張怡 楊馨悅 屈勇 陳運中

摘 要 目的：研究虎杖苷與大黃素配伍對高尿酸血癥（HUA）模型大鼠的保護作用，篩選兩者最優(yōu)配伍比例，并探討其可能機制。方法：將SD大鼠隨機分為正常對照組、模型組、苯溴馬隆組（陽性對照，8 mg/kg）、虎杖苷單用組、大黃素單用組和兩藥合用A、B、C組，每組各劑量均設(shè)置5只大鼠。正常對照組和模型組大鼠均灌胃等體積0.3%羧甲基纖維素鈉溶液，各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，灌胃體積均為0.1 mL/10 g，每日1次，連續(xù)7 d。除正常對照組外，其余各組大鼠均于末次給藥1 h前單次腹腔注射氧嗪酸鉀（300 mg/kg）以復(fù)制HUA模型。末次給藥1 h后，檢測正常對照組、模型組、苯溴馬隆組以及虎杖苷單用組、大黃素單用組（劑量均分別為0.625、1.25、2.5、5、10 mg/kg）和合用A組[虎杖苷+大黃素劑量分別為（0.625+0.625）、（1.25+1.25）、（2.5+2.5）、（5+5）、（10+10） mg/kg]大鼠血清中尿酸的含量;利用中效原理計算上述單用組和合用組的效應(yīng)（Fa）和聯(lián)合指數(shù)（CI），繪制兩成分單用及合用的量效關(guān)系曲線以及經(jīng)模擬后的Fa-CI曲線，評價兩藥的合用效果。同法檢測單用組和合用B、C組[虎杖苷+大黃素劑量分別為（0.625+0.625）、（0.625+1.25）、（0.625+2.5）、（0.625+5）、（0.625+10） mg/kg和（0.625+0.625）、（1.25+0.625）、（2.5+0.625）、（5+0.625）、（10+0.625） mg/kg]大鼠血清中尿酸的含量并計算Fa值，篩選兩藥的最佳配伍比例。檢測正常對照組、模型組、苯溴馬隆組以及虎杖苷、大黃素單用組（劑量均為10 mg/kg）和最佳配伍比例合用組大鼠血清中黃嘌呤氧化酶（XOD）的含量，初步分析其作用機制。結(jié)果：與正常對照組比較，模型組大鼠尿酸含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，除虎杖苷單用0.625 mg/kg組外，其余各給藥組大鼠尿酸含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。兩藥單用及合用時，其Fa值均與藥物劑量成正相關(guān)（截距>0，相關(guān)系數(shù)>0.9），且合用組的Fa值高于任一藥物單用組;當(dāng)模擬Fa值>15%時，其對應(yīng)CI值<1，兩藥合用可表現(xiàn)出協(xié)同作用。當(dāng)虎杖苷與大黃素的配伍比例為1 ∶ 4時，其Fa值（53.10）與合用A組（53.73）相當(dāng)，且藥物劑量更小[（0.625+2.5）mg/（kg·d） vs. （2.5+2.5） ? mg/（kg·d）]。與正常對照組比較，模型組大鼠血清XOD含量顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠血清XOD含量均顯著降低，且最佳比例配伍組顯著低于虎杖苷、大黃素單用組（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：虎杖苷和大黃素單用或合用均可一定程度地通過抑制XOD的生成來降低HUA模型大鼠血清中尿酸的含量;兩者具有一定的協(xié)同作用，其最佳配伍比例為1 ∶ 4。

