楊豐，吳涵，王逸鑫，李念，施文正,2，汪之和,2,3*

羅氏沼蝦低溫有水?；钤囼?yàn)

楊豐1，吳涵1，王逸鑫1，李念1，施文正1,2，汪之和1,2,3*

(1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；2.國(guó)家淡水水產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)分中心(上海)，上海 201306；3.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海 201306)

通過(guò)對(duì)?；顪囟?12、15、17、20、23、25 ℃)，蝦與水質(zhì)量比(1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶15)和暫養(yǎng)時(shí)間(0、12、24、36、48 h) 3個(gè)因素的單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定羅氏沼蝦低溫?；畹淖罴压に嚄l件，并檢測(cè)低溫保活過(guò)程中的水質(zhì)指標(biāo)及肌肉、血液、肝臟等蝦體組織指標(biāo)的變化，探究影響羅氏沼蝦的?；顧C(jī)理。結(jié)果表明：羅氏沼蝦的臨界溫度為9 ℃；單因素試驗(yàn)中，最佳?；顪囟葹?0 ℃，最佳蝦與水質(zhì)量比為1∶10，最佳暫養(yǎng)時(shí)間為24 h；正交試驗(yàn)中，最優(yōu)工藝為保活溫度20 ℃、蝦與水質(zhì)量比1∶12、暫養(yǎng)時(shí)間24 h，?；?4 h內(nèi)存活率可達(dá)100%；以正交優(yōu)化后的最優(yōu)工藝條件進(jìn)行羅氏沼蝦的低溫?；钤囼?yàn)，水樣中氨氮質(zhì)量濃度和菌落總數(shù)顯著上升(＜0.05)，但溶解氧質(zhì)量濃度、pH均仍在適宜羅氏沼蝦存活范圍內(nèi)變化，肌肉糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)、pH和三磷酸腺苷(ATP)質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降，乳酸濃度顯著上升(＜0.05)，血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力顯著上升(＜0.05)，肝臟糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著下降(＜0.05)，總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力先降后升，而丙二醛(MDA)含量則先升后降。說(shuō)明水質(zhì)指標(biāo)的變化會(huì)影響蝦體肌肉、血液及肝臟各組織正常的生理代謝，從而影響其保活時(shí)間和存活率。

羅氏沼蝦；有水?；?；低溫保活；?；顪囟?；暫養(yǎng)時(shí)間；保活時(shí)間；存活率

水產(chǎn)品因其富含優(yōu)質(zhì)蛋白且味道鮮美，廣受大眾喜愛(ài)。隨著人們生活品質(zhì)的提高，廣大消費(fèi)者對(duì)水產(chǎn)品的要求逐步從“有的吃”轉(zhuǎn)變到“吃得好”，對(duì)鮮活水產(chǎn)品的保活運(yùn)輸也提出了更高的要求[1-2]。水產(chǎn)品常用的保活方法有凈水法、增氧法、麻醉法、低溫法等。低溫法因其健康綠色、操作簡(jiǎn)便、成本低廉而深受青睞。

目前，對(duì)低溫?；畹难芯恐饕杏隰~(yú)類(lèi)，對(duì)蝦類(lèi)的?；?，尤其對(duì)中國(guó)四大淡水蝦之一的羅氏沼蝦的保活研究報(bào)道極少。SALIN[3]和COYLE等[4]分別研究了不同降溫速率和溫度對(duì)羅氏沼蝦存活的影響，證實(shí)通過(guò)一定的降溫速率和溫度控制可提高羅氏沼蝦的存活率。鑒于此，本研究中，采用低溫有水保活法，研究羅氏沼蝦受不同暫養(yǎng)時(shí)間、水溫、蝦與水質(zhì)量比(后簡(jiǎn)稱“蝦水比”)等因素影響下的水質(zhì)環(huán)境變化及蝦體生理變化，探究影響羅氏沼蝦的?；顧C(jī)理，以期為羅氏沼蝦的?；钐峁┮罁?jù)。

1　材料與方法

1.1　材料

供試羅氏沼蝦購(gòu)于上海市浦東新區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。蝦體質(zhì)量20～30 g，體長(zhǎng)10～15 cm。試驗(yàn)用水為經(jīng)過(guò)24 h以上充分曝氣的自來(lái)水。水質(zhì)相關(guān)指標(biāo)為：pH值7.87、溶解氧質(zhì)量濃度8.20 mg/L、氨氮質(zhì)量濃度0.17 mg/L、菌落總數(shù)7.24 cfu/mL。

1.2　臨界溫度的測(cè)定

臨界溫度又稱生態(tài)冰溫零點(diǎn)，是區(qū)分魚(yú)、蝦、貝類(lèi)等水產(chǎn)品生死的參考值點(diǎn)[5]。將經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)12 h的羅氏沼蝦放入經(jīng)充分曝氣的清潔自來(lái)水的魚(yú)箱中，利用冰袋降溫。降溫程序?yàn)椋寒?dāng)水溫＞20 ℃時(shí)，降溫速率為4～5 ℃/h；當(