味系獼猴桃為對象,對其腋芽和葉片進(jìn)行組織培養(yǎng),通過探討不同消毒條件和培養(yǎng)基的最佳激素配比,以找到分化培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)條件,建立秦嶺美味系獼猴桃的高效再生體系。
[關(guān)鍵詞] 獼猴桃;植物組織培養(yǎng);快繁體系
[中圖分類號] S663.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1674-7909(2020)32-88-2
傳統(tǒng)獼猴桃育種方法周期長、工作量大、工作效率低,難以滿足當(dāng)今社會發(fā)展和人們的需求。本文在獼猴桃培育過程中,利用植物組織培養(yǎng)技術(shù),通過快速繁殖苗木,對秦嶺美味系獼猴桃組培快繁過程中的誘導(dǎo)分化、增殖快繁等初步培養(yǎng)技術(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行研究[1],并利用莖尖剝離培養(yǎng)提高脫毒效果,不僅可縮短獼猴桃生長周期,提高繁殖速度,優(yōu)化品種,還能增加經(jīng)濟(jì)效益。
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
試驗(yàn)材料取自陜西省西安市周至縣風(fēng)和日麗園藝站的秦嶺美味系獼猴桃,以莖尖或?yàn)橥庵搀w進(jìn)行本次試驗(yàn)。
1.2 試驗(yàn)方法
以MS+蔗糖(30 g/L)+瓊脂(7 g/L)為基本培養(yǎng)基,生長調(diào)節(jié)物質(zhì)采用TDZ(噻苯?。BA(吲哚丁酸)、α-NAA(α-萘乙酸)[2];美味系獼猴桃分化期溫度為22~28 ℃,濕度為50%~70%,光周期時間設(shè)置為24 h(光/暗,14 h/10 h)。4—5月春季萌芽期取材,選取無病害、生長健壯的美味系獼猴桃新稍莖尖,將所選取的大葉去掉,并剪成短枝,用自來水沖洗4~5 h,將表面絨毛的灰塵細(xì)菌等初步清理干凈;然后將材料移至超凈工作臺用70%的酒精浸泡30 s,期間不停搖晃,后用0.1%次氯酸鈉消毒液浸泡12~18 min,接著用無菌水沖洗3~5遍;將消毒好的莖尖在解剖顯微鏡下用解剖針剝離并切取,用濾紙吸干表面水分后培養(yǎng),切取材料的大小為0.5~1.0 cm[3]。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同消毒時間對外植體的影響
在外植體取材后,必須要對其進(jìn)行消毒處理,選取合適的消毒液種類和設(shè)置合適的消毒時間對外植體的存活率和污染率有很大影響[4]。本試驗(yàn)中,采摘的外植體用洗潔精浸泡3 min后,流水沖洗6 h,紫外線照射20 min,酒精滅菌30 s后,采用1∶5的次氯酸鈉對獼猴桃腋芽和葉片進(jìn)行消毒,設(shè)置若干個不同消毒時間的處理,7 d后統(tǒng)計莖尖存活率和污染率。
據(jù)表1、表2可知,腋芽和葉片處理時間與消毒效果成正相關(guān),即處理時間越長,污染率越低,消毒效果越好,但與存活率呈負(fù)相關(guān),即處理時間越長,存活率越低。因此,綜合分析不同處理可知,選取3號處理即對腋芽消毒16 min為最佳外植體消毒時間;選取3號處理即對葉片消毒12 min為最佳外植體消毒時間。
2.2 分化培養(yǎng)基的篩選
以MS+蔗糖(30 g/L)+瓊脂(7 g/L)為基本培養(yǎng)基,生長調(diào)節(jié)物質(zhì)采用TDZ(噻苯?。?、IBA(吲哚丁酸)、α-NAA(α-萘乙酸)[5]。以腋芽為外植體的再生過程中,需每天觀察莖尖的形態(tài)變化及再生情況。操作大約30 d后,統(tǒng)計不同處理下腋芽的再生頻率和每個外植體再生的不定芽個數(shù)。計算公式如下:不定芽再生頻率/%=再生出不定芽的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)×100%;每外植體再生芽數(shù)=外植體再生出的不定芽總數(shù)/再生出不定芽的外植體數(shù)×100%。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel2003軟件進(jìn)行分析,應(yīng)用SAS8.0軟件對結(jié)果進(jìn)行差異顯著性(P<0.05)分析。
不同濃度的激素配比對本試驗(yàn)中美味系獼猴桃莖尖分化的影響如表3所示,在15種激素組合中,激素配比為0.6 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA的8號處理組合對外植體美味系獼猴桃莖尖的再生效果最好,再生率達(dá)到了58.26%,其再生效果顯著高于其他處理組合水平,每個莖尖的平均再生芽數(shù)高達(dá)3.59個。
3 結(jié)論
本試驗(yàn)表明美味系獼猴桃莖尖組培快繁的最佳消毒時間為用1∶5的次氯酸鈉對腋芽消毒16 min,對葉片消毒12 min;最佳分化培養(yǎng)基為MS+0.6 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA。
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