劉俊彤 李軼聰 董麗強(qiáng) 劉賀 張延旭

【摘要】目的 研究芍藥苷對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致炎癥因子TNF-a和IL6的影響。方法 利用Ⅱ型膠原蛋白建立小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，采用qRT-PCR和ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)血液中炎癥因子TNF-a和IL6的變化水平。結(jié)果 芍藥苷對(duì)關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的炎癥因子TNF-a和IL6上升具有抑制作用，其作用呈現(xiàn)劑量依賴性。結(jié)論 芍藥苷對(duì)小鼠炎癥反應(yīng)具有一定的抑制作用，其作用的機(jī)制可能和免疫系統(tǒng)相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】芍藥苷;TNF-a;IL6

【中圖分類號(hào)】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2020.30..02

Study on the effect of paeoniflorin on TNF-a and IL6

LIU? Jun-tong1， LI? Yi-cong2*， DONG? Li-qiang1， ZHANG? Yan-xu1

（1.Jiamusi University，Heilongjiang Jiamusi 154000，China;

2.the 962 Hospital of joint logistics support force of PLA，Heilongjiang Harbin 150000，China）

【Abstract】Objective To study the effect of paeoniflorin on TNF-a and IL6 in collagen induced arthritis.Methods A mouse model of arthritis was established with type II collagen. The levels of TNF-a and IL-6 in blood were detected by QRT PCR and ELISA.Results Paeoniflorin inhibited the rise of TNF-a and IL-6 induced by arthritis in a dose-dependent manner.Conclusion Paeoniflorin can inhibit inflammatory response in mice， and its mechanism may be related to immune system.

【Key words】Paeoniflorin;TNF-a;IL6

關(guān)節(jié)炎是一種慢性的全身炎癥反應(yīng)，其中最為常見的病因多為風(fēng)濕和類風(fēng)濕導(dǎo)致。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病變特點(diǎn)為慢性的、對(duì)稱性的多關(guān)節(jié)以及滑膜病變[1]。目前臨床治療主要以激素為主。但是大量的應(yīng)用激素會(huì)導(dǎo)致激素性股骨頭壞死、高血壓、全身水腫等激素相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，副作用較大。而我國(guó)傳統(tǒng)中藥在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面具有獨(dú)特的見解和療效。其中芍藥苷為近年來(lái)報(bào)道的具備抗炎、抗氧化的作用，并且其不良反應(yīng)以及相關(guān)毒副作用較少[2]。本文針對(duì)芍藥苷在關(guān)節(jié)炎小鼠的動(dòng)物模型中的作用進(jìn)行研究，主要觀察炎癥相關(guān)因子的TNF-a和IL6在應(yīng)用芍藥苷后的變化，并對(duì)其中的作用機(jī)制做出初步的探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

芍藥苷購(gòu)自上海一基實(shí)業(yè)有限公司，生產(chǎn)包裝時(shí)的純度大于88%。小鼠關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)試劑為II型膠原（Sigma公司），RNA逆轉(zhuǎn)錄以及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒購(gòu)自北京Bioteck公司。ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自德國(guó)Bender公司。實(shí)驗(yàn)小鼠為DBA/1品種，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2 方法

小鼠關(guān)節(jié)炎模型的構(gòu)建[3]。將200 ug的II膠原溶于濃度為0.05 mol/L的100 mL醋酸中，并與相同體積的弗氏完全佐劑充分混合，注射入小鼠皮下。在14天后再次以同樣的方式重復(fù)操作。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

將小鼠分為5組，正常組、關(guān)節(jié)炎組、芍藥苷25 mg/kg組、芍藥苷50 mg/kg組、芍藥苷100 mg/kg組.給藥途徑為經(jīng)口注射。于2周后應(yīng)用摘眼球取血法獲得血液。提取血液中的有核細(xì)胞，裂解液裂解細(xì)胞后獲得血液中的RNA，其后按照RNA總量為1000 ng進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，將逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)。所用引物為 TNF順向CAGGCGGTGCCTATGTCTC，反向CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG。IL6順向TAGTCCTTCCTACCCCAATTTCC，反向TTGGTCCTTAGCCACTCCTTC， GAPDH：AGGTCGGTGTGAACGGATTTG，反向TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA。聚合酶鏈反應(yīng)和ELISA檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)使用SPSS 18在計(jì)算機(jī)上完成操作，數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 芍藥苷對(duì)炎癥因子mRNA的檢測(cè)

經(jīng)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)芍藥苷組的炎癥因子TNF-a和IL6較正常組（TNF-a：7.47±1.12，IL6：6.13±2.12）均表達(dá)升高。但是隨著芍藥苷劑量的增加，兩種炎癥因子的差異表達(dá)倍數(shù)明顯下降，并且在藥苷25 mg/kg組（TNF-a：1.51±0.11，IL6：0.98±0.07）、芍藥苷50 mg/kg組（TNF-a：3.21±0.67，IL6：2.86±0.13）、芍藥苷100 mg/kg（TNF-a：5.51±0.12，IL6：3.78±0.28）組表達(dá)量依次下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明芍藥苷能夠抑制機(jī)體內(nèi)關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，并且抑制效果呈現(xiàn)劑量依從性。

2.2 芍藥苷對(duì)炎癥因子表達(dá)量的檢測(cè)

經(jīng)ELISA反應(yīng)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)芍藥苷組的炎癥因子TNF-a和IL6較正常組（TNF-a：2.9±0.2 pg/mL，IL6：3.3±0.2 pg/mL）均表達(dá)升高。但是隨著芍藥苷劑量的增加，兩種炎癥因子的表達(dá)量明顯下降，并且在藥苷25 mg/kg組（TNF-a：13.7±2.3 pg/mL，IL6：17.1±2.5 pg/mL）、芍藥苷50 mg/kg組（TNF-a：9.8±2.1 pg/mL，IL6：13.4±2.8 pg/mL）、芍藥苷100mg/kg組（TNF-a：5.3±1.9 pg/mL，IL6：7.9±2.1 pg/mL）表達(dá)量依次下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明芍藥苷能夠抑制機(jī)體內(nèi)關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，并且抑制效果呈現(xiàn)劑量依從性。

3 討 論

芍藥苷是一種新型的具有抗炎、抗氧化功能的中草藥制劑，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療方面，較傳統(tǒng)的激素治療有一定的優(yōu)勢(shì)。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)以及ELISA反應(yīng)證實(shí)，應(yīng)用芍藥苷對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型的炎癥因子的表達(dá)具有抑制作用。并且隨著芍藥苷給藥劑量的逐漸增大，抗炎效果逐漸增強(qiáng)，表現(xiàn)為TNF-a和IL6的降低。而在應(yīng)用芍藥苷以及加大劑量的過(guò)程中，動(dòng)物模型未出現(xiàn)因使用芍藥苷而致死的情況，說(shuō)明芍藥苷在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的過(guò)程中具有明顯的療效。

參考文獻(xiàn)

[1] Chen M，Amerigos J C KD，Su Z，et al. Folate Receptor-Targeting and Reactive Oxygen Species-Responsive Liposomal Formulation of Methotrexate for Treatment of Rheumatoid Arthritis[J].Pharmaceutics.2019，11（11）.pii： E582.

[2] 鄭世存，李曉宇，歐陽(yáng)兵，等.芍藥苷藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國(guó)藥物警戒，2012，9（2）：100-103.

[3] 劉芳蘭，蔣 瑩.芍藥苷對(duì)小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎抑制作用[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015，17（11）：10-11.