王 麗,張 靜,張洪宇,于 婧,曾 薇,駱海濤,何 寧,張優(yōu)明
(1.齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科,黑龍江 齊齊哈爾 161005;2.齊齊哈爾和平醫(yī)院檢驗科,黑龍江 齊齊哈爾 161005)
近些年來,隨著生活節(jié)奏的加快和飲食結(jié)構(gòu)的改變,自身免疫性甲狀腺炎在人群中的發(fā)病率逐年在增加。自身免疫性甲狀腺炎又稱橋本甲狀腺炎或稱慢性淋巴細胞性甲狀腺炎,是一種具有明顯遺傳傾向的器官特異性自身免疫性疾病,其發(fā)病率約為0.3~1.5/1000人/年,約占甲狀腺疾病的20%左右[1]。自身免疫性甲狀腺炎多發(fā)于30~50歲女性?;颊叽蠖嘤屑谞钕倌[,半數(shù)甲狀腺功能正常,約1/4有甲亢,甲減僅占1/7。這種疾病若得不到及時有效的治療,則會引發(fā)甲亢危象及甲亢性心臟病等并發(fā)癥,從而威脅到患者的生命安全。因此本研究選取2018年8月~2019年8月期間我收治的的100例患有自身免疫性甲狀腺炎(AITD)的患者作為研究對象,從而探討Let-7a調(diào)控自身免疫性甲狀腺炎發(fā)生發(fā)展及其機制,具體報道如下。
選取2019年4月~2019年8月期間我收治的的100例患有自身免疫性甲狀腺炎(AITD)的患者作為研究對象,收集齊清晨空腹靜脈血,并將其設(shè)為實驗組;收集同一時期在我院進行體檢的100名人員的空腹靜脈血樣本,并將其設(shè)為對照組。
本研究采取的方法如下:①收集臨床血清:用不含抗凝劑的普通采血管(紅帽)收集患者的外周靜脈血(一般為5 ml),然后提取血清;②構(gòu)建自身免疫性甲狀腺炎大鼠模型:將60只SPF級SD雌性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始造模,并隨機分為正常對照組和自身免疫性甲狀腺炎大鼠模型組,每組各30只;其中模型組按照體重給予高碘水(500 g/L),對照組給予蒸餾水,8周后收集兩組大鼠血清樣本進行qRT-PCR實驗;③RNA的提取和轉(zhuǎn)錄:利用TRIzol、二甲基亞砜(DMSO)、異丙醇及無水乙醇等有機試劑進行RNA的提取;④Real time qPCR反應(yīng)→TUNEL染色→細胞轉(zhuǎn)染→流式細胞術(shù)→Western blot實驗。
所有數(shù)據(jù)均采用Graph Pad Prism 5軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料應(yīng)用數(shù)值和百分數(shù)表示,計量資料數(shù)據(jù)用±s表示,采用兩組獨立樣本的t檢驗,概率值P<0.05表示差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。
在前期實驗中,通過收集10例正常人和10例自身免疫性甲狀腺炎患者的血清樣本來檢測miRNAs的表達情況,qRT-PCR結(jié)果顯示,①let-7a、miR-125、miR-1792在實驗組患者的血清中明顯升高,而miR-142和miR-155在實驗組患者血清中沒有明顯的變化;②與治療前相比,治療過程中l(wèi)et-7a、miR-125、miR-1792在實驗組患者的血清中均降低;③與對照組相比,let-7a、miR-125、miR-1792在模型組大鼠血清中均有所升高,其中l(wèi)et-7a升高最明顯。
在本研究中,通過上述方法,let-7a、miR-125、miR-1792在實驗組患者的血清中明顯升高,而miR-142和miR-155在實驗組患者血清中沒有明顯的變化;與治療前相比,治療過程中l(wèi)et-7a、miR-125、miR-1792在實驗組患者的血清中均降低;與對照組相比,let-7a、miR-125、miR-1792在模型組大鼠血清中均有所升高,其中l(wèi)et-7a升高最明顯,差異明顯,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。因此,我們可認為,let-7a可能與自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)生和發(fā)展有著一定的聯(lián)系。