蔡麗娜，陳慧，朱紹汶，周靜宇，陳新,李世林，陳寶安

(1.江蘇省血液中心 獻血服務科，江蘇 南京 210042；2.江蘇省血液中心 檢驗科，江蘇 南京 210042；3.江蘇省血液中心 質量管理科， 江蘇 南京 210042；4. 中國醫(yī)學科學院輸血研究所，四川 成都 610052；5.東南大學附屬中大醫(yī)院 血液科，江蘇 南京 210009)

人類嗜T淋巴細胞病毒(human T-cell lymphotropic virus，HTLV)是致瘤性RNA病毒，屬慢病毒亞科，可分為HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ兩型。我國 HTLV-Ⅰ流行主要集中在福建、廣東、浙江等東南沿海地區(qū)。近年來 HTLV 感染率調查表明，廣東、福建等東南沿海地區(qū)存在小范圍流行[1]，廈門是 HTLV 的流行區(qū)[2]，河南、湖北等也有相關案例報道[3]，HTLV 有向非流行區(qū)蔓延的趨勢[4]。2003年南京地區(qū)無償獻血抽樣中有5例感染案例[5]，但無相關確認感染報道[6]。由于南京地區(qū)人口流動性較大，目前仍沒有把HTLV篩查作為常規(guī)篩查項目，對南京地區(qū)無償獻血人群進行HTLV篩查有助于了解當地的病毒感染流行情況，為血液安全提供數據支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2016—2019年江蘇省血液中心無償獻血者血液樣本100 172例，獻血者年齡18～55歲；所有無償獻血者均符合我國GB18467-2011《獻血者健康檢查要求》的規(guī)定，主要在街頭(固定/流動)獻血車/屋、團體獻血和站內獻血。按照《血站技術操作規(guī)程(2015版)》的要求留取標本，采用5 ml EDTA-K2真空管采集血樣，標本采集后置于2～8 ℃冰箱儲存。

1.2 主要試劑

HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測試劑盒(北京萬泰公司，批號T20160101、T20170401、T20180302B、T20190503B)，美國MP HTLV Blot 2.4 蛋白印跡檢測試劑盒，HTLV核酸檢測試劑為衛(wèi)生部臨檢中心自建試劑。以上試劑均在有效期內使用。

1.3 儀器

MICROLAS STAR 8CH全自動加樣儀(瑞士Hamilton公司)；FAME24/30全自動酶免儀(瑞士Hamilton公司)。

1.4 檢測方法

1.4.1 HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體ELISA法初篩 隨機選取當天的獻血者標本，用ELISA法進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查。根據說明書要求，標本OD值≥診斷界值者為HTLV抗體陽性，標本OD值<診斷界值者為HTLV抗體陰性。初篩呈反應性標本須進行雙孔復試，復試至少1孔為陽性則判斷為HTLV抗體檢測陽性。

1.4.2 蛋白免疫印跡(WB)/核酸檢測實驗(NAT)確證 留取抗-HTLV初篩陽性標本血漿和白膜層。將已經進行ELISA法檢測的血漿標本再次離心(3 000 r·min-1，10 min)，吸取血漿至螺口凍存管中，放入-20 ℃以下冰箱保存；吸取白膜層至離心管中，放入-20 ℃以下冰箱保存。將上述血漿與白膜層標本在2～10 ℃條件下運送至國家衛(wèi)健委臨檢中心確證實驗室，WB實驗和NAT兩種方法同時進行確證。WB實驗用血漿檢測HTLV-Ⅰ/Ⅱ；NAT用白膜層提取基因組DNA，采用實時熒光PCR方法檢測HTLV-Ⅰ/Ⅱ基因。任一方法結果為陽性即判為HTLV-Ⅰ/Ⅱ陽性，該獻血者為確證感染者；如兩種方法均為陰性，則結果判為HTLV-Ⅰ/Ⅱ陰性。

1.5 統(tǒng)計學處理

使用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對結果進行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗對2016—2019年4個年度的HTLV-Ⅰ/Ⅱ初篩陽性率進行比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 ELISA初篩結果

