張柏林 劉寧 楊乾 謝宇瀟 王慶容 宋培勇 曹珍 廖世永

摘要：為研究日糧中添加20%菜籽粕及20%菜籽粕日糧中添加不同水平谷氨酰胺（Glutamine，Gln）對(duì)黔東南小香雞腸道指數(shù)及免疫機(jī)能的影響，將120只1 日齡體質(zhì)量相近的黔東南小香雞隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組（飼喂基礎(chǔ)日糧）、菜籽粕組（菜籽粕等量替代基礎(chǔ)日糧中20%豆粕）及菜籽粕組日糧中分別添加0.5%、1.0% Gln的試驗(yàn)組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞，試驗(yàn)期為21 d。結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了采食量及體增質(zhì)量（P<0.05），顯著降低了十二指腸、空腸及回腸相對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)質(zhì)量（P<0.05）及脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)（P<0.05）。此外，20%菜籽粕添加還顯著降低了血清免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G， IgG）及免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）含量（P<0.05），降低了空腸黏膜免疫分泌型免疫球蛋白A（Secretory immunoglobulin A，sIgA）含量以及空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，20%菜籽粕日糧中添加0.5% Gln僅顯著增加了回腸相對(duì)長(zhǎng)度（P<0.05）;而20%菜籽粕日糧中添加1.0% Gln顯著增加了十二指腸、空腸及回腸相對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)質(zhì)量（P<0.05），顯著增加了脾臟、胸腺和法氏囊免疫器官指數(shù)（P<0.05），顯著增加了血清IgA、IgG和IgM含量（P<0.05），顯著增加了空腸黏膜sIgA含量和空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。由此可見(jiàn)，日糧中20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞腸道指數(shù)及腸道免疫機(jī)能，但在20%菜籽粕日糧中添加1.0% Gln則對(duì)菜籽粕產(chǎn)生的抑制作用具有較好的改善作用。

關(guān)鍵詞：谷氨酰胺;菜籽粕;黔東南小香雞;腸道指數(shù);免疫機(jī)能

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.11文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-4440（2020）05-1255-10

Abstract： The aim of this study was to investigate the effects of 20% rapeseed meal and 20% rapeseed meal supplemented with different levels of glutamine （Gln） on intestine indices and immune function of Qiandongnan Xiaoxiang chicken. A total of 120 1-day-old Qiandongnan Xiaoxiang chicken with similar body weight were randomly divided into four groups （A， B， C and D）， and there were five replicates in each group and six chickens per replicate. Group A was defined as control group and was fed with the basal diet， whereas group B was fed with diets supplemented with 20% rapeseed meal （equivalent amount of soybean meal was replaced by rapeseed meal in the basal diet）， and group C and group D were separately supplemented with 0.5% Gln and 1.0% Gln on the basis of the basal diet. The duration of this experiment was 21 days. Compared with the control group， dietary supplemented with 20% rapeseed meal significantly decreased feed intake and body weight gain （P<0.05）， decreased the relative length and relative weight of duodenum， jejunum and ileum （P<0.05） and decreased spleen index， thymus index and bursa index （P<0.05）. Moreover， dietary supplemented with 20% rapeseed meal significantly decreased the contents of immunoglobulin A（IgA）， immunoglobulin G（IgG） and immunoglobulin M（IgM） in serum （P<0.05）， and decreased the secretory immunoglobulin A （sIgA） contents and mRNA expression levels of MUC1 and MUC2 in jejunal mucosa （P<0.05）. Compared with 20% rapeseed meal supplementation group， 0.5% Gln supplementation only increased relative length of ileum （P<0.05）， but 1.0% Gln supplementation significantly increased the relative length and relative weight of duodenum， jejunum and ileum and spleen index， thymus index and bursa index （P<0.05）. Additionally， 1.0% Gln supplementation increased the contents of IgA， IgG and IgM in serum （P<0.05） and the content of sIgA in jejunal mucosa （P<0.05）， and mRNA expression levels MUC1 and MUC2 in jejunal mucosa （P<0.05）. Therefore， 20% rapeseed meal supplementation significantly reduced intestine indices and immune function of Qiandongnan Xiaoxiang chicken， however， 1.0% Gln supplementation could improve the inhibitory effect.

