黃 媛

(福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，福州 350001)

苯并(a)芘(Benzo(a)pyrene, BaP)由5個(gè)苯環(huán)構(gòu)成，是毒性最大的一種多環(huán)芳烴。研究證實(shí)，苯并(a)芘是一種間接致癌物，在體內(nèi)潛伏期長(zhǎng)，通過(guò)慢性累積可引起細(xì)胞病變，從而引發(fā)肺癌、皮膚癌、上消化道腫瘤等[1-3]。2005年，歐盟規(guī)定食用油中苯并(a)芘含量不得超過(guò)2 μg/kg[4]。我國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)規(guī)定，食用油中苯并(a)芘最大限量值為10 μg/kg[5]。食用油是人們生活中的必需品，作為苯并(a)芘進(jìn)入人體的主要來(lái)源，對(duì)其苯并(a)芘含量的監(jiān)測(cè)與控制意義重大。

目前，植物油中苯并(a)芘的測(cè)定多采用熒光檢測(cè)器，但在前處理上仍需過(guò)柱凈化，存在成本高且過(guò)程煩瑣的問(wèn)題。本研究綜合文獻(xiàn)報(bào)道[6-7]，優(yōu)化方法，建立了一種高效率、低成本測(cè)定植物油中苯并(a)芘含量的方法，具有較強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品(o2si)，上海安譜科技股份有限公司；四氫呋喃、二氯甲烷，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈，山東禹王和天下新材料有限公司；環(huán)己烷，賽默飛世爾科技有限公司；正己烷，默克股份兩合公司；其他試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為超純水。

Waters e2695高效液相色譜儀(配備熒光檢測(cè)器)；Ultimate XB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，月旭科技股份有限公司；IKA MS 3 basic單發(fā)渦旋振蕩器，上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司；Sartorius BSA 224S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；BaP固相萃取柱(500 mg/6 mL)，Agela Technologies Cleanert。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確移取1.00 mL苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品(100 μg/mL)于50 mL棕色容量瓶中，使用乙腈溶解并定容，得2 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于-18℃冷凍保存；取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈逐級(jí)稀釋，得質(zhì)量濃度分別為0.1、0.2、1.0、5.0、20 ng/mL的苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 樣品前處理

本方法：稱取1.00 g植物油樣品于10 mL刻度管中，用萃取溶劑定容至5 mL，渦旋混勻30 s，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，上機(jī)測(cè)試。

國(guó)標(biāo)方法：按GB 5009.27—2016方法進(jìn)行樣品處理。

1.2.3 液相色譜條件

A相為水，B相為乙腈，C相為乙腈-四氫呋喃(體積比1∶1)，流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；柱溫35℃；激發(fā)波長(zhǎng)384 nm，發(fā)射波長(zhǎng)406 nm。本方法采用梯度洗脫(梯度洗脫程序見(jiàn)表1)。國(guó)標(biāo)方法流動(dòng)相采用10%A、90%B等度洗脫。

表1 本方法HPLC梯度洗脫程序

2 結(jié)果與分析

2.1 萃取溶劑的選擇

根據(jù)目標(biāo)物的溶解性，試驗(yàn)分別使用正己烷、石油醚、環(huán)己烷以及四氫呋喃作為萃取溶劑進(jìn)行萃取。結(jié)果表明：正己烷本底存在干擾，不利于目標(biāo)物定性及定量；采用石油醚及環(huán)己烷時(shí)，苯并(a)芘出峰展寬嚴(yán)重，且重現(xiàn)性較差；樣品采用四氫呋喃萃取后，經(jīng)色譜柱分離，苯并(a)芘峰型良好，且無(wú)雜質(zhì)干擾。因此，確定四氫呋喃為萃取溶劑。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

采用乙腈、水作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，在乙腈-水體積比為90∶10時(shí)，苯并(a)芘分離效果最好，且分析時(shí)間較短。由于樣品直接處理后即進(jìn)樣分析，色譜柱中可能會(huì)殘留少量油脂，多次進(jìn)樣后易導(dǎo)致其柱效下降。因此，本研究嘗試通過(guò)梯度洗脫的方式進(jìn)行色譜分離。根據(jù)四氫呋喃對(duì)油脂極強(qiáng)的溶解性，在目標(biāo)物出峰后，使用乙腈-四氫呋喃(體積比1∶1)對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，獲得了較好的重復(fù)性。圖1為BaP含量為4.43 μg/kg的植物油樣品液相色譜圖。