關(guān)鍵詞 虎杖苷;大黃素;中效原理;高尿酸血癥;協(xié)同效應(yīng);黃嘌呤氧化酶;作用機制;大鼠

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To study the protective effect of polydatin complicated with emodin on hyperuricemia （HUA） model rats， and to screen the optimal complication proportion and investigate the potential mechanism. METHODS： SD rats were randomly divided into normal control group， model group， benzbromarone group （positive control， 8 mg/kg）， polydatin alone group， emodin alone group and drug combination group A， B， C， with 5 rats in each group of each dosage. Normal control group and model group were given constant volume of 0.3% CMC-Na solution， administration groups were given relevant medicine intragastrically. Each group was given 0.1 mL/10 g intragastrically once a day， for consecutive 7 d. Expect for normal control group， other groups were given intraperitoneal injection of potassium oxonate 300 mg/kg 1 h before last medication to induce HUA model. One hour after last medication， the serum contents of uric acid （UA） were determined in normal control group， model group， benzbromarone group， polydatin/alone group （0.625， 1.25， 2.5， 5， 10 mg/kg） and drug combination group A [the dose of polydatin+emodin were （0.625+0.625）， （1.25+1.25）， （2.5+2.5）， （5+5）， （10+10） mg/kg]. The effect （Fa） and combination index （CI） of above single drug groups and combination groups were calculated by the median effect principle. The dose-effect relationship curves of two components alone or combination were drawn; Fa-CI curves after simulation were also drawn to evaluate the effect of two-drug combination. Serum contents of UA in rats were determined and Fa value was calculated in single drug groups and drug combination group B， C [the dose of polydatin+emodin were （0.625+0.625）， （0.625+1.25）， （0.625+2.5）， （0.625+5）， （0.625+10） mg/kg and （0.625+0.625）， （1.25+0.625）， （2.5+0.625）， （5+0.625）， （10+0.625） mg/kg]. The optimal complication proportion of two drugs were screened. The serum contents of xanthine oxidase （XOD） in rats were determined in normal control group， model group， benzbromarone group， polydatin/emodin alone group （10 mg/kg） and the optimal complication proportion groups. The mechanism was analyzed primarily. RESULTS： Compared with normal control group， the content of UA in model group was increased significantly （P<0.01）. Compared with model group， except for 0.625 mg/kg polydatin alone group， the content of UA in other administration groups were decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）. When the two drugs were used alone or in combination， Fa value was positively correlated with drug dose （intercept>0， correlation coefficient>0.9）， and Fa value of the combination group was higher than that of any single drug group; when the simulated Fa value was more than 15%， the corresponding CI value was less than 1， two-drug combination showed synergistic effect. When the complication proportion of polydatin and emodin was 1 ∶ 4， the Fa value （53.10） was similar to that of drug combination group A （53.73）， and the dose of them were less [（0.625+2.5） mg/（kg·d） vs. （2.5+2.5） mg/（kg·d）]. Compared with normal control group， serum content of XOD in model group was increased significantly （P<0.01）; compared with model group， serum content of XOD in administration groups were decreased significantly， and the optimal complication proportion group was significantly lower than polydatin alone group and emodin alone group （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： The polydatin and emodin used alone or in combination can reduce the serum content of UA in HUA model rats by inhibiting the generation of XOD. They have a certain synergistic effect， and the optimal complication proportion is 1 ∶ 4.

KEYWORDS ? Polydatin; Emodin; Median effect principle; Hyperuricemia; Synergistic effect; Xanthine oxidase; Mechanism; Rats

高尿酸血癥（Hyperuricemia，HUA）是一種代謝性疾病，由尿酸合成增多和（或）排泄減少所引起的[1]，是我國中老年男性的常見病，且發(fā)病率有隨生活水平的提高而逐漸上升的趨勢[2]。有研究表明，長期的高尿酸水平可誘發(fā)痛風(fēng)，并可能會損害腎臟及心血管等器官，從而引發(fā)高血壓、高血脂、糖尿病等并發(fā)癥[3]，故HUA已成為威脅人類健康的重要疾病之一。目前，臨床常用的苯溴馬隆、別嘌醇等化學(xué)藥在治療HUA方面雖有確切的降尿酸作用，但存在停藥后復(fù)發(fā)率高、副作用多等不足[4]，其臨床應(yīng)有受到了一定的限制。我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥在疾病早期干預(yù)等方面獨具優(yōu)勢，且兼具毒副作用少的優(yōu)點，故中醫(yī)藥治療HUA受到越來越多學(xué)者的關(guān)注，已有多個研究證實虎杖、高良姜等中藥具有降低尿酸的功效[5-6]。但由于中藥成分復(fù)雜，且不同成分疊加后的作用效果難以預(yù)測，因此如何利用有效方法對中藥有效組分配伍關(guān)系進行研究顯得尤為重要。