Key words：glutamine;rapeseed meal;Qiandongnan Xiaoxiang chicken;intestine index;immune function

黔東南小香雞是貴州省極具特色的優(yōu)質(zhì)肉雞品種，主要分布于貴州省黔東南及鄰近地區(qū)，具有體型嬌小、結(jié)實(shí)緊湊、結(jié)構(gòu)勻稱(chēng)、適應(yīng)能力強(qiáng)等特點(diǎn)[1]。但傳統(tǒng)的黔東南小香雞飼養(yǎng)主要是粗放式，沒(méi)有統(tǒng)一的日糧配制標(biāo)準(zhǔn)。近年來(lái)隨著小香雞規(guī)?；B(yǎng)殖的推行，其日糧的科學(xué)配制也越來(lái)越受到關(guān)注。但隨著中國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展，蛋白質(zhì)飼料尤其是優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料資源供應(yīng)緊缺已成為限制中國(guó)飼料工業(yè)發(fā)展的重要因素。中國(guó)雜粕資源豐富，因而選擇一定比例的雜粕來(lái)代替豆粕，對(duì)中國(guó)飼料行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有深遠(yuǎn)意義[2]。

菜籽粕是榨取菜籽油后的副產(chǎn)物，并且菜籽粕含有較多的粗蛋白質(zhì)，粗蛋白質(zhì)含量為30.0%～39.7%，富含蛋氨酸，是優(yōu)質(zhì)的禽類(lèi)飼料蛋白質(zhì)來(lái)源[3-4]。然而，菜籽粕中含有硫代葡萄糖苷、植酸、芥子堿和單寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子，能夠影響動(dòng)物的腸道發(fā)育、養(yǎng)分消化利用率及免疫性能，這在一定程度上限制了其在飼料中的應(yīng)用[5-6]。大多數(shù)研究結(jié)果表明，在早期肉雞日糧中添加10%左右的菜籽粕并不影響肉雞的生長(zhǎng)性能[7-9]。然而隨著菜籽粕添加量的增加，菜籽粕會(huì)對(duì)肉雞產(chǎn)生不利影響。Rabie等[9]選用Cobb肉雞為研究對(duì)象，分別在其日糧中添加0、10.0%、12.5%、15.0%及20.0%的菜籽粕，發(fā)現(xiàn)日糧中添加20.0%菜籽粕顯著降低了21日齡肉雞的平均日增質(zhì)量，增加了料質(zhì)量比，而其他菜籽粕添加水平對(duì)肉雞平均日增質(zhì)量及料質(zhì)量比均沒(méi)有顯著影響。Min等[10]選用1日齡肉雞為研究對(duì)象，分別在其日糧中添加0、5%、10%、15%、20%及25%水平的菜籽粕，試驗(yàn)期為18 d，發(fā)現(xiàn)日糧中添加25%菜籽粕顯著降低了肉雞平均日增質(zhì)量及平均日采食量。Gopinger等[8]研究結(jié)果顯示，日糧中菜籽粕含量達(dá)到或超過(guò)20%時(shí)，肉雞的腸道形態(tài)受到破壞。盡管菜籽粕是優(yōu)良的豆粕替代品，但以上結(jié)果均表明，日糧中添加高劑量的菜籽粕（達(dá)到或超過(guò)20%）會(huì)降低肉雞生長(zhǎng)性能，破壞腸道形態(tài)，進(jìn)而影響肉雞的生長(zhǎng)及健康。然而，小腸是機(jī)體養(yǎng)分消化和利用的重要場(chǎng)所，具有重要的黏膜屏障功能。因此，盡早地促進(jìn)幼禽腸道的功能完善將有利于提高雛雞健康，進(jìn)而更大程度地發(fā)揮其生長(zhǎng)潛力和提高機(jī)體的抗病能力[11-12]。因此，為了盡可能地提高菜籽粕在日糧中的添加水平，我們?cè)O(shè)想在日糧中添加20%菜籽粕的基礎(chǔ)上采取營(yíng)養(yǎng)性干預(yù)措施對(duì)肉雞腸道進(jìn)行保護(hù)，進(jìn)而為肉雞發(fā)揮最大的生產(chǎn)潛能提供保障。