100 172例獻血者樣本中12例ELISA抗-HTLV呈反應性,初篩陽性率為0.012%。 2016—2019年4個年度HTLV-Ⅰ/Ⅱ初篩陽性率的差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.199，P>0.05)。見表1。

表1 2016—2019年HTLV- Ⅰ/Ⅱ 初篩結果

2.2 WB/NAT確證結果

2016、2017、2019年初篩呈反應性獻血者標本WB/NAT確認結果均為陰性，確證感染率為0(表2)；其中2017年有1例初篩呈反應性獻血者標本合并乙肝表面抗原ELISA雙邊陽性，系統(tǒng)已鎖定該獻血者為終身屏蔽獻血狀態(tài)。2018年有1例標本WB確證結果呈不確定，且合并梅毒螺旋體抗體ELISA雙邊陽性，該獻血者當時獻血年齡為23歲，考慮可能為性傳播，遺憾的是后來多次隨訪失敗，獻血者拒絕提供醫(yī)院的化驗報告，也拒絕采樣，后續(xù)試驗無法跟進，系統(tǒng)已鎖定該獻血者為終身屏蔽獻血狀態(tài)。

表2 HTLV Ⅰ/Ⅱ初篩陽性標本確證結果

3 討 論

HTLV-Ⅰ是以嚴格的細胞-細胞形式進行傳播的，游離的病毒顆粒幾乎不能感染細胞，HTLV-Ⅰ在體內主要感染CD4+T細胞。HTLV-Ⅱ的傳播途徑主要是性傳播、母嬰傳播、輸血及靜脈注射共用針頭等。輸血是HTLV-Ⅰ/Ⅱ的重要傳播途徑。如血液成分儲存時間超過10 d將大大降低HTLV-Ⅰ/Ⅱ的感染幾率。研究表明，成人T淋巴細胞白血病(ATL)是一種與HTLV-Ⅰ感染直接相關的疾病[7- 8]。

HTLV高流行區(qū)主要分布在日本西南部、非洲、加勒比地區(qū)、南美等地，日本、美國、加拿大、巴西和一些歐洲國家早就開始對獻血者進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體篩查[9]，有效降低了HTLV經輸血傳播的風險。美國1988年將HTLV-Ⅰ列入獻血者常規(guī)篩查項目， HTLV輸血傳播的風險性在實施篩查前為0.025%，在實施篩查后降為0.001 6%[10]。法國和荷蘭分別在1991年和1993年相繼對所有的獻血者實施HTLV篩查[11- 12]。

大量的流行病學調查發(fā)現(xiàn)，我國局部地區(qū)存在HTLV感染，尤其是福建東南沿海地區(qū)，寧德獻血者的HTLV確認陽性率為0.34%[13],莆田獻血者的HTLV確認陽性率為0.101%[14]。2016年有報道，福建、廣州、浙江、北京、山東、吉林、湖南、廣西、江蘇等地區(qū)均有檢測出抗-HTLV確證陽性的獻血者[15]。2018年珠三角地區(qū)獻血者中總HTLV感染率為0.001 2%[16]。目前，我國福建地區(qū)已經對獻血者進行HTLV常規(guī)篩查。近些年來，通過對我國部分HTLV確證陽性的血液進行核苷酸序列測定和系統(tǒng)進化樹分析，積累了一些分子生物學資料，證實了中國內陸地區(qū)HTLV-Ⅰ C亞型的存在。我們對南京地區(qū)2016—2019年4個年度無償獻血者隨機抽樣篩查，只發(fā)現(xiàn)1例確證試驗結果為不確定的標本，但并不能說明南京地區(qū)就不存在HTLV的感染者，只能說明南京地區(qū)目前屬于HTLV非流行區(qū)或低流行區(qū)[6]。鑒于南京地區(qū)經濟發(fā)達、人群密集、流動人口多,后續(xù)有必要繼續(xù)對獻血者進行HTLV篩查，擴大篩查范圍和篩查力度，確保臨床用血安全。目前，南京地區(qū)臨床用血已全部采用濾白血液制劑，同時還對血漿進行病毒滅活，最大程度降低了輸血傳播病毒的風險。另外，還要加強對市民的HTLV知識科普，加強獻血者獻血前的征詢工作，可以更有效地降低輸血傳播HTLV的風險。