鄭 珊，朱志丹，陳生科，曾忠良

(1.貴州師范學(xué)院化學(xué)與材料學(xué)院,貴州 貴陽550018;2.西南大學(xué)藥學(xué)院,中醫(yī)藥學(xué)院 重慶400715）

安全藥理學(xué)(SP)是評價新藥在擬推薦臨床使用劑量及其以上劑量情況下藥物潛在的不期待出現(xiàn)的不良反應(yīng)。其研究的主要內(nèi)容包括觀察新藥擬對受試體諸如：心血管系統(tǒng)功能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、呼吸系統(tǒng)功能等相關(guān)重要生命活動的一系列影響。通過對新藥相關(guān)的安全藥理學(xué)進(jìn)行的研究，以預(yù)期用在臨床上以防治疾病主要目的而外的其它的藥理作用[1]。從而能夠進(jìn)一步認(rèn)識新藥對機(jī)體中主要器官的相關(guān)影響。新藥的安全藥理研究是新藥臨床前研究其安全性評價的重要組成部分。是新藥臨床前必須完成的指標(biāo)。

味連須是毛茛科植物黃連(俗稱味連)的干燥不定根。黃連是傳統(tǒng)的中藥材,最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》性寒、味苦；歸心、肝、脾、膽、胃、大腸經(jīng)，有清火解毒、清熱燥濕之功效[2]。黃連具有抗病原微生物作用[3]。研究表明黃連解毒湯能顯著降低糖尿病大鼠的血糖[4]、治療阿爾茨海默病及抗氧化[5]、保肝護(hù)肝[6]鎮(zhèn)痛[7]抗炎[8-9]、降脂[10]等作用。

為了明確味連須在治療劑量或是在超出治療劑量的范圍時，潛在而不希望出現(xiàn)的對生理機(jī)能的不良反應(yīng)。確定味連須可能關(guān)系到動物的安全性的非期望藥理作用；評價味連須在毒理學(xué)和/ 或臨床研究中所觀察到的藥物不良反應(yīng)和/ 或病理生理作用及其作用機(jī)理。側(cè)重觀察味連須對家兔中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）、呼吸系統(tǒng)(RS)、心血管系統(tǒng)(CS)的影響。從而為該新藥的長期毒性試驗(yàn)設(shè)計以及開發(fā)該藥物新的適應(yīng)癥提供各項(xiàng)參考。

1 材料與方法

1.1 儀器和材料

BL-420E+RM6240 生物信號采集系統(tǒng)，成都泰盟電子科技有限公司

動物呼吸傳感器，成都泰盟電子科技有限公司

生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟電子科技有限公司

轉(zhuǎn)棒式疲勞儀：型號XZC-SC，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站

小鼠：健康清潔級昆明小鼠40 只，雌雄各半，購于中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，生產(chǎn)許可證SCXK(渝)2007-0003。家兔：健康清潔級日本大耳白兔40 只，雌雄各半，購于中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，生產(chǎn)許可證SCXK(渝)2007-0003。

1.1.1 藥物與試劑

味連須（散）：重慶西大科信動物藥業(yè)有限公司，規(guī)格：100g；批號：20120712。

戊巴比妥鈉：美國Sigma 公司，規(guī)格：25g；批號：100808

肝素鈉：上海原葉生物科技有限公司，規(guī)格：1g；批號：RF0214JA14

1.1.2 動物分組及給藥劑量

自發(fā)活動試驗(yàn)、機(jī)能協(xié)調(diào)運(yùn)動試驗(yàn)時將雌雄小鼠按體重不同隨機(jī)分為4 組：味連須低劑量組、味連須中劑量組、味連須高劑量組和空白對照組，10 只/每組，雌雄各半。家兔試驗(yàn)時隨機(jī)分組同小鼠試驗(yàn)，6 只/ 每組，但雌雄各占一半，組別同小鼠試驗(yàn)。

小鼠、家兔給藥劑量設(shè)為味連須低劑量1.0g/Kg、味連須中劑量2.0g/Kg、味連須高劑量4.0 g/Kg。小鼠、家兔的分別按0.4ml/10g 及5ml/Kg 的灌服體積劑量稀釋后進(jìn)行灌服?？瞻讓φ战M給予相同劑量的蒸餾水。

1.2 試驗(yàn)內(nèi)容與方法

1.2.1 味連須對健康小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響[11-12]