谷氨酰胺（Glutamine，Gln）是腸道細(xì)胞的“重要燃料”，具有促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖與分化的作用[13]。日糧中添加Gln有利于促進(jìn)腸道生長(zhǎng)及發(fā)育，促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖、免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能[14-16]。Bartell[17]研究結(jié)果表明，日糧中添加1% Gln 顯著增加了肉雞十二指腸及空腸絨毛高度。Wu等[13]的研究結(jié)果同樣表明，日糧中添加1% Gln增加了腸道絨毛高度及絨毛高度與隱窩深度的比值。并且，日糧中添加Gln有利于維持腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，提高腸道黏膜免疫水平[18]。王中華等[19]在肉雞日糧中分別添加0、0.5%、1.0%及1.5% Gln，發(fā)現(xiàn)日糧中添加Gln顯著增加了肉雞胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)，并且以1.0% Gln添加效果最好。以上結(jié)果說(shuō)明，日糧中添加Gln有利于促進(jìn)腸道及免疫器官發(fā)育。因此，我們推測(cè)，日糧中添加Gln有可能降低高劑量菜籽粕添加對(duì)肉雞腸道發(fā)育及健康的不利影響，但到目前為止，有關(guān)研究還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究擬選取黔東南小香雞為研究對(duì)象，通過(guò)在其日糧中添加20%菜籽粕及不同水平Gln，研究其對(duì)黔東南小香雞免疫性能及腸道免疫機(jī)能的影響，從而為黔東南小香雞早期日糧的科學(xué)配制及菜籽粕的合理利用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

選用120只1日齡體質(zhì)量相近且健康的雄性黔東南小香雞，隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組（飼喂基礎(chǔ)日糧）、菜籽粕組（菜籽粕等量替代對(duì)照組日糧中20%豆粕）及菜籽粕日糧組中分別添加0.5%和1.0% Gln試驗(yàn)組，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞?；A(chǔ)日糧和菜籽粕組日糧為等能等氮日糧。日糧配制參照雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）進(jìn)行。日糧配方及營(yíng)養(yǎng)成分如表1所示。

試驗(yàn)在貴州省榕江山農(nóng)發(fā)展有限責(zé)任公司進(jìn)行。試驗(yàn)雞只采取離地籠養(yǎng)，6只/籠，早、中、晚各飼喂1次。整個(gè)試驗(yàn)期，雞只自由采食及飲水。在試驗(yàn)1～3 d，雞舍內(nèi)溫度保持在35 ℃左右，以后每2 d下降1 ℃，直到降至25 ℃左右，相對(duì)濕度維持在55%～65%左右。整個(gè)試驗(yàn)期，雞只采用23 h光照和 1h黑暗的光照程序。保持雞舍干燥清潔，按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫，試驗(yàn)期為21 d。

1.2主要試驗(yàn)材料及來(lái)源

試驗(yàn)所用菜籽粕購(gòu)自遵義金鼎農(nóng)業(yè)科技有限公司（粗蛋白質(zhì)含量為35.00%）。Gln購(gòu)自上海斐雅科技發(fā)展有限公司，含量為99.10%。

1.3主要試驗(yàn)儀器

FA-1004型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);VELP ZX3型旋渦混勻器，東南科創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn);BBS-SDC型超凈工作臺(tái)，濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);UVS-99型微量核蛋白測(cè)試儀，上海創(chuàng)萌生物科技有限公司生產(chǎn);CFX Connect-三通道梯度熒光定量PCR儀，美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn)）。

