羅 焱，劉 丹

（1.三峽大學附屬仁和醫(yī)院藥學部，湖北 宜昌 443001；2.湖北中醫(yī)藥大學藥學院，武漢 430061）

高良姜素（Galangin，3,5,7-三羥基黃酮），是一種天然來源的黃酮醇類化合物，主要分布于中藥高良姜Alpinia officinarum Hance的干燥根莖中，高良姜味辛，性熱，因此有學者將高良姜用于細胞造熱證模型[1]。高良姜素藥理作用廣泛，具有清除自由基，抗氧化功能[2]，抑制P450 酶系[3]，抗致畸突變作用[4-5]，抗微生物活性[6]，抗病毒作用[7]，心肌細胞保護作用[8]。現代藥理研究發(fā)現，高良姜素具有顯著的抗腫瘤活性。

1 材料與方法

1.1 細胞株 人乳腺癌細胞株MCF-7、人肺癌細胞株A549、人胃癌細胞株MGC-803、人前列腺癌細胞PC-3、人黑色素瘤細胞株A875、人宮頸癌細胞株Hela、人肝癌細胞株HepG-2，購于武漢大學典型培養(yǎng)物保藏中心，保存于湖北中醫(yī)藥大學中藥資源與中藥化學湖北省級重點實驗室。

1.2 藥物與試劑 高良姜素（實驗室自制，經液相檢測純度＞98%），DMEM 培養(yǎng)液（美國Gibco 公司，批號：8416246），胎牛血清（FBS，美國Gibco 公司，批號：1715752），胰酶（含0.25%EDTA，上海源培生物科技有限公司，批號：G40308），DMSO（細胞級，美國Gibco 公司，批號：RNBC9664），PBS（美國Gibco 公司，批號：NAF1410），MTT（美國Sigma公司，批號：2128），其他試劑未經說明均為分析純，試驗時直接使用。

1.3 儀器 超凈臺（蘇州凈化設備有限公司），XDS-1B 倒置顯微鏡（重慶光電儀器公司），HH-CP-01 型CO2培養(yǎng)箱（上海百典儀器有限公司），Model680 型全自動酶標儀（美國BIO-RAD），十萬分之一分析天平（BP-211D，德國Sartorius 公司），超聲波清洗儀（KQ3200DE，昆山市超聲儀器有限公司），恒溫水浴鍋（金壇市易晨儀器制造有限公司），離心機（大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司），高壓滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）。

2 方法

2.1 細胞培養(yǎng) 分別取凍存好的腫瘤細胞復蘇以后，在含有10% FBS 的DMEM 培養(yǎng)液的培養(yǎng)基，37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2 d 換1 次培養(yǎng)基，細胞長滿即可傳代培養(yǎng)。

2.2 MTT 法檢測高良姜素對腫瘤細胞的抑制作用 分別取生長狀態(tài)良好處于對數期的細胞通過細胞計數板將細胞密度調整為60 000/mL，接種在96 孔板，每孔100 μL。每孔加入10 μL 藥液，藥液分為6 個濃度，最終濃度為5、10、20、40、80、160 μmol/L，每個濃度設置3 個復孔，同時設置細胞對照組，空白調零組。在培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24 h、48 h 后，每孔加入10 μL MTT，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育3～ 4 h 后在490 nm 處測定吸光度，測定前吸走舊培養(yǎng)基，然后每孔加入100 μL DMSO，試驗重復3 次。

2.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，所有計量資料以均數±標準差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，以P＜ 0.05 認為差異具有統(tǒng)計學意義。

3 結果

經高良姜素處理A549、A875、HepG-2、Hela、MCF-7、PC-3 和MGC-803 共7 種腫瘤細胞，均表現出不同程度的增殖抑制作用。分別作用24 h、48 h 后，腫瘤細胞對高良姜素均表現出了不同的敏感度，腫瘤細胞顯示出了一定的體外抑制活性，并且隨著藥物濃度增加，細胞增殖抑制率隨之增加，表現出了濃度依賴性。對比24 h 與48 h 抑制效果，48 h 抑制效果優(yōu)于24 h，呈現出了時間依賴性。高良姜素對腫瘤細胞的抑制作用結果，見表1～表2，IC50見表3。

表1 高良姜素對不同腫瘤細胞作用24 h 抑制率（，n =3） %

表1 高良姜素對不同腫瘤細胞作用24 h 抑制率（，n =3） %

注：與細胞對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表2 高良姜素對不同腫瘤細胞作用48 h 抑制率（，n =3） %

表2 高良姜素對不同腫瘤細胞作用48 h 抑制率（，n =3） %

注：與細胞對照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表3 高良姜素對不同腫瘤細胞作用IC50 μmol/L

4 討論

高良姜素對這7 類腫瘤細胞抑制作用中，最敏感的腫瘤細胞為MCF-7，其次為HepG-2、MGC-803、A549、Hela、PC-3，敏感度較差的為A875。結果表明：高良姜素是一個具有廣譜抗腫瘤作用的黃酮醇類化合物，不少黃酮類化合物均表現出了一定的抗腫瘤活性[9]，并且高良姜素對腫瘤細胞的抑制作用呈現出了濃度與時間依賴性。有關高良姜素抗腫瘤作用近年來研究比較廣泛，高良姜素可以通過誘導腫瘤細胞凋亡[10-11]、促進腫瘤細胞自噬[12]、抑制腫瘤細胞轉移[13]以及周期阻滯[14]等途徑發(fā)揮抗腫瘤作用[15]。此外，還有學者研究了高良姜素對宮頸癌細胞[16]、人胃癌細胞[17]、人肝癌細胞[18]、口腔癌細胞[19]、視網膜母細胞瘤[20]的抑制作用及其作用機制，高良姜素對同一腫瘤細胞不同亞型作用效果也不盡相同。高良姜素是通過哪些途徑或者哪種作用機制對上述的腫瘤細胞發(fā)揮抑制作用需要進一步驗證。