梁仁杰,衛(wèi)利民,徐 斌,趙治國，喬 亮

(河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 腫瘤外科,河南 洛陽471000)

胃癌是臨床中常見的惡性腫瘤之一，以食欲下降、體重減輕、疼痛、飽脹等為主要臨床表現(xiàn)，具有發(fā)病率及死亡率高的特點，對人類的生命健康危害極大[1]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查資料顯示[2]，目前我國每年約有67.9萬新發(fā)胃癌病例，其中約有49.8萬因胃癌死亡。胃癌的發(fā)生發(fā)展是較為復(fù)雜的病變過程，一般與多種原癌及抑癌基因的表達(dá)及調(diào)控有關(guān)。P53是人體中一種常見的抑癌基因。據(jù)報道[3]，P53基因參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程。軸蛋白(Axin)是一種Axin基因編碼的構(gòu)架蛋白。有研究顯示[4]，Axin與細(xì)胞的分化、增殖和凋亡均有密切關(guān)系，甚至可能參與腫瘤轉(zhuǎn)移及浸潤。幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是一種生存于人體胃幽門部位的螺旋形、微厭氧的細(xì)菌病原體之一，具有較強的潛伏性、侵襲性。另有研究指出[5]，Hp感染是胃癌發(fā)生過程的啟動及促進(jìn)因子。結(jié)合上述研究可知，P53、Axin蛋白及Hp感染均與胃癌的發(fā)生過程存在關(guān)聯(lián)，但目前關(guān)于胃癌患者組織中P53、Axin蛋白表達(dá)與Hp感染和病理特征的具體關(guān)系尚不明確，仍需深入探討。鑒于此，本研究通過回顧性分析醫(yī)院收治的88例經(jīng)病理證實的胃癌患者的臨床資料，以期為胃癌發(fā)生的分子機(jī)制、早期診斷及預(yù)后判定等提供相關(guān)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年2月-2019年5月醫(yī)院收治的88例經(jīng)手術(shù)切除并病理證實的胃癌患者的臨床資料，男48例，女40例，年齡30-80歲，平均(65.86±13.19)歲，胃癌組織學(xué)分類：高、中分化56例，低分化32例，浸潤深度：黏膜/黏膜下層52例，肌層/漿膜層36例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)者[6]，均實施P53、Axin蛋白及Hp感染檢測，均有完整的臨床資料。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有精神疾病及語言溝通障礙者；存在其他重要器官疾病或腫瘤史者；家屬拒絕對其資料回顧分析者；術(shù)前放化療者。

1.2 方法

Hp感染檢測方法：采用Warthin-Starry銀染法檢測Hp感染情況，所用試劑由上海生工生物技術(shù)公司提供。具體操作：收集新鮮組織，采用Warthin-Starry銀染液對組織染色，并對染色結(jié)果觀察，其中觀察粘膜淺層可見呈弧形或S形Hp小短桿狀菌，且呈棕黑至黑色者，記為陽性。

P53蛋白、Axin蛋白的檢測方法：采用免疫組化SP法檢測P53蛋白、Axin蛋白的表達(dá)水平，所用試劑為北京天根生物公司提供。具體操作：收集新鮮胃癌組織及癌旁組織(距胃癌組織邊緣5 cm以上的正常胃黏膜組織)，用4%體積分?jǐn)?shù)的甲醛固定，并石蠟包埋。將蠟塊進(jìn)行4 μm/片的切片，免疫組化SP染色依據(jù)試劑盒說明書操作。采用已知的陽性片作為陽性對照。P53陽性細(xì)胞及Axin陽性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)：P53定位于細(xì)胞核，Axin定位于細(xì)胞漿，通過顯微鏡觀察，細(xì)胞核或細(xì)胞漿中發(fā)現(xiàn)棕黃色顆粒沉淀的細(xì)胞記為陽性細(xì)胞。隨機(jī)選取10個視野，以陽性染色細(xì)胞占比≥10%者記為對應(yīng)蛋白陽性表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)