中效原理（Chou-Talalay法）又稱中位藥效法（Median-drug effect analysis）、聯(lián)合指數(shù)法（Combination index method），是由美國學(xué)者Chou TC和Talalay P于1984年所建的用于定量分析藥物聯(lián)合作用的方法[7]。該法以兩藥（或活性成分）合用后不同效應(yīng)（以Fa表示）下的聯(lián)合指數(shù)（CI）來評價其聯(lián)合應(yīng)用的效果，在國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域的研究中應(yīng)用廣泛[7]。

虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. Et Zucc為多年生蓼科灌木狀草本植物，具有止咳化痰、散瘀止痛、利膽退黃、清熱解毒之功效[8]。虎杖苷與大黃素是虎杖中兩種含量較高的有效成分，且兩者均具有一定的降尿酸作用[9-10]。鑒于兩種成分的藥理活性，將其進行配伍并優(yōu)化其配伍比例將有助于中藥活性成分組方的篩選，為臨床用藥提供新的選擇。為此，本課題組擬對虎杖苷與大黃素進行成分配伍研究，并利用中效原理定量分析兩藥聯(lián)合應(yīng)用的效果并篩選最優(yōu)配伍比例，同時初步探討其作用機制，為中藥成分的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考，為防治HUA的新藥開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

BP121S型萬分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）;Milli-Q型超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）;X MarkTM型全波長酶標儀（美國Bio-Rad公司）;UV-2550型紫外-可見分光光度計（日本Shimadzu公司）;Type 16700 Mixer型旋渦混勻器（美國Thermolyne公司）;1580R型高速離心機（香港基因有限公司）。

1.2 藥品與試劑

虎杖苷原料藥（批號：AF8071101，純度：≥98%）、大黃素原料藥（批號：AF7112009，純度：≥98%）均購自成都埃法生物科技有限公司;苯溴馬隆原料藥（陽性對照，批號：C10240927，純度：≥99%）、氧嗪酸鉀（OA，批號：C10504744）均購自湖北伽瑪生物科技有限公司;尿酸檢測試劑盒（批號：20190509）、黃嘌呤氧化酶（XOD）檢測試劑盒（批號：20190613）均購自北京索萊寶科技有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純，水為超純水。

1.3 動物

SPF級SD大鼠130只，雄性，7～8周齡，體質(zhì)量180～220 g，購自遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（遼）2015-0001。

2 方法

2.1 分組與給藥

所有大鼠均適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實驗。按體質(zhì)量將其分為正常對照組、模型組、苯溴馬隆組（陽性對照，8 mg/kg）、虎杖苷單用組（0.625、1.25、2.5、5、10 mg/kg）、大黃素單用組（0.625、1.25、2.5、5、10 mg/kg）、合用A組[虎杖苷+大黃素劑量分別為（0.625+0.625）、（1.25+1.25）、（2.5+2.5）、（5+5）、（10+10） mg/kg]、合用B組[虎杖苷+大黃素劑量分別為（0.625+0.625）、（0.625+1.25）、（0.625+2.5）、（0.625+5）、（0.625+10） mg/kg]、合用C組[虎杖苷+大黃素劑量分別為（0.625+0.625）、（1.25+0.625）、（2.5+0.625）、（5+0.625）、（10+0.625） mg/kg]，每組各劑量均設(shè)5只大鼠。苯溴馬隆組劑量參考成人臨床用量并按體表面積法換算而得，虎杖苷、大黃素單用及合用組劑量參考本課題組前期研究設(shè)置;溶劑均為0.3%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液。其中，合用A組用以評價兩成分的合用效果，合用B、C組用以篩選兩成分的最佳配伍比例。正常對照組和模型組大鼠均灌胃等體積0.3%CMC-Na溶液，各給藥組大鼠均灌胃相應(yīng)藥物;灌胃體積均為0.1 mL/10 g，每日1次，連續(xù)7 d。