1.4樣品采集

1.4.1小腸組織收集試驗(yàn)結(jié)束前1 d晚上6∶00，所有雞只進(jìn)行斷料處理，但可自由飲水。第2 d早上8∶00，所有雞只進(jìn)行空腹稱(chēng)質(zhì)量。每個(gè)處理組分別選擇10只符合群體均質(zhì)量的肉雞進(jìn)行稱(chēng)質(zhì)量并宰殺。宰殺后立即打開(kāi)腹腔，分別收集十二指腸、空腸及回腸，用于腸道指數(shù)的測(cè)定。

1.4.2免疫器官收集分別摘取脾臟、胸腺和法氏囊等免疫器官，并用精密電子天平稱(chēng)質(zhì)量，用以免疫器官指數(shù)的測(cè)定。

1.4.3血清收集將方法1.4.1中每個(gè)處理選擇的10只空腹稱(chēng)質(zhì)量的黔東南小雞進(jìn)行宰殺，采集頸靜脈血液至10 ml離心管中，傾斜放置以利于血清析出。在4 ℃、2 500 r/min條件下離心15 min，將收集到的血清進(jìn)行分裝，保存在-20 ℃冰箱中待測(cè)。

1.4.4空腸黏膜收集在空腸中部采集5 cm左右的腸段，縱向剖開(kāi)腸段，用預(yù)冷的生理鹽水沖掉食糜，用載玻片刮取腸黏膜后裝入2 ml凍存管中，放入液氮中保存待測(cè)。

1.5測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1腸道指數(shù)測(cè)定將雞只宰殺（每個(gè)處理10只，每個(gè)重復(fù)2只）后立即打開(kāi)腹腔，分別采集十二指腸、空腸及回腸，除去腸系膜并輕輕擠出食糜，用精密天平和尺子分別測(cè)定各腸段的質(zhì)量及長(zhǎng)度，進(jìn)行腸道指數(shù)計(jì)算。公式如下：腸道相對(duì)長(zhǎng)度=各腸段長(zhǎng)度（cm）/宰前活質(zhì)量（kg）。腸道相對(duì)質(zhì)量=各腸段質(zhì)量（g）/宰前活質(zhì)量（kg）。

1.5.2免疫器官指數(shù)測(cè)定縱向打開(kāi)腹腔分別摘取脾臟、胸腺和法氏囊。用精密天平分別稱(chēng)取胸腺、脾臟和法氏囊質(zhì)量進(jìn)行免疫器官指數(shù)測(cè)定，具體計(jì)算公式如下：免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官質(zhì)量（g）/宰前活質(zhì)量（kg）。

1.5.3血清免疫球蛋白含量測(cè)定采用商品化試劑盒進(jìn)行血清免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G， IgG）及免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）含量測(cè)定，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

每1 kg飼糧提供：維生素A 6 000 IU，硫胺素2.00 mg，核黃素4.00 mg，煙酸42.00 mg，吡哆醇4.00 mg，維生素B12 0.01 mg，維生素D3 2 000 IU，維生素E 30 IU，維生素K3 1.80 mg，泛酸鈣10.00 mg，生物素0.15 mg，葉酸0.85 mg，鐵 （以硫酸亞鐵計(jì)） 80.00 mg，銅（以硫酸銅計(jì)） 8.00 mg，錳 （以硫酸錳計(jì)）80.00 mg，鋅（以硫酸鋅計(jì)） 65.00 mg，碘（以碘化鉀計(jì)） 0.50 mg，硒（以亞硒酸鈉計(jì)）0.25 mg。營(yíng)養(yǎng)成分：粗蛋白質(zhì)為實(shí)測(cè)值，其余為計(jì)算值。