①統(tǒng)計本組受試者胃癌組織及癌旁組織中P53、Axin蛋白表達(dá)情況；②對比Hp感染者和未感染者胃癌組織P53、Axin蛋白表達(dá)情況；③對比不同病理特征患者胃癌組織中P53、Axin蛋白表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

將SPSS25.0軟件作為統(tǒng)計學(xué)工具，計數(shù)資料以“n/%”描述，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本組受試者胃癌組織及癌旁組織中P53、Axin蛋白表達(dá)情況

胃癌組織中P53蛋白陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織(P<0.05)，胃癌組織中Axin蛋白陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織(P<0.05)。見表1及圖1，2。

表1 P53、Axin蛋白在胃癌組織及癌旁組織中表達(dá)情況(%)

圖1 P53蛋白免疫組化檢測圖(A：癌旁組織中P53蛋白的陰性表達(dá)，B：胃癌組織中P53蛋白的陽性表達(dá)，40倍)

圖2 Axin蛋白免疫組化檢測圖(C：癌旁組織中Axin蛋白的陽性表達(dá)，D：胃癌組織中Axin蛋白的陰性表達(dá)，200倍)

2.2 Hp感染者和未感染者胃癌組織P53、Axin蛋白表達(dá)情況對比

所有入選患者中共50例(56.82%)發(fā)生Hp感染，38例(43.18%)未發(fā)生Hp感染。Hp感染者的P53蛋白陽性表達(dá)率顯著高于未感染者(P<0.05)，Axin蛋白陽性表達(dá)率顯著低于未感染者(P<0.05)，見表2。

表2 Hp感染者和未感染者P53、Axin蛋白表達(dá)情況對比(%)

2.3 不同病理特征患者胃癌組織中P53、Axin蛋白表達(dá)情況對比

低分化程度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤肌層/漿膜層的患者的P53蛋白表達(dá)率顯著高于高、中分化程度、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤黏膜/黏膜下層的患者的P53蛋白陽性表達(dá)率(P<0.05)，低分化程度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤肌層/漿膜層的患者的Axin蛋白陽性表達(dá)率顯著低于高、中分化程度、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤黏膜/黏膜下層的患者的Axin蛋白陽性表達(dá)率(P<0.05)，腫瘤直徑(腫瘤直徑≤4 cm或腫瘤直徑>4 cm)的患者的P53、Axin蛋白陽性表達(dá)率相近(P>0.05)，見表3。

表3 不同病理特征患者胃癌組織中P53、Axin蛋白表達(dá)情況對比

3 討論

胃癌在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居前幾位，且因胃癌早期并無明顯的特異性癥狀，多數(shù)患者在就診時已處于進(jìn)展期，故此類患者的5年生存率低，危害嚴(yán)重[7]。胃癌常見的病因包括遺傳因素、環(huán)境因素、Hp感染、原癌基因激活及抑癌基因缺失突變等，均可導(dǎo)致細(xì)胞增殖與凋亡失控，進(jìn)而誘導(dǎo)病情進(jìn)展[8,9]。胃癌患者之所以出現(xiàn)細(xì)胞增殖與凋亡的失控，根本原因在于基因突變所致的細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控蛋白的異常表達(dá)，致使癌細(xì)胞大量增殖和分化[10]。P53、Axin是人體重要的抑癌基因，P53、Axin蛋白可以抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞分化，與胃癌的發(fā)生和發(fā)展之間關(guān)系密切[11]。另有研究顯示[12]，Hp感染所引發(fā)的胃黏膜慢性炎癥加之環(huán)境因素可以加速胃黏膜上皮細(xì)胞的過度增殖，最終導(dǎo)致胃癌的發(fā)生。但是，目前關(guān)于胃癌患者組織中P53、Axin蛋白表達(dá)與Hp感染和病理特征的關(guān)系認(rèn)識尚淺，仍需要深入研究。