2.2 HUA大鼠模型的建立

參考相關(guān)文獻[11-13]，除正常對照組外，其余各組大鼠均于末次給藥前1 h單次腹腔注射OA（300 mg/kg，以0.3%CMC-Na溶液為溶劑），正常對照組大鼠單次腹腔注射等體積0.3%CMC-Na溶液。若大鼠血清尿酸含量較正常對照組顯著升高，則表明模型復(fù)制成功。

2.3 大鼠血清尿酸含量的測定

按“2.1”“2.2”項下方法分組[正常對照組、模型組、苯溴馬隆組、虎杖苷單用組（0.625、1.25、2.5、5、10 mg/kg）、大黃素單用組（0.625、1.25、2.5、5、10 mg/kg）和合用A組]、給藥、造模。末次給藥1 h后，于各組大鼠尾靜脈取血適量，靜置后，以3 000 r/min離心10 min，分離血清。采用微量法以酶標儀檢測各組大鼠血清中尿酸含量，嚴格按照相應(yīng)試劑盒說明書方法操作。

2.4 虎杖苷與大黃素合用效果的評價

根據(jù)“2.3”項下各組大鼠血清尿酸含量（UA），計算各給藥組的Fa值：Fa（%）=（ΔUA模型組-ΔUA給藥組）/ ΔUA模型組×100%（式中，ΔUA模型組、ΔUA給藥組分別表示模型組、給藥組與正常對照組大鼠尿酸含量差值的平均值）[14-15]。根據(jù)中效方程Fa/Fu=（D/D50）m（式中，F(xiàn)a為藥物作用效應(yīng);Fu=1-Fa;D為藥物濃度;D50為中效濃度，即發(fā)揮50%效應(yīng)時的藥物濃度;m為中效曲線方程斜率）進行中效作圖（y=lnFa/Fu，x=lnD，y=bx+a），計算出兩成分單用及合用時的中效劑量（lnD50=-a/m，b=m）及方程相應(yīng)參數(shù)（斜率及相關(guān)系數(shù)等）;然后，再計算出兩者合用的CI值：CI=（D1/Dx1）+（D2/Dx2）+α（D1D2/Dx1Dx2）（式中，D1、D2為兩藥合用時產(chǎn)生x效應(yīng)其各自所需的濃度，Dx1、Dx2為兩藥單用時產(chǎn)生x效應(yīng)所需的濃度;若兩藥作用機制相同則α計為1，兩藥作用機制不同則α計為0）[14-15]。當(dāng)CI=1時，表示兩成分具有相加效應(yīng);當(dāng)CI>1時，表示兩成分具有拮抗效應(yīng);當(dāng)CI<1時，表示兩成分具有協(xié)同效應(yīng)[16]。采用GraphPad Prism V8.0軟件，以藥物劑量為橫坐標、Fa值為縱坐標繪制兩藥單用及合用后的量效關(guān)系曲線;采用CompuSyn V1.0軟件、中效方程對合用A組的數(shù)據(jù)進行模擬計算，然后采用GraphPad Prism V8.0軟件以模擬后的Fa值為橫坐標、其對應(yīng)的CI值為縱坐標繪制Fa-CI曲線，以綜合評價兩藥合用的相互作用關(guān)系。

