楊輝，李欣欣，常永卓，劉娜，韓博，劉俊玲，孫詠梅，王建升，王靖越，李飛*，王麗霞*

1.中國中醫(yī)科學院 廣安門醫(yī)院，北京 100083；2.北京中醫(yī)藥大學 中藥學院，北京 102488；3.北京豐臺醫(yī)院，北京 100070

黑順片為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliiDebx.子根(附子)的加工品之一[1]。附子藥用始見于《神農本草經》[2]，具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛等功效，被譽為回陽救逆第一品，其藥性毒烈，臨床多以炮制品入藥，沿用至今的炮制規(guī)格主要有黑順片、白附片、炮附片等。其中黑順片是臨床應用的主流品種，為新鮮附子用食用膽巴水腌制、煎煮以防腐減毒，再漂去膽巴，切片后蒸制、干燥而成[3]。

近期在入庫驗收環(huán)節(jié)，筆者發(fā)現(xiàn)，黑順片普遍出現(xiàn)口感咸澀麻舌的現(xiàn)象，與《中華人民共和國藥典》2015年版(以下簡稱《中國藥典》)一部中“味淡”的性狀要求差異較大，同時伴有質重、色深、表面出現(xiàn)灰白色結晶樣物等現(xiàn)象(見圖1～3)，但是各項檢測數(shù)據(jù)完全符合藥品標準。經過調研，初步判斷這是由于黑順片炮制過程規(guī)程中“脫膽”環(huán)節(jié)沒有做好，膽巴殘留過多導致的，而《中國藥典》2015年版等標準并未收載對膽巴殘留的相關檢測，致使膽巴殘留的情況被長期忽視。

圖1 邊緣被白霜黑順片

圖2 未見白霜黑順片

圖3 普遍被白霜黑順片

因此，本研究收集市售黑順片，通過外觀性狀的評價(顏色、質地、外觀、切面以及人工口嘗評價其滋味)，并以Na2EDTA絡合滴定法對黑順片中膽巴殘留量進行檢測，結合水分的測定以及6種生物堿成分的檢測，對市售黑順片質量做出客觀的綜合評價。

1 材料

1.1 儀器

Waters 2659高效液相色譜儀，包括四元泵溶劑系統(tǒng)、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器、Empower色譜工作站(美國Waters 公司)；DSX-280A型不銹鋼手提式壓力蒸氣滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)；SB25-12型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；BSA224S型電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]；SHB-3型循環(huán)多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)。

1.2 試藥

苯甲酰新烏頭原堿對照品(批號：111795-201604，純度：93.1%)、苯甲酰烏頭原堿對照品(批號：111794-201303，純度：99.5%)、苯甲酰次烏頭原堿對照品(批號：111796-201705，純度：97.2%)、新烏頭堿對照品(批號：110799-201608，純度：31.7%)、次烏頭堿對照品(批號：110798-201609，純度：30%)、烏頭堿對照品(批號：110720-201111，純度：31.8%)均購自中國食品藥品檢定研究院；四氫呋喃(批號：172425，美國Fisher公司)；乙腈(批號：175165，美國Fisher公司)為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其余試劑均為分析純(北京邁瑞達科技有限公司)。

2 方法與結果

2.1 黑順片樣品收集和處理

本實驗共收集53份有效樣品，涉及到北京5家三甲醫(yī)院、3家二甲醫(yī)院、23家社區(qū)衛(wèi)生服務中心、安國市場及四川江油基地，通過對相同生產廠家及生產批號進行歸納，最終整合為32個批次，經中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院王建升主任藥師鑒定，均為毛茛科植物烏頭A.carmichaeliiDebx.子根的加工品。編號為S1～S32，其中S12樣品為國抽合格品，生產廠家涉及具備毒性飲片生產和經營資質的7家藥企、安國藥市以及四川基地等12家單位。全部樣品分別粉碎，過三號篩備用。

