嗜水氣單胞菌能引起魚類出血病，主要流行于春季和夏季，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中的常見病害。對于細(xì)菌性疾病的防治，常用化學(xué)消毒劑、中藥制劑、抗生素等。近年來，具有水質(zhì)調(diào)節(jié)和拮抗病原菌作用的微生物制劑逐漸發(fā)展起來。目前通過體外試驗，已經(jīng)篩選出很多具有病原菌拮抗作用的菌種，但其使用效果往往受到環(huán)境條件的限制。江蘇省蘇微微生物研究有限公司從青魚塘底泥中分離出一株對嗜水氣單胞菌等病原菌有拮抗作用的解淀粉芽孢桿菌(JSSW-LA)，通過在青魚塘的應(yīng)用試驗，探索其最佳的適用條件及施用方法。

一、材料和方法

1.菌劑來源

微生物制劑主要以病原菌拮抗菌解淀粉芽孢桿菌JSSW-LA(CN105238722A，2016)為主要成分制成，菌濃度為108CFU/克，由江蘇省蘇微微生物研究有限公司提供。

2.試驗方案

試驗塘選擇鵝湖地區(qū)的3個青魚養(yǎng)殖池塘，每個池塘的面積均為15 畝左右，平均水深2 米，均主養(yǎng)青魚。使用池塘水稀釋后均勻潑灑，試驗周期為 5 個月，按 100 克/畝，每 5～7 天施用 1 次，晴天上午全池潑灑，陰雨天延后。

3.采樣及監(jiān)測

3 個塘分別編號為試驗塘1、試驗塘2 和對照塘，于2018 年4-9 月每月采樣1 次，采樣時間為上午9-10點。

水質(zhì)指標(biāo)測定：現(xiàn)場測定水溫及溶氧，氨氮、亞硝酸氮、總氮、總磷和COD 采用國標(biāo)法測定。

總菌數(shù)和芽孢計數(shù)：使用LB 培養(yǎng)基，購自宜興市永信生物有限公司。

嗜水氣單胞菌計數(shù)：使用RS選擇性培養(yǎng)基。

4.數(shù)據(jù)分析

通過試驗塘與對照塘的月變化，分析微生物制劑的抑菌效果；通過相關(guān)性分析(SPSS，Ver.23)，探索水質(zhì)指標(biāo)與嗜水氣單胞菌數(shù)的關(guān)系。

二、微生物制劑對致病菌的抑制作用

兩個試驗塘的總菌數(shù)總體上高于對照塘，且波動幅度較大(表1)。與對照塘相比，試驗塘總菌數(shù)最大可提高兩個數(shù)量級，為微生物制劑抑菌作用的發(fā)揮提供了基礎(chǔ)；但同時也發(fā)現(xiàn)，試驗塘也出現(xiàn)了低于對照塘的低值(7月20日)，推測與菌群間的競爭有關(guān)。

表1 青魚塘的總菌數(shù)變化 ×103 CFU/毫升

相關(guān)性分析表明，對照塘的總菌數(shù)與溶氧和水溫密切相關(guān)，其中與溶氧顯著正相關(guān)(R＝0.945，P＜0.05)。對照塘自5 月開始，水體芽孢數(shù)逐漸升高，在9月達(dá)到最高值。其中在6月，水溫下降(陰雨天氣)，芽孢數(shù)略有下降。試驗塘中芽孢數(shù)與水溫顯著負(fù)相關(guān)(R＝-0.720，P＜0.05)。在 4 月，水溫較低，芽孢數(shù)顯著高于對照塘，推測可能為投入水體的微生物制劑萌發(fā)率較低；5 月之后，當(dāng)水溫長期穩(wěn)定在25℃以上時，芽孢萌發(fā)，水體中的芽孢數(shù)出現(xiàn)明顯的回落，說明自5 月開始(水溫達(dá)到25℃左右)，孢子萌發(fā)率較高的條件下，微生物制劑才可能發(fā)揮其作用(表2)。