1.5.4空腸黏膜分泌型免疫球蛋白A（Secretory immunoglobulin A，sIgA）含量測(cè)定空腸黏膜sIgA含量測(cè)定采用商品化試劑盒測(cè)定，具體操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5.5空腸黏膜黏蛋白基因MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平的測(cè)定稱(chēng)取一定質(zhì)量的空腸黏膜樣品，放入盛有1 ml預(yù)冷的 RNAiso Plus（產(chǎn)品編號(hào)：D9108A，TaKaRa）的DEPC預(yù)處理的5 ml離心管中，冰浴勻漿至液體澄清為止。然后經(jīng)分相、RNA沉淀、RNA洗滌及RNA重溶，并用微量分光光度計(jì)測(cè)定所提取RNA的OD260/280值。利用PrimeScriptTM RT master Mix反轉(zhuǎn)試劑盒進(jìn)行RNA的轉(zhuǎn)錄，將轉(zhuǎn)錄后的cDNA置于-20 ℃保存。根據(jù)NCBI公布的基因序列設(shè)計(jì)目的基因引物并以β-actin基因作內(nèi)參，所有引物由生工生物公司合成，內(nèi)參及目的基因序列見(jiàn)表2。

利用TB Green Premix Ex Taq試劑盒（No. RR420A）進(jìn)行RT-PCR試驗(yàn)，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作?；虮磉_(dá)的相對(duì)定量計(jì)算參照Livak 等[20]的方法進(jìn)行。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

應(yīng)用SPSS 20.0中的一般線(xiàn)性模型進(jìn)行方差分析，若差異顯著則用Duncans進(jìn)一步進(jìn)行比較。結(jié)果以平均數(shù)及平均標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05表示差異顯著。

2結(jié)果與分析

2.120%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞生長(zhǎng)性能的影響

如表3所示，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞的采食量及體增質(zhì)量（P<0.05），但對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率沒(méi)有顯著影響（P>0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對(duì)采食量、體增質(zhì)量及飼料轉(zhuǎn)化率均沒(méi)有顯著影響（P>0.05）且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了體增質(zhì)量及采食量（P<0.05），但對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率沒(méi)有顯著影響（P>0.05），且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。

2.220%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞腸道指數(shù)的影響

如表4所示，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞十二指腸、空腸及回腸的相對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)質(zhì)量（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln顯著增加了回腸相對(duì)長(zhǎng)度（P<0.05），但對(duì)十二指腸和空腸的相對(duì)長(zhǎng)度及相對(duì)質(zhì)量、回腸相對(duì)質(zhì)量均沒(méi)有顯著影響（P>0.05），并且0.5% Gln添加組空腸相對(duì)質(zhì)量與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05），但十二指腸和回腸相對(duì)長(zhǎng)度及相對(duì)質(zhì)量、空腸相對(duì)長(zhǎng)度均顯著低于對(duì)照組（P<0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了十二指腸、空腸及回腸的相對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)質(zhì)量（P<0.05），并且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組十二指腸相對(duì)長(zhǎng)度及相對(duì)質(zhì)量、回腸相對(duì)長(zhǎng)度均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

2.320%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞免疫器官指數(shù)的影響

如表5所示，與對(duì)照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低黔東南小香雞胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對(duì)胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)無(wú)顯著影響（P>0.05），且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)（P<0.05），且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。1.0% Gln添加組脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05），但法氏囊指數(shù)與0.5% Gln添加組差異不顯著（P>0.05）。

2.420%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞血清免疫球蛋白含量的影響

如表6所示，與對(duì)照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞血清IgA、IgM和IgG含量（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對(duì)血清IgA、IgM和IgG含量沒(méi)有顯著影響（P>0.05），但顯著低于對(duì)照組（P<0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了血清IgA、IgM和IgG含量（P<0.05），且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組血清IgA、IgM和IgG含量均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

2.520%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞空腸黏膜sIgA含量的影響

如圖1所示，與對(duì)照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞空腸黏膜sIgA含量（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對(duì)空腸黏膜sIgA含量的影響不顯著（P>0.05），但顯著低于對(duì)照組（P<0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了空腸黏膜sIgA含量（P<0.05），且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組空腸黏膜sIgA含量顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