按1.1.2 法灌胃小鼠，并記錄灌藥后10min、0.5h、1h、1.5h、各組小鼠給藥后的一般行為表現(xiàn)、姿勢、步態(tài)，以及小鼠流涎情況、肌顫和瞳孔變化等；將小鼠放在轉(zhuǎn)棒式疲勞儀上運(yùn)動，選取經(jīng)篩選3min(16 轉(zhuǎn)/min)不墜落的小鼠按1.1.2 法分組給藥。50min 后，使用轉(zhuǎn)棒式疲勞儀16 轉(zhuǎn)/min 轉(zhuǎn)動。觀察小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)運(yùn)動(1min 及3min 內(nèi)的轉(zhuǎn)棒墜落率)，用χ2檢驗(yàn)判斷組間比較差異的顯著性。

小鼠50 只，雌雄各半，分組及給藥同1.1.2，灌胃后1h 開始實(shí)驗(yàn)，以腹腔注射戊巴比妥鈉水溶液（40mg/kg）。記錄小鼠翻正反射消失后至恢復(fù)活動的時間作為小鼠睡眠時間，觀察并記錄其數(shù)值。

1.2.2 味連須對健康家兔心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響試驗(yàn)[13-14]

受試家兔禁食12h 后，灌服藥物后半小時用3%戊巴比妥納靜脈注射進(jìn)行麻醉，劑量為30mg/kg，仰臥固定于手術(shù)臺上，股動脈插管，連接壓力換能器、張力換能器及心電導(dǎo)聯(lián)，從而觀察收縮壓、舒張壓及平均動脈壓的變化；記錄動物呼吸頻率、幅度及節(jié)律；以及家兔肢體標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)ECG，BL-420E+ 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)將自動采樣。

家兔觀察記錄給藥前、給藥后0-1h、2-3h、3-4h、4-5h 的平均動脈壓（MAP）、心率（HR）、ECG 的變化。

2 結(jié)果與記錄

2.1 味連須對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響

2.1.1 味連須對小鼠自發(fā)活動的影響

給藥10min 后，各組小鼠姿勢、步態(tài)均正常，攝食及兩便正常，毛色光滑，無流涎、肌顫及瞳孔等變化。組間無顯著差異(p＞0.05)。見表1。

表1 味連須散對小鼠自主活動的影響（，n=10，次/min)

2.1.2 味連須對小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)運(yùn)動的影響

在給藥1h 之后，味連須高、中、低三個劑量組小鼠1min 和3min 內(nèi)轉(zhuǎn)棒墜落率與對照組相較均無顯著差異(P＞0.05)，提示其對小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)運(yùn)動無明顯影響。見表2。

表2 味連須對小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)運(yùn)動的影響（，n=10)(Mean±SD,n=6,times/min)

2.1.3 對小鼠戊巴比妥鈉催眠劑量的影響

腹腔注射戊巴比妥鈉后，味連須高、中、低劑量組小鼠睡眠時間與空白照組比較差別無顯著意義（P＞0.05），但有延長睡眠時間的趨勢。提示，味連須對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠的睡眠時間沒有明顯協(xié)同作用。結(jié)果見表3。

表3 味連須散對小鼠戊巴比妥鈉睡眠劑量的影響(Mean±SD,n=10,min)

與空白對照組進(jìn)行比較，P＞0.05

與空白對照組比較，灌服味連須散1、2、4g 生藥/kg 劑量各組小鼠入睡的潛伏期未見明顯縮短，睡眠時間也未見明顯延長（p＞0.05）。表明：味連須散1、2、4 生藥g/kg 對戊巴比妥鈉睡眠劑量未見有顯著性的協(xié)同作用。

2.2 味連須對家兔心電的影響

試驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)基礎(chǔ)上對麻醉家兔心電記錄（ECG）的結(jié)果表明：家兔心電圖各試驗(yàn)組圖譜平穩(wěn)波動，在給藥后家兔各時段PQRST 各波段峰峰值變化平穩(wěn)，且各段峰峰之間的間隔時間變化平穩(wěn)，表明味連須對麻醉家兔心跳的心率、心跳的節(jié)律及心電在房室之間的傳導(dǎo)均無明顯變化（p＞0.05）。詳見表4、表5及表6。響，所有家兔的試驗(yàn)僅僅在一臺儀器上進(jìn)行。下同。

表4 味連須散對麻醉家兔心電圖的影響*（0-1h）

2、表中數(shù)據(jù)右肩字母標(biāo)示不同者具顯著差異（p＞0.05）；否則具顯著差異（p＜0.05）。下同。

表5 味連須散對麻醉家兔心電圖的影響（2-3h）

表6 味連須散對麻醉家兔心電圖的影響（4-5h）

2.3 味連須對家兔心功能及血流動力學(xué)的影響

2.3.1 味連須對家兔平均動脈和左室內(nèi)壓的影響

味連須給藥各劑量組與空白對照組比較，各時間點(diǎn)平均動脈壓、左心舒張壓和收縮壓均未見明顯變化（p＞0.05），見表7、表8、表9。

表7 味連須對家兔動脈血壓的影響(±s，n=6，kPa)