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)免疫組化檢測出胃癌組織中P53蛋白陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，Axin蛋白陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織，提示胃癌患者組織中存在P53、Axin蛋白異常表達(dá)情況，同時也說明P53、Axin蛋白參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。與既往研究相符[13,14]。正常情況下P53蛋白的半衰期短，并且極不穩(wěn)定，非常容易失活，常規(guī)的蛋白檢測方法很難測出[15]，若結(jié)果檢出P53蛋白則意味著該基因已經(jīng)發(fā)生突變，而突變型的基因所表達(dá)P53蛋白可參與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞分化，對胃癌的發(fā)生和病情進(jìn)展有重要的推動作用。Axin作為重要的抑癌基因，含有多個功能結(jié)構(gòu)域，為目前公認(rèn)的抑癌基因，采用基因干擾技術(shù)增強其表達(dá)水平可抑制惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)凋亡[16]，且在多種惡性腫瘤組織中均被證實其表達(dá)水平下降[17-19]，推測Axin表達(dá)被抑制，可參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展，并增強胃癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。此外Axin可以與P53結(jié)合參與P53信號通路，并通過同源結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白激酶2激活野生型P53，從而促進(jìn)抑癌基因P53的轉(zhuǎn)錄活性和細(xì)胞凋亡作用。此外，Axin與突變型P53相互作用，共同下調(diào)β-catenin的表達(dá)，協(xié)同發(fā)揮腫瘤抑制因子的作用。通過上述分析可知，突變型P53與Axin呈負(fù)相關(guān)作用，二者共同參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中Hp感染陽性率高，且Hp感染者的P53蛋白及Axin蛋白陽性表達(dá)率顯著高于未感染者，提示胃癌患者多伴有Hp感染，且伴Hp感染者存在P53、Axin蛋白表達(dá)異常情況。Hp是誘發(fā)胃癌的啟動因子，能夠誘導(dǎo)加速細(xì)胞有絲分裂，損傷細(xì)胞DNA，并激活原癌基因，使抑癌基因失活，導(dǎo)致胃癌基因的異常表達(dá)，從而增加癌變風(fēng)險。有研究顯示[20]，Hp感染可引發(fā)胃黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)慢性炎癥反應(yīng)而損傷胃黏膜上皮細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)P53、Axin基因突變，致使胃黏膜上皮細(xì)胞的凋亡能力降低，并導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞增殖及凋亡功能發(fā)生紊亂，引發(fā)細(xì)胞堆積，從而導(dǎo)致腫瘤的形成。由此推測Hp感染可能導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞P53基因及Axin基因發(fā)生突變，從而使P53表達(dá)增強，Axin蛋白表達(dá)降低，進(jìn)而參與胃癌的發(fā)生與發(fā)展。

此外，本研究還顯示，P53蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、浸潤肌層/漿膜層的胃癌組織中陽性表達(dá)率高，Axin蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、浸潤肌層/漿膜層的胃癌組織中陽性表達(dá)率低，提示伴Hp感染胃癌患者組織中P53、Axin蛋白表達(dá)與胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度等病理特征關(guān)系密切。姜志新[21]等人研究顯示，P53蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化的胃癌組織中表達(dá)量高。趙磊[22]研究發(fā)現(xiàn)，Axin蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化的胃癌組織中表達(dá)量減少或者缺失，與本研究結(jié)果相符，證實胃癌伴Hp感染者組織中P53、Axin蛋白均呈異常表達(dá)，P53、Axin核蓄積可能為胃癌發(fā)生及發(fā)展的病理過程中重要組成部分，二者可作為胃癌發(fā)生早期的評價指標(biāo)之一。通過上述分析可知，伴Hp感染胃癌組織中P53、Axin蛋白表達(dá)情況與不同病理特征關(guān)系密切，且P53基因突變可能下調(diào)Axin蛋白的表達(dá)，進(jìn)而增加胃癌的擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移發(fā)生幾率，但具體機(jī)制仍有待研究。

綜上所述，胃癌伴Hp感染者組織中P53蛋白陽性表達(dá)率高、Axin蛋白陽性表達(dá)率低，且二者陽性表達(dá)率與胃癌組織分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度的病理特征存在關(guān)聯(lián)。因此，建議臨床上對伴有Hp感染的胃癌前病變患者加強P53、Axin蛋白的檢測，并及時給予針對治療，以降低胃癌的發(fā)生。