2.2 性狀評價

2.2.1外觀評價 黑順片為《中國藥典》2015年版收載品種，飲片外觀性狀質量要求為縱切片，上寬下窄，長1.7～5 cm，寬0.9～3 cm，厚0.2～0.5 cm。外皮黑褐色，切面暗黃色，油潤具光澤，半透明狀，并有縱向導管束。質硬而脆，斷面角質樣。氣微，味淡。按《中國藥典》規(guī)定，對各批次黑順片的外觀性狀進行檢查，結果32批次黑順片中，外觀、顏色、大小、質地等方面基本符合標準要求；口嘗味淡者少，多為咸、澀或有不同程度的麻舌感；17批次樣品表面可以見到明顯的白色結晶樣白霜，口嘗味咸澀，疑似析出的膽巴結晶。各樣品的外觀性狀觀察及口嘗味道結果見表1。

表1 各批次黑順片外觀性狀評價結果

續(xù)表1

2.2.2人工口嘗測評 為便于進行口嘗味道與成分相關性研究，依據(jù)《ISO4121-2003國際感官分析定量反應尺度使用指南》進行黑順片有別于《中國藥典》規(guī)定“淡味”的咸味和麻舌感的量化評分。選擇8名具有正常識別能力的志愿者組成測評小組，對32批黑順片樣品進行口嘗味覺評價[4]，小組成員口嘗黑順片粉末，以識別和記錄所有的味覺屬性。討論并確定屬性，根據(jù)提供的標準建立最終口嘗指標。測評采用定量的描述性分析方法對32批黑順片進行評估，從0(未檢測到)到9(非常強烈)打分。小組成員對每個樣本的每個屬性的感知強度進行評分，并做出綜合的口嘗描述。每個樣品的口嘗評估按1式3份進行，計算均值，結果見表1。

2.3 水分檢測

依據(jù)《中國藥典》2015年版四部通則0832項下第二法進行檢測，結果見表2。32批樣品含水量為10.50%～14.93%，全部符合《中國藥典》要求。

表2 各批次黑順片中水分、6種生物堿類成分和膽巴含量測定結果(n=3) %

2.4 生物堿類成分檢測

分別稱取各批次黑順片樣品定量粉末，按照《中國藥典》2015年版(一部)[1]收載的對照品溶液及供試品溶液的制備、色譜條件及實驗方法進行檢測，計算新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的含量，雙酯型生物堿以新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿的總量計；單酯型生物堿以苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿總量計，結果見表2。

2.5 膽巴殘留量檢測

分別稱取各批次黑順片樣品，按照文獻Na2EDTA絡合滴定法[5]，制備供試品溶液并進行檢測，結果見表2。

在味覺的檢測中，人工口嘗評價對32批黑順片樣品的味覺進行定性表征，國抽合格S12與S29～S32樣品口嘗描述為“味淡”，與《中國藥典》中味覺描述一致，其“咸味”的相應平均值為3.39，遠低于其他27組樣品(6.17)；“咸”味較重的S8、S9、S5、S4、S3、S7共6組樣品“咸”味均值達到8.14，普遍高于味“淡”組樣品，也高于其他26組樣品的平均值(5.18)，而這6組樣品膽巴平均質量分數(shù)為7.02%，高于S12與S29～S32組“味淡”樣品的平均值(1.97%)，也高于其他26組樣品4.61%的平均值(4.61%)。

32批黑順片均含有膽巴，其膽巴質量分數(shù)為1.85%～8.95%，可以明顯觀察到“咸”味重的樣品膽巴含量普遍偏高，采用SAS 8.2統(tǒng)計軟件對口嘗“咸”味數(shù)值與膽巴殘留量之間的相關性做T檢驗分析，r=0.601，P=0.033，呈顯著正相關(P<0.05)，表明黑順片咸味輕重與膽巴殘留量存在密切關系。