2.620%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)的影響

如圖2所示，與對(duì)照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞空腸黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）; 與20%菜籽粕組相比，添加0.5% Gln對(duì)MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響（P>0.05），但顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05），且與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組空腸黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

3討論

3.120%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞生長(zhǎng)性能的影響

菜籽粕是家禽日糧中常用的蛋白質(zhì)來(lái)源，是一種經(jīng)濟(jì)有效的大豆粕替代品[20-21]。然而，菜籽粕中含有大量抗?fàn)I養(yǎng)因子，如葡萄糖硫甙、芥子酸、植酸和一些可溶性非淀粉多糖，這些抗?fàn)I養(yǎng)因子的存在會(huì)影響家禽的生長(zhǎng)性能[22]。Rabie等[9]研究結(jié)果表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了1～21日齡肉雞生長(zhǎng)性能。Sina等[23]研究結(jié)果同樣表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了1～21日齡肉雞體增質(zhì)量。本研究也發(fā)現(xiàn)，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了1～21日齡肉雞采食量及料質(zhì)量比。本研究中，20%菜籽粕添加對(duì)生長(zhǎng)性能的抑制作用可能是由于菜籽粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的存在降低了肉雞生長(zhǎng)性能。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞總采食量，增加了體增質(zhì)量。Dai等[24]研究結(jié)果也顯示，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞生長(zhǎng)性能。Bartell等[25]研究結(jié)果同樣表明，與對(duì)照組相比，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞體增質(zhì)量，平均提高了11%。日糧中添加1.0% Gln對(duì)生長(zhǎng)性能的改善作用可能是由于Gln添加提高了養(yǎng)分的消化率，進(jìn)而改善了生長(zhǎng)性能。

3.220%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞腸道指數(shù)的影響

本研究結(jié)果表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞十二指腸、空腸及回腸相對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)質(zhì)量。這表明，日糧中添加高劑量的菜籽粕影響了黔東南小香雞的腸道發(fā)育。菜籽粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子可使肉雞腸道產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，使得腸道絨毛高度降低，造成腸道黏膜萎縮[26]。本研究中腸道指數(shù)的降低可能與高劑量菜籽粕添加使得日糧中抗?fàn)I養(yǎng)因子水平較高有關(guān)。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln顯著增加回腸相對(duì)長(zhǎng)度，1.0% Gln添加則顯著增加了十二指腸、空腸及回腸相對(duì)長(zhǎng)度和相對(duì)質(zhì)量。戴四發(fā)等[27]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加0.4% Gln顯著增加了3周齡AA肉雞的回腸長(zhǎng)度及相對(duì)質(zhì)量，但對(duì)十二指腸和空腸的影響不顯著。與本研究結(jié)果相似，黃曉亮等[28]研究結(jié)果同樣表明，外源性Gln添加可以促進(jìn)小腸的生長(zhǎng)發(fā)育，表現(xiàn)為肉雞十二指腸、空腸和回腸質(zhì)量及長(zhǎng)度的增加。以上結(jié)果表明，日糧中添加Gln對(duì)腸道生長(zhǎng)發(fā)育具有促進(jìn)作用，并且具有劑量依賴(lài)性。Gln可為腸道上皮細(xì)胞提供代謝燃料，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，從而促進(jìn)腸道形態(tài)和黏膜發(fā)育[29]。以上結(jié)果表明高劑量菜籽粕日糧中添加1.0% Gln可能通過(guò)促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞增殖和發(fā)育，進(jìn)而引起腸道指數(shù)的增加。