表2 青魚塘的芽孢數(shù)變化 ×10 CFU/毫升

青魚塘水體嗜水氣單胞菌數(shù)變化見表3。4 月，微生物菌劑使用后，由于萌發(fā)率較低，因此嗜水氣單胞菌數(shù)可大致反映對照塘和試驗塘的差異，兩個試驗塘的嗜水氣單胞菌數(shù)均高于對照塘，說明其可能具有更高的增殖基礎(chǔ)，推測與8月和9月的峰值有關(guān)。兩個試驗塘相比，試驗塘1的嗜水氣單胞菌數(shù)整體水平較高。從芽孢數(shù)來看，試驗塘1 的芽孢數(shù)整體水平高于試驗塘2，推測微生物制劑的萌發(fā)受到抑制。

表3 青魚塘水體嗜水氣單胞菌數(shù)變化 CFU/毫升

試驗塘與對照塘的嗜水氣單胞菌數(shù)均在7-9 月出現(xiàn)顯著的增殖，其中試驗塘2 的菌濃度最低。5-9月，試驗塘2與對照塘的氣單胞菌數(shù)有相似的變化趨勢，推測氣單胞菌在兩個池塘具有相似的發(fā)展規(guī)律。5月，對照塘的氣單胞菌開始波動增長，而試驗塘2則出現(xiàn)明顯的下降，且穩(wěn)定在較低水平，推測微生物制劑對水體中的氣單胞菌具有良好的抑制效果。但9月，試驗塘2出現(xiàn)的顯著增殖可能與總菌數(shù)下降兩個數(shù)量級有關(guān)。

綜上所述，筆者認(rèn)為微生物制劑對青魚塘的嗜水氣單胞菌具有抑制效果，但其作用的發(fā)揮受到水環(huán)境其他因素的影響。

三、討論

本次試驗使用的微生物制劑的主要成分——解淀粉芽孢桿菌(JSSW-LA)分離自青魚塘的底泥，體外抑菌試驗結(jié)果顯示，其對嗜水氣單胞菌具有顯著的抑制作用。

通過池塘的養(yǎng)殖試驗，筆者發(fā)現(xiàn)微生物制劑在試驗塘2 的抑菌效果優(yōu)于試驗塘1，說明其使用效果還受到其他因素的制約。相關(guān)性分析表明，在試驗塘中，嗜水氣單胞菌數(shù)與溶氧顯著負(fù)相關(guān)(R＝-0.703，P＜0.05)，與亞硝酸氮顯著正相關(guān)(R＝0.581，P＜0.05)。說明在池塘水體中，微生物制劑不僅可直接抑制嗜水氣單胞菌的增殖，還可以通過改善水質(zhì)條件，間接影響其增殖。

魚類出血病流行時期為春季和夏季。調(diào)查顯示，3個青魚塘的嗜水氣單胞菌在春季和夏季均出現(xiàn)增殖現(xiàn)象，但夏季的菌濃度遠(yuǎn)高于春季。嗜水氣單胞菌是一種條件致病菌，易引起魚的暴發(fā)性出血病。因此推測，春季雖然致病菌的濃度較低，但由于氣溫低、魚攝食量少、體質(zhì)差，易被病原菌侵襲；夏季病原菌可以達(dá)到較高的濃度，一旦水質(zhì)惡化、魚的抵抗力弱，則更易暴發(fā)出血病。

據(jù)以上分析，筆者認(rèn)為魚出血病的防治，在春季以增強(qiáng)魚體質(zhì)為主，在夏季則以保持良好的水質(zhì)條件為主。在夏季可通過對溶氧和亞硝酸氮的監(jiān)測，或者直接測定嗜水氣單胞菌數(shù)來判斷魚出血病發(fā)生的可能性。

四、結(jié)論

微生物制劑(108CFU/克)按100 克/畝，每5～7 天施用1 次可提高水體的總菌數(shù)，但也可能增加菌群之間的競爭導(dǎo)致總菌數(shù)下降；青魚塘中芽孢桿菌的萌發(fā)適宜水溫在25℃左右。

青魚塘嗜水氣單胞菌的致病性與溶氧和亞硝酸氮具有一定的相關(guān)性：當(dāng)春季水溫升高、水體溶氧下降時，氣單胞菌出現(xiàn)峰值；夏季，尤其在養(yǎng)殖中后期水體溶氧較低時，易出現(xiàn)氣單胞菌的大量增殖。