圖1 BaP含量為4.43 μg/kg的植物油樣品液相色譜圖

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 工作曲線、檢出限及定量限

將苯并(a)芘系列標(biāo)準(zhǔn)工作液注入液相色譜儀，分別以BaP質(zhì)量濃度對(duì)應(yīng)得到的峰面積繪制工作曲線。結(jié)果表明，目標(biāo)化合物在0.1～20 ng/mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=1 532 460X+11 717，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 9。方法的檢出限和定量限分別以3倍和10倍信噪比來(lái)進(jìn)行計(jì)算，得到檢出限為0.1 μg/kg，定量限為0.3 μg/kg。

2.3.2 回收率及精密度

隨機(jī)抽取6份不同種類的植物油進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)。樣品中添加適量苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，得高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度水平加標(biāo)試樣，渦旋混勻后按照本方法進(jìn)行分析，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，結(jié)果如表2所示。

表2 植物油中BaP的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)(n=6)

續(xù)表2

由表2可知，本方法回收率在93.5%～102.5%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于3.17%，符合檢測(cè)要求。

取植物油陽(yáng)性樣品，按本方法處理后進(jìn)樣分析，每日平行測(cè)定6次，連續(xù)測(cè)定3 d，得到日間精密度為2.01%，日內(nèi)精密度為1.67%，結(jié)果表明該方法具有良好的精密度。

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

對(duì)市場(chǎng)流通的不同品牌的6種植物油進(jìn)行隨機(jī)監(jiān)督抽查，按照本方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表3所示。

表3 6種植物油中苯并(a)芘含量的檢測(cè)結(jié)果

由表3可知，264份樣品中共有164份檢出苯并(a)芘，檢出率為62.1%，含量范圍在0.5～17.2 μg/kg之間。其中，花生油均檢出苯并(a)芘，橄欖油均未檢出，6種植物油苯并(a)芘檢出率高低順序?yàn)榛ㄉ?100%)>芝麻油(63.6%)>油茶籽油(59.2%)>玉米油(54.8%)>大豆油(40.0%)>橄欖油(0%)；按照我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)限量要求，檢出不合格油茶籽油1份(>10 μg/kg)，不合格率為0.38%；按照歐盟法規(guī)要求，檢出60份植物油不合格(>2 μg/kg)，不合格率為22.7%。

取代表性陽(yáng)性油樣10份(1#～10#)，分別采用本方法及國(guó)標(biāo)方法(GB 5009.27—2016)進(jìn)行試驗(yàn)，方法對(duì)比及結(jié)果對(duì)比分別見(jiàn)表4、表5。

表4 植物油中苯并(a)芘不同測(cè)定方法比較

表5 不同方法測(cè)定植物油中苯并(a)芘含量比較

由表4可知：相對(duì)于國(guó)標(biāo)方法，本方法增大了取樣量，降低了可能由取樣帶來(lái)的隨機(jī)誤差；在前處理上耗時(shí)短，有機(jī)溶劑使用量小，且無(wú)需過(guò)柱凈化，大大降低檢測(cè)成本。本方法在檢出限及定量限上均低于國(guó)標(biāo)方法，靈敏度滿足檢測(cè)要求。由表5可知，10份樣品中，兩種方法相對(duì)誤差小于等于6.35%，符合標(biāo)準(zhǔn)中不得高于20%的要求。說(shuō)明本方法適用于植物油中苯并(a)芘含量的測(cè)定。

3 結(jié) 論

本研究采用直接萃取法，對(duì)植物油中苯并(a)芘含量進(jìn)行測(cè)定。本方法在苯并(a)芘質(zhì)量濃度0.1～20 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999 9，檢出限為0.1 μg/kg，定量限為0.3 μg/kg，樣品加標(biāo)回收率在93.5%～102.5%之間。與國(guó)標(biāo)方法(GB 5009.27—2016)比較，本方法快速簡(jiǎn)便，低消耗低成本，在回收率和精密度上均滿足要求，可用于植物油中苯并(a)芘的高通量檢測(cè)，具有較強(qiáng)實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。