3.320%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官指數(shù)是反映免疫器官發(fā)育狀況的指標(biāo)，是評(píng)價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。免疫器官的發(fā)育狀況直接影響機(jī)體的免疫應(yīng)答水平和抵抗外來(lái)病原菌入侵的能力[30]。脾臟、胸腺和法氏囊是禽類(lèi)最重要的免疫器官。其中，胸腺主要參與細(xì)胞免疫，而脾臟具有參與免疫應(yīng)答的功能，法氏囊是禽類(lèi)所特有的中樞淋巴器官[31]。動(dòng)物的免疫能力取決于免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能強(qiáng)弱，它的生長(zhǎng)發(fā)育影響著肉雞的免疫能力[32]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞免疫器官指數(shù)。吳正可[33]研究結(jié)果表明，日糧中添加15%菜籽粕顯著降低了21日齡肉雞胸腺指數(shù)，但對(duì)脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)沒(méi)有影響。這意味著，日糧中添加高水平的菜籽粕在一定程度上影響了肉雞免疫器官的發(fā)育，降低了機(jī)體免疫機(jī)能。在正常情況下，免疫器官的質(zhì)量會(huì)隨著器官細(xì)胞的增殖分化而升高，免疫器官指數(shù)的升高則意味著免疫系統(tǒng)的快速成熟[34]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加1.0% Gln可增加免疫器官指數(shù)，說(shuō)明Gln對(duì)免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育具有促進(jìn)作用，這與周聯(lián)高等[31]的研究結(jié)果相似。日糧中添加Gln能夠促進(jìn)免疫器官的發(fā)育和成熟，提高機(jī)體免疫機(jī)能，具體表現(xiàn)為：胸腺內(nèi)胸腺小葉數(shù)量增加，法氏囊內(nèi)淋巴濾泡數(shù)量增多及脾臟內(nèi)脾小結(jié)增多、增大[35-36]。此外，日糧中添加Gln為機(jī)體免疫器官的發(fā)育提供了豐富的嘌呤、嘧啶等活性前體物質(zhì)，從而促進(jìn)了免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育[37-38]。以上結(jié)果表明，日糧中添加Gln可能通過(guò)加強(qiáng)免疫細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)胸腺、脾臟及法氏囊等免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能，從而改善日糧中高劑量菜籽粕添加對(duì)免疫機(jī)能的不利影響。

3.420%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞免疫球蛋白含量的影響

免疫球蛋白IgA、IgG和IgM由漿細(xì)胞分泌，是一類(lèi)結(jié)構(gòu)相似并具有抗體活性的血清球蛋白，其含量的高低能反應(yīng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀況，是評(píng)價(jià)免疫系統(tǒng)的一項(xiàng)重要指標(biāo)[39-40]。本研究發(fā)現(xiàn)，20%菜籽粕添加顯著降低了血清IgA、IgG和IgM含量。Aleksandra等[5]研究結(jié)果表明，日糧中添加15%菜籽粕顯著降低了肉雞IgM含量，但對(duì)IgA含量沒(méi)有影響。這與本研究的結(jié)果不同，造成結(jié)果出現(xiàn)差異的原因可能是由于菜籽粕的添加量不同引起。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在20%菜籽粕日糧中添加0.5% Gln對(duì)IgA、IgG和IgM含量并沒(méi)有顯著影響，但添加1.0% Gln顯著增加IgA、IgM和IgG含量。這可能是由于Gln對(duì)血清免疫球蛋白含量的影響具有劑量依賴(lài)性。Bartell等[25]也得到了與本試驗(yàn)相似的結(jié)果，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了21日齡Cobb肉雞血清 IgA 及IgG含量。Gln添加能夠促CD4+（T-輔助細(xì)胞的一種）的增殖[41]，而IgG及IgM是T輔助細(xì)胞依賴(lài)性抗體，是T輔助細(xì)胞響應(yīng)的指示物[42]。這意味著Gln可能通過(guò)提高T-輔助細(xì)胞的增殖而增加了血清IgG或IgM含量。20%菜籽粕日糧降低了黔東南小香雞的體液免疫水平，而在其日糧中添加1.0% Gln則有助于改善這種不利影響。