2.5 虎杖苷與大黃素最佳配伍比例的篩選及其對HUA模型大鼠血清XOD含量的影響

按“2.1”“2.2”項下方法分組（正常對照組、模型組、苯溴馬隆組和合用B、C組）、給藥、造模，按“2.3”項下方法檢測各組大鼠血清中尿酸的含量，再按“2.4”項下方法計算各給藥組的Fa值，并將合用B、C組與合用A組的Fa值進行比較：若某組Fa值與合用A組相當(dāng)，且該組用藥劑量較A組更少，則將該組配伍比例作為最佳配比;若Fa值不及合用A組，則以合用A組的配伍比例為最佳配比[17]。

在此基礎(chǔ)上，進一步按“2.1”“2.2”項下方法分組[正常對照組、模型組、苯溴馬隆組、虎杖苷單用組（劑量等同于“2.3”項下Fa值最高的虎杖單用組的劑量）、大黃素單用組（劑量等同于“2.3”項下Fa值最高的大黃素單用組的劑量）和上述最佳配比組]、給藥、造模，按“2.3”項下方法分離血清，并采用微量法以紫外-可見分光光度計檢測各組大鼠血清中XOD的含量，嚴格按照相應(yīng)試劑盒說明書方法操作。

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料均以x±s表示，組間比較采用Students t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 虎杖苷、大黃素單用及合用對HUA模型大鼠血清尿酸含量的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清尿酸含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，除虎杖苷單用0.625 mg/kg組外，其余各給藥組大鼠血清尿酸含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），且有隨劑量增加而降低的趨勢，詳見表1。

3.2 虎杖苷和大黃素的合用效果

虎杖苷、大黃素單用及合用時，其對應(yīng)的Fa值均有隨藥物劑量增加而升高的趨勢，且合用后的Fa值均高于任一藥物單用，詳見表1、圖1。

計算兩藥單用及合用中效曲線方程的斜率（m）、中效濃度（D50）和相關(guān)系數(shù)（r），結(jié)果見表2;以經(jīng)模擬計算后所得的Fa值（5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%）為橫坐標、其對應(yīng)CI值（1.18、1.04、0.96、0.90、0.86、0.82、0.79、0.76、0.74、0.71、0.69、0.66、0.64、0.62、0.59、0.57、0.53、0.50、0.44、0.40）為縱坐標繪制Fa-CI曲線，結(jié)果見圖2。由表2、圖2可見，兩藥單用及合用時，F(xiàn)a值與藥物劑量均呈正相關(guān)（m均大于0，r均大于0.9）;兩藥合用時的中效濃度（3.687 mg/kg）小于兩藥單用時的中效濃度之和（10.710 mg/kg）;且隨著Fa值的增大，CI值逐漸減小;當(dāng)Fa>15%時，CI<1，表明兩藥合用可產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。

3.3 虎杖苷、大黃素合用的最佳配伍比例

與模型組比較，不同配伍比例虎杖苷和大黃素合用組大鼠血清尿酸含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。當(dāng)虎杖苷和大黃素的配伍比例為1 ∶ 4時，其Fa值（53.10）與合用A組（53.73）相當(dāng)，且藥物用量更少[（0.625+2.5） mg/（kg·d） vs. （2.5+2.5） mg/（kg·d）]，故虎杖苷與大黃素的最佳配伍比例為1 ∶ 4，詳見表3。

3.4 虎杖苷、大黃素單用及最佳配伍比例合用對HUA模型大鼠血清XOD含量的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清XOD含量顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠血清XOD含量均顯著降低，且最佳配伍比例組顯著低于虎杖苷、大黃素單藥組（P<0.05或P<0.01），詳見表4。

4 討論

4.1 單味中藥成分配伍研究的意義

單味中藥是中醫(yī)治療最為原始和簡單的方式之一。筆者認為，可將單味中藥看作一個由多種成分組成的復(fù)方，其中的成分比例是相對固定的，而針對某種疾病發(fā)揮作用的僅僅是某一種或幾種成分，其他成分則為無效成分，甚至可能具有干擾或拮抗的作用。因此，若將其有效成分進行配比調(diào)整，則有可能獲得藥效更優(yōu)的有效成分配方。

