王超 楊毅

【摘 要】 目的：提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力及檢驗(yàn)員檢驗(yàn)水平。方法：按照GB 4789.4-2010對(duì)考核盲樣進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：此2份考核盲樣中檢出 1號(hào)菌為福氏志賀氏菌，2號(hào)菌為腸炎沙門(mén)氏菌。結(jié)論：增強(qiáng)了微生物實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)微生物的技術(shù)水平，促進(jìn)質(zhì)量檢驗(yàn)控制水平的的不斷提高。

【中圖分類號(hào)】R691.4

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1005-0019（2020）22-250-01

微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制，是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測(cè)工作的基礎(chǔ)，直接關(guān)系到細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。通過(guò)質(zhì)控考核提高微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，檢驗(yàn)人員技術(shù)水平，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室競(jìng)爭(zhēng)力。近年來(lái)，隨著本實(shí)驗(yàn)室多次參加國(guó)家、自治區(qū)、市舉辦的微生物檢驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量考核， 通過(guò)多次的質(zhì)量考核，我們實(shí)驗(yàn)室不僅在微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量考核中取得不錯(cuò)的成績(jī)，而且每一次的質(zhì)量考核讓我們實(shí)驗(yàn)室從中認(rèn)識(shí)自身的不足，總結(jié)近年來(lái)參加質(zhì)量考核所總結(jié)得一些經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)今把近年來(lái)參加微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控考核的結(jié)果報(bào)道如下：

1 試驗(yàn)資料

1.1 材料與方法

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 由國(guó)家，自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心所下發(fā)的考核盲樣 （ 菌株）

1.1.2 儀器設(shè)備 VITEK-2，恒溫培養(yǎng)箱，顯微鏡

1.1.3 檢測(cè)試劑 緩沖蛋白胨水，7.5%氯化鈉肉湯，LB增菌液，GN增菌液，1%葡萄糖肉湯，3%氯化鈉堿性蛋白胨水，mLST-Vm 增菌液，mEC肉湯，Bolton肉湯，CIN-1平板，skirrow瓊脂平板，DGI瓊脂平板，B-P平板，MYP平板，伊紅美蘭（EMB）平板，SS平板，HE平板，沙門(mén)顯色平板，XLD平板，三糖鐵瓊脂，生化反應(yīng)微量管，G染色液，血瓊脂平板以上所用到的檢驗(yàn)用品均是購(gòu)自北京陸橋微生物科技有限公司，在有效使用期內(nèi)的檢驗(yàn)用品，另外的生理鹽水本實(shí)驗(yàn)室所自行配制。

1.1.4 分離培養(yǎng)與鑒定 根據(jù)《 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) （ 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)） 》 的標(biāo)準(zhǔn)（ GB 4789— 2003/GB 4789—2010） 〔1〕，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)盲樣微生物標(biāo)本進(jìn)行分離以及培養(yǎng)和最終的鑒定。所有操作均在BSL-2生物安全實(shí)驗(yàn)室或萬(wàn)級(jí)凈化實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，注意生物安全和無(wú)菌操作。

1.1.5 標(biāo)準(zhǔn)菌株 沙門(mén)氏菌;志賀氏菌群 ;金黃色葡萄球菌

1.2 檢測(cè)程序

1.2.1 增菌的方法 首先通過(guò)一次性無(wú)菌接種針將考核盲樣樣品轉(zhuǎn)移到常規(guī)的營(yíng)養(yǎng)肉湯中，觀察其中常規(guī)營(yíng)養(yǎng)肉湯的溫度恒定在（36士1 ） ℃，觀察時(shí)間是24小時(shí)，同時(shí)在未增菌培養(yǎng)時(shí)，挑取稀釋的樣品在HE平板和SS平板上先進(jìn)行分離培養(yǎng)。

1.2.2 分離的方法 在采用無(wú)菌操作的情況下，分段畫(huà)法于SS平板、HE平板、瓊脂平板、EMB平板、沙門(mén)顯色平板、XLD平板等各類平板，溫度均保持在（36±1）℃。培養(yǎng)24小時(shí)，平板上出現(xiàn)單個(gè)菌落。

1.2.3 單個(gè)菌落挑取三糖鐵的同時(shí)進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)瓊脂純培養(yǎng)。