3.520%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞空腸黏膜sIgA含量的影響

sIgA是腸道淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的一種IgA抗體，是機(jī)體發(fā)揮免疫作用的一道重要屏障，可以阻止細(xì)菌等病原微生物在黏膜表面的黏附，具有免疫清除、免疫屏障、中和病毒等功能[43-46]。但到目前為止，有關(guān)菜籽粕添加對(duì)腸道sIgA分泌的影響還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)果表明，20%菜籽粕添加顯著降低了空腸黏膜sIgA的含量。sIgA是腸道黏膜固有層漿細(xì)胞產(chǎn)生的主要免疫效應(yīng)因子，是機(jī)體分泌量最多的免疫球蛋白。并且，sIgA為主的體液免疫在腸道免疫中起主要作用，對(duì)腸道黏膜起著重要的保護(hù)作用[47]。本研究中sIgA含量的降低與血清免疫球蛋白（IgA、IgG及IgM）含量降低的結(jié)果是相一致的，這意味著20%菜籽粕添加降低了機(jī)體體液免疫水平，這種效應(yīng)可能與菜籽粕中含有大量的抗?fàn)I養(yǎng)因子有關(guān)。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞空腸黏膜sIgA的含量。這與李虎等[32]的研究結(jié)果相似，其研究結(jié)果表明，日糧中添加Gln顯著增加了肉雞十二指腸sIgA含量。并且日糧中添加Gln能夠顯著增加腸黏膜中分泌sIgA漿細(xì)胞數(shù)量，增加腸道sIgA含量[18，48]，而Gln缺乏或不足時(shí)，sIgA含量隨之下降[49]。因此，我們推測(cè)，日糧中添加Gln可能通過(guò)增加空腸黏膜sIgA漿細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而增加空腸黏膜sIgA含量，從而有效解除了高劑量菜籽粕添加對(duì)腸道免疫球蛋白分泌的抑制作用，在一定程度上增強(qiáng)了腸道黏膜的免疫屏障功能。

3.620%菜籽粕和Gln添加對(duì)黔東南小香雞空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平的影響

黏蛋白是一類(lèi)由組織上皮細(xì)胞分泌的糖蛋白，在不同組織中具有不同的功能，主要由杯狀細(xì)胞和潘氏細(xì)胞分泌。在腸道組織中主要是膜結(jié)合型MUC1和分泌型MUC2 2種。其中，MUC2是構(gòu)成腸黏液層的主要成分，而MUC1有保護(hù)和潤(rùn)滑作用，可促進(jìn)上皮細(xì)胞的黏附，從而增強(qiáng)腸道免疫能力[50-51]。但就我們所知，到目前為止，有關(guān)Gln對(duì)肉雞腸道黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平的影響還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，20%菜籽粕添加可顯著降低空腸黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平，而添加1.0% Gln則顯著增加了MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平。Gln是腸道黏膜細(xì)胞的重要能量來(lái)源，在腸道修復(fù)和腸道免疫系統(tǒng)方面發(fā)揮著重要作用[52-53]。Wang等[54]研究結(jié)果表明，含有Gln的腸外營(yíng)養(yǎng)可提高小鼠小腸MUC2 mRNA表達(dá)水平。高玉琪等[55]研究結(jié)果表明，日糧中添加Gln顯著增加了獺兔回腸黏膜MUC1 mRNA表達(dá)水平。這可能是由于日糧中添加Gln刺激了腸隱窩干細(xì)胞增殖并轉(zhuǎn)化為杯狀細(xì)胞，從而增加腸道黏蛋白的分泌，進(jìn)而增強(qiáng)腸道的免疫性能[56]。

4結(jié)論

日糧中20%菜籽粕添加降低了黔東南小香雞免疫性能及腸道免疫水平，在其日糧中添加1.0% Gln在一定程度上緩解了高含量菜籽粕添加對(duì)黔東南小香雞免疫機(jī)能的不利影響，有利于提高機(jī)體的免疫機(jī)能和生長(zhǎng)性能。

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（責(zé)任編輯：張震林）