付金鳳，朱曉雯

(常州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心，江蘇 常州 213000)

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏日益加快，社會(huì)壓力與日俱增，生態(tài)環(huán)境逐漸惡化，脫發(fā)患者越來越多，各種標(biāo)識(shí)具有防脫、生發(fā)功效的育發(fā)類化妝品也應(yīng)運(yùn)而生。然而，部分不法商家為獲取利潤(rùn)，盲目追求產(chǎn)品的有效性，向其中非法添加甾體類激素成分。甾體激素中的糖皮質(zhì)激素，如氫化可的松、醋酸曲安奈德等，在臨床中常被用于治療斑禿，而雌性激素，如雌酮，黃體酮等具有促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的作用，已被臨床應(yīng)用于治療雄性激素源脫發(fā)。但甾體激素具有一定程度的毒副作用，雌性激素有潛在的致癌風(fēng)險(xiǎn)，糖皮質(zhì)激素會(huì)引起向心性肥胖，感染等[1-3]?！痘瘖y品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)[4]中明確規(guī)定禁止在化妝品中添加上述幾種藥物。

本研究采用液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)育發(fā)化妝品中氫化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黃體酮含量進(jìn)行測(cè)定，參考JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[5]，對(duì)育發(fā)類化妝品中上述四種成分檢測(cè)的不確定度進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)，以期為育發(fā)類化妝品非法添加檢測(cè)提供參考與依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀 器

Shimadzu LCMS-8050液質(zhì)聯(lián)用儀，Shimadzu公司；XPE105電子天平(d=0.01 mg)，Mettler-Toledo公司；計(jì)量檢定合格的A級(jí)玻璃量器。

1.2 試 劑

氫化可的松(100152-201707，99.2%)；雌酮(100849-200501)；醋酸曲安奈德(100125-201406，99.1%)；黃體酮(100027-201810，99.6%)，以上標(biāo)準(zhǔn)品均購自中國(guó)食品藥品檢定研究院；樣品為霸王育發(fā)液(KM11H8)。

1.3 儀器分析條件

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(2.1×100 mm，3.5 μm)，流動(dòng)相A：0.2%甲酸水溶液，流動(dòng)相B：甲醇(含0.2%甲酸)，柱溫30 ℃，流速0.3 mL/min，梯度洗脫程序：0～2 min：5%～25%B，2～4 min：25%～55%B，4～11 min：55%～80%B，11～18 min：80%～90%B。以三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，電噴霧離子源(ESI)，掃描方式：正離子掃描，檢測(cè)方式：MRM。

1.4 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的制備方法

精密稱取氫化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黃體酮標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，置10 mL量瓶中，加入甲醇使溶解，稀釋定容，得混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅰ(1 mg/mL)。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅰ 5 mL，置100 mL量瓶中，90%乙腈稀釋定容，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅱ(50 μg/mL)。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅱ 1 mL，置50 mL量瓶中，90%乙腈稀釋定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅲ(1 μg/mL)。

1.5 混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備方法

用1 mL、1 mL、5 mL、1 mL、2 mL移液管精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅲ至100 mL、50 mL、100 mL、10 mL、10 mL量瓶中，用1 mL、1 mL、3 mL移液管精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液Ⅱ至100 mL、50 mL、100 mL量瓶中，用90%乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、1500.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.6 供試品溶液的制備方法

精密稱取本品1 g(精確到0.001 g)于10 mL容量瓶中，加入1 mL飽和氯化鈉溶液，渦旋30 s后加入乙腈，定容至刻度，渦旋30 s，超聲提取30 min，渦旋1 min，4500 rpm離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，濾液作為待測(cè)液備用。

1.7 測(cè)定方法

精密吸取上述混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及供試品溶液各5 μL，注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，測(cè)定峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算供試品中相當(dāng)于氫化可的松、雌酮、醋酸曲安奈德、黃體酮標(biāo)準(zhǔn)品的濃度。

2 結(jié)果與討論

2.1 數(shù)學(xué)模型

式中：ω為化妝品中4種甾體激素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，ng/g；D為樣品稀釋倍數(shù)(不稀釋則為1)；ρ從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)組分的質(zhì)量濃度，ng/mL；V為樣品定容體積，mL；m為樣品取樣量，g。

2.2 不確定度來源分析

由上述數(shù)學(xué)模型可知，不確定度來源主要包括：標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度、供試品溶液引入的不確定度、實(shí)驗(yàn)儀器及環(huán)境引入的不確定度[7-9]。

2.3 不確定度分量的評(píng)定

2.3.1 供試品制備過程引入的不確定度

(1)供試品稱量過程

表1 樣品稱量引入的不確定度

(2)供試品稀釋過程

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備過程引入的不確定度

(1)標(biāo)準(zhǔn)品稱量過程引入的相對(duì)不確定度

表2 標(biāo)準(zhǔn)品稱量引入的不確定度

(2)制備標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的玻璃器皿引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

表3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為：10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0、1000.0、1500.0 ng/mL，配制過程中引入的相對(duì)不確定度分別0.00637、0.00637、0.00522、0.00645、0.00579、0.00481、0.00481、0.00389，取其中最大的不確定度值，則urel(v0)=0.00645。

2.3.3 液質(zhì)聯(lián)用儀引入的不確定度

2.3.4 樣品前處理引入的不確定度

表4 樣品前處理引入的不確定度

2.4 樣品的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度、擴(kuò)展不確定度及結(jié)果表述

表5 不確定度分量及合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

樣品的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：u(Cx)=C×urel(Cx)，在95%的置信區(qū)間下，取包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為：U(Cx)=k×u(Cx)，樣品中四種甾體激素含量見表6。

表6 樣品合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度、擴(kuò)展不確定度及結(jié)果表述

3 結(jié) 論

本研究對(duì)育發(fā)類化妝品中非法添加甾體激素類成分檢測(cè)的不確定度進(jìn)行了較為全面的分析，由表5可知，標(biāo)準(zhǔn)品稱量、標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液的配制、儀器進(jìn)樣精密度及樣品回收率對(duì)不確定度貢獻(xiàn)較大。因此，在實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)定期對(duì)電子天平及液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢定和維護(hù)保養(yǎng)，對(duì)玻璃器皿進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)與考核，對(duì)檢測(cè)過程進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，盡量減少實(shí)驗(yàn)過程中的不確定性，以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和可靠性[13-14]。