中藥有效成分配伍作為中藥配伍的新模式，是現(xiàn)代中藥研究的重要內(nèi)容之一，同時也是創(chuàng)新中藥研究的一種途徑，可更深刻地揭示中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，目前已取得了積極的進展[18-19]。已有研究表明，虎杖對HUA具有一定的治療作用[20]，且虎杖苷、大黃素是虎杖中可減少尿酸分泌且含量較高的有效成分[9-10，13]，若將這兩個成分配伍使用，將有可能減少臨床用藥劑量，有助于減輕毒副作用，可為中藥有效成分防治HUA的臨床應(yīng)用提供參考，具有一定的臨床開發(fā)前景，故本研究對這兩種成分進行了成分配伍研究。

4.2 造模方法及給藥方式的選擇

HUA是嘌呤代謝紊亂性疾病，過量糖、脂肪、蛋白質(zhì)、鹽的攝入和體內(nèi)酒精水平過高，均與此疾病的發(fā)生密切相關(guān)[21]。目前對于HUA動物模型的建立，國內(nèi)外還沒有統(tǒng)一的方法。由于大鼠體內(nèi)有尿酸酶，不容易形成尿酸堆積，故成為現(xiàn)有研究常用的HUA模型動物之一[11]。OA作為尿酸酶抑制劑，在體內(nèi)外均具有很強的活性，可顯著提高實驗動物血液和尿液中尿酸的含量[22]。有文獻報道，長期腹腔注射OA對尿酸酶的抑制效應(yīng)會產(chǎn)生反饋性升高等副作用[12]。因此，本課題組在參考其他文獻方法[11-13]后，采用了單次腹腔注射OA（300 mg/kg）的造模方式，這樣既可以快速地提高正常大鼠體內(nèi)血清尿酸含量，又可避免因長期給藥所導(dǎo)致的副作用，適用于急性HUA大鼠模型的復(fù)制。此外，本研究所選用的急性HUA模型大鼠，其體內(nèi)的尿酸高水平僅能維持4 h左右，而中藥有效成分很難在如此短的時間內(nèi)達到有效血藥濃度，故本研究采用了預(yù)先多次給藥的方式。

4.3 成分配伍研究結(jié)果分析

近年來，隨著虎杖相關(guān)研究的日益深入，學(xué)者發(fā)現(xiàn)將其有效成分作預(yù)防性應(yīng)用可充分體現(xiàn)虎杖“治未病”的價值[23]?；诖?，本研究采用了中效原理對虎杖苷、大黃素進行了成分配伍研究。中效原理因具有數(shù)學(xué)模型完備、操作簡便等優(yōu)點，已成為藥物配伍研究中應(yīng)用最廣泛的方法之一[7，24]。Martin N等學(xué)者于2005年研發(fā)了名為“CompuSyn”的分析軟件，該軟件是基于Chou-Talalay數(shù)學(xué)模型開發(fā)出的第3代藥物聯(lián)合作用軟件，是目前國際上較為認可的藥物協(xié)同作用定量分析軟件[25]。CompuSyn軟件以中效方程作為中介，挖掘藥物-藥物之間以及藥物一級動力學(xué)-多級動力學(xué)代謝參數(shù)之間的關(guān)聯(lián)，其所得參數(shù)CI不僅能用于定量描述兩藥合用是相加、協(xié)同還是拮抗作用，同時還能在給定的劑量-效應(yīng)水平下進行定性描述，其結(jié)果由Fa-CI曲線展示[25-26]。