生物堿檢測中，32批樣品的單酯型生物堿總含量全部符合《中國藥典》中“不得少于0.010%”的規(guī)定；雙酯型生物堿S3、S4、S16、S17、S19、S28 6批樣品質量分數(shù)為0.021%～ 0.030%，高于《中國藥典》標準，其余26批合格，合格品占總樣本量的81.25%。而含量偏高的6批樣品均有麻舌感持久的口嘗特征，采用SAS 8.2統(tǒng)計軟件對“麻舌感”口嘗數(shù)值與雙酯型生物堿含量之間的相關性，做T檢驗分析，r=0.610，P=0.000，呈極顯著正相關(P<0.01)。

“麻舌感持久”的黑順片樣品多同時具有“味咸”的口感，其雙酯型生物堿和膽巴的含量均偏高，其相應的外觀改變也比較明顯，提示黑順片的味覺和生物堿類成分的含量及膽巴殘留存在一定關聯(lián)，黑順片炮制過程中，把泥附子按大小分別洗凈，浸入膽巴的水溶液中數(shù)日，連同浸液煮至透心，撈出，水漂去部分膽巴，縱切成厚約0.5 cm的片，再用水浸漂進行脫膽，反復至口嘗味淡，蒸至出現(xiàn)油面、光澤后，烘至半干，再曬干或繼續(xù)烘干，習稱“黑順片”。部分黑順片樣品口感咸澀微苦，推測是由于黑順片炮制過程中“脫膽”環(huán)節(jié)沒有做好，膽巴殘留量過多所致。

3 討論

附子鹽制的炮制方法源于宋代，《圣濟總錄》記載：“鹽湯浸暴干炒”[6]。明代《景岳全書》卷之四十八·毒草部記載：“夫附子之性熱而剛急，走而不守，土人腌以重鹽，故其味咸而性則降”[7]。至民國初年，以食用膽巴替代食鹽腌制附子的技術逐步完善，并沿用至今。

本研究所收集黑順片樣品的生產企業(yè)，涉及到具備毒性飲片生產和經營資質的7家藥企、安國藥市、四川基地等12家單位，涵蓋了各級醫(yī)療機構及藥材市場和道地產地，基本概括了北京市場黑順片供應的全部渠道，代表了北京市市售黑順片飲片的的實際質量水平。檢測中大部分的“味”與《中國藥典》2015年版中規(guī)定的“味淡”不符，27份“味咸”樣品的膽巴殘留遠高于國抽合格品和“味淡”樣品，占樣品量84.38%，提示黑順片飲片的“味道”與《中國藥典》要求不符與膽巴殘留量有關。S12、S29～S32樣品口感描述為“味淡”，其膽巴殘留量為1.85%～2.10%，推測膽巴殘留不超過2.10%，與《中國藥典》標準中黑順片性狀描述相一致，是黑順片膽巴殘留量的安全范圍。

膽巴是制鹽的副產品，也稱鹽鹵，作為制備黑順片的輔料，具有防腐、固形的作用，其含有大量鈣、鎂等金屬離子，具有較高的毒性[8]?！侗孀C錄》曾云：“服鹽鹵之毒，必至口咸作渴，腹中疼痛，身蜷腳縮而死。夫鹽能補腎，何便殺人？不知鹽鹵味苦，苦先入心，心遇鹽鹵，心氣抑郁不通，鹽鹵見心不受，乃犯于腎，腎見其味苦，腎又不受，遂往來于心腎之間，心腎之氣不交，而鹽鹵流入于腸，而不可救矣[9]?！标U明膽巴中毒主要以消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)的損害為主，這與現(xiàn)代研究相一致。通過對黑順片和膽巴的不良反應實例進行分析歸納發(fā)現(xiàn)，報道的黑順片不良反應與膽巴中毒在消化系統(tǒng)、中樞神經系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)等方面的臨床表現(xiàn)高度吻合[10-12]，推測黑順片膽巴殘留過多，可能增加臨床不良反應發(fā)生的概率。

綜上所述，根據(jù)黑順片實際質量現(xiàn)狀，在現(xiàn)有質量標準的基礎上，建議增加膽巴殘留量化標準，是黑順片安全使用的有效保障，對附子類飲片的合理使用具有重要的臨床意義。