表7 味連須對家兔動脈血壓的影響(±s，n=6，kPa)

分組 MAP(KPa)0-1h 2-3h 4-5h空白對照組 -4.12±0.79 -4.32±0.98 -4.05±1.82 WLXH -4.05±0.18 -4.15±0.45 -4.11±1.53 WLXM -4.35±0.28 -4.34±3.40 -4.13±2.38 WLXL -4.28±0.32 -4.17±1.90 -4.27±5.60

表8 味連須散對麻醉家兔左心室收縮壓的影響(Mean±SD,n=6,kPa)

表9 味連須散對麻醉家兔左心室舒張末壓的影響(Mean±SD,n=6,kPa)

2.3.2 味連須對家兔左心室最大變化速率（±dp／dtmax）的影響

+dp／dtmax 即左心室最大上升速率，出現(xiàn)在等容收縮期，受心率及前后負(fù)荷的影響并與其正相關(guān)；-dp／dtmax 即左心室最大下降速率，出現(xiàn)在等容舒張期，反映心肌舒張時收縮成分延長的最大速率?！纃p／dtmax 是反映心肌收縮功能的重要指標(biāo)。由試驗(yàn)可知，給藥各劑量組與對照組比較，其給藥后的各時段，其±dp／dtmax 變化平穩(wěn)，物顯著的急速上升或下降的結(jié)果反映（p＞0.05），且結(jié)合左心內(nèi)壓的變化結(jié)果表明：味連須單次給藥對麻醉家兔的心功能的影響無明顯變化，對心臟功能的影響是安全的。見表10。

表10 味連須對受試家兔±dp/dtmax 的影響（±s，n=6）

表10 味連須對受試家兔±dp/dtmax 的影響（±s，n=6）

與空白對照組進(jìn)行比較，P＞0.05

＋dp/dt -dp/dt 0-1h 2-3h 4-5h 0-1h 2-3h 4-5h空白對照組 7314±167 7188±33 7147±34 -4318±42 -4333±359 -4262±43 WLXH 7122±81 6944±117 6987±12 -4452±92 -4397±274 -4542±6 WLXM 7210±17 7010±17 7161±35 -4006±8.3 -4108±32 -4216±10 WLXL 7256±22 7056±39 7054±66 -3945±73 -3360±21 -3944±13分組

2.4 味連須對家兔呼吸運(yùn)動的影響

試驗(yàn)給藥后，與空白對照組比較，各劑量組家兔給藥后的呼吸頻率和呼吸深度無明顯影響，均無明顯差異（P＞0.05），表明味連續(xù)對家兔的呼吸系統(tǒng)亦無明顯的藥理作用，結(jié)果見表11。

表11 味連須對家兔呼吸頻率的影響（±s，n=6，次/min）

表11 味連須對家兔呼吸頻率的影響（±s，n=6，次/min）

與空白對照組進(jìn)行比較，P＞0.05

觀察指標(biāo) 組 別給藥后(h)0-1h 2-3h 4-5h頻率（次/min）空白對照組 43.3±0.33 44.3±0.33 45.0±0.83 WLX-H 44.3±0.33 39.6±0.8 41.6±0.79 WLX-M 41.6±0.88 35.6±1.02 37.0±0.98 WLX-L 42.6±0.88 43.6±0.52 44.0±0.75振幅（ml/s）空白對照組 6.69±0.09 6.13±0.03 6.34±0.15 WLX-H 6.35±0.14 6.37±0.08 6.33±0.02 WLX-M 6.32±0.17 6.27±0.1 6.20±0.09 WLX-L 6.33±0.07 6.22±0.15 6.55±0.4

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠一般狀態(tài)、自主活動試驗(yàn)及小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)運(yùn)動均未見明顯影響，并且對小鼠閾下劑量的戊巴比妥鈉催眠作用亦無明顯影響。麻醉家兔呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)試驗(yàn)中，味連須三個劑量組與對照組，RF、HR、MAP 及心電圖(PR 間期、QRS 間期、QT 間期、ST 段)與給藥前比較均無顯著性差異。綜上可知，味連須對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)無明顯的抑制作用，對家兔呼吸系統(tǒng)無明顯影響。味連須在發(fā)揮藥效時對機(jī)體影響比較小，無明顯的毒副作用。是一種相對安全的中藥制劑。