本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清尿酸含量較正常對照組顯著升高，提示模型復(fù)制成功。經(jīng)藥物預(yù)處理后，除虎杖苷單用0.625 mg/kg組外，其余各給藥組大鼠血清尿酸含量均顯著降低，提示虎杖苷、大黃素單用和合用均可不同程度地降低HUA模型大鼠血清中尿酸的含量，且其Fa值均與藥物劑量成正相關(guān)（m>0，r>0.9），表明藥物的劑量與效應(yīng)之間具有良好的線性關(guān)系，實驗設(shè)計符合多藥物聯(lián)用效應(yīng)定量分析的要求[17]。從本研究所得兩藥合用的量效關(guān)系曲線和Fa-CI曲線可以看出，當(dāng)Fa>15%時，CI<1，表明兩藥合用為協(xié)同作用;當(dāng)Fa<15%時，CI>1，表明兩藥合用為拮抗作用。這說明兩藥低劑量合用時表現(xiàn)為拮抗作用，而較高劑量合用時表現(xiàn)為協(xié)同作用，且隨著劑量的增大其協(xié)同效應(yīng)有所增強。此外，在研究過程中筆者發(fā)現(xiàn)，兩藥單用時，大黃素的D50值低于虎杖苷，說明大黃素的降尿酸效果要比虎杖苷好，與已有文獻[9]報道的基本一致;且兩藥合用的D50值低于單藥及單藥合計，說明只需較低劑量的聯(lián)合用藥即可發(fā)揮藥效，可有助于降低因劑量過大致不良反應(yīng)的發(fā)生概率[27]。

4.4 虎杖苷與大黃素的最佳配伍比例及作用機制分析

為確定虎杖苷和大黃素聯(lián)合用藥時的最佳配伍比例，本研究以苯溴馬隆（降尿酸作用明顯）為陽性對照，設(shè)計了不同劑量配伍比例的降尿酸實驗。結(jié)果表明，兩藥經(jīng)不同比例配伍后均具有顯著的降尿酸效果，且當(dāng)兩藥配伍比例為1 ∶ 4（合用劑量為3.125 mg/kg）時，F(xiàn)a值與合用A組（合用劑量為5 mg/kg）的相當(dāng)，且該配伍比例的劑量更小，故虎杖苷與大黃素的最佳配伍比例為1 ∶ 4。

本研究進一步考察了虎杖苷、大黃素高劑量單用和最佳配伍比例合用對HUA模型組大鼠血清XOD的影響。尿酸是嘌呤代謝產(chǎn)物，而XOD是尿酸生成過程中具有重要作用的關(guān)鍵酶，是調(diào)控尿酸生成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有研究表明，嘌呤先被酶水解為次黃嘌呤，后經(jīng)XOD催化生成黃嘌呤和尿酸，尿酸的合成會隨著XOD含量的增加而增多[28]?？梢?，XOD直接調(diào)控著體內(nèi)尿酸含量的高低。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清XOD含量較正常對照組顯著升高，提示其血清尿酸含量的升高可能與XOD有關(guān)。與模型組比較，各給藥組大鼠血清XOD含量均顯著降低，且最佳比例配伍合用組顯著低于虎杖苷、大黃素單用組，提示無論是兩藥單用還是合用均可抑制大鼠體內(nèi)XOD的生成，且合用效果強于任一成分單用;也提示影響XOD的活性可能是虎杖苷和大黃素降尿酸的藥效機制之一，且兩藥合用后可通過協(xié)同效應(yīng)來進一步發(fā)揮抑制XOD生成的作用。

綜上所述，虎杖苷和大黃素單用或合用均可一定程度地通過抑制XOD的生成來降低HUA模型大鼠血清中尿酸的含量;兩者配伍合用后具有協(xié)同作用，其最佳配伍比例為1 ∶ 4。本課題組后續(xù)將重點圍繞兩藥的配伍開展相關(guān)制劑學(xué)研究，為其臨床應(yīng)用提供更多依據(jù)。

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（收稿日期：2020-02-26 修回日期：2020-06-03）

（編輯：張元媛）