1.2.4 純培養(yǎng)的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)上VITEK-2

2 結(jié)果

2.1 增菌 有較為渾濁的液體在增菌管中生長(zhǎng)。

2.2 分離培養(yǎng) 在第一天的SS平板和HE平板上出現(xiàn)無(wú)色，光滑，凸起的菌落，比增菌后的菌落純度更高，我們定為1號(hào)菌。XLD平板和沙門(mén)顯色平板上觀察到光滑濕潤(rùn)，產(chǎn)H2S的中等大小菌落，我們定為2號(hào)菌。

2.3 染色 采用的是革蘭氏染色，從純培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行，其染色的結(jié)果：此兩種菌均為革蘭氏染色陰性桿菌

2.4 生化反應(yīng) 1號(hào)菌三糖鐵乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，呈現(xiàn)上紅下黃，無(wú)動(dòng)力;2號(hào)菌上紅下黑，有動(dòng)力，上VITEK-2結(jié)果99%的符合度。1號(hào)菌為志賀氏菌屬;2號(hào)菌為沙門(mén)氏菌屬。

2.5 血清凝集

1號(hào)菌志賀氏菌四多價(jià)（+++），福多價(jià)血清凝集（+++），Ⅰ型（+++），群3，4（+++）

2號(hào)菌A-F多價(jià)O抗原（+++），O9（+++），H抗原鑒定第一相g、m（+++）生理鹽水對(duì)照（-）。

2.6 檢測(cè)結(jié)果 1號(hào)菌：福氏志賀氏菌1a;2號(hào)菌：腸炎沙門(mén)氏菌。

3 討論

通過(guò)本次試驗(yàn)認(rèn)為在今后的檢測(cè)過(guò)程中需要注意方面如下：

（1） 嚴(yán)格做好室內(nèi)質(zhì)量控制是前提，用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測(cè)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。同時(shí)對(duì)菌落形態(tài)大小，生化反應(yīng)更有直觀的體現(xiàn)。（2）增菌：通過(guò)上述的檢測(cè)的方法，可以得出通過(guò)增菌進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)菌在24小時(shí)內(nèi)生長(zhǎng)，并且大多數(shù)菌生長(zhǎng)良好，但對(duì)于志賀氏菌這類的生長(zhǎng)能力弱的細(xì)菌，容易在增菌的過(guò)程被其他優(yōu)勢(shì)菌掩蓋，因此在未增菌前進(jìn)行分離培養(yǎng)效果更好。（3）分離培養(yǎng) 在本次試驗(yàn)檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)菌群是沙門(mén)菌，志賀氏菌不僅數(shù)量較少，而且菌的大小也小，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易被掩蓋，被漏檢，給參加質(zhì)控考核的實(shí)驗(yàn)室增加一定的難度，不僅在質(zhì)控考核中，即使在我們?nèi)粘５募?xì)菌菌株的檢測(cè)中也應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)的操作，把握好檢測(cè)的過(guò)程，只有在把參加質(zhì)控考核的態(tài)度與日常的工作結(jié)合，仔細(xì)的完成每一個(gè)步驟，提高微生物的檢出率。（4）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)做好消毒質(zhì)量控制。（5）微生物在不斷的變化，一些新的菌種在不斷的出現(xiàn)，測(cè)定技術(shù)不斷更新和多樣化，因此作為檢測(cè)人員必須不斷進(jìn)行知識(shí)更新學(xué)習(xí)。

綜上所述，盲樣菌株微生物室間質(zhì)控考核的評(píng)定，主要的目的是評(píng)定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)微生物細(xì)菌水平的對(duì)比。也是計(jì)量認(rèn)證和國(guó)家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的特定要求[2-5]，最重要是觀察實(shí)驗(yàn)室通過(guò)參加質(zhì)控考核所取得強(qiáng)化室內(nèi)質(zhì)量控制效果，從而不斷提高自己的檢測(cè)水平，通過(guò)參加舉辦的微生物室問(wèn)的質(zhì)量控制考核，發(fā)現(xiàn)了微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)水平的不足，增強(qiáng)了微生物實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)微生物的技術(shù)水平，促進(jìn)質(zhì)量檢驗(yàn)控制水平的的不斷提高。

參考文獻(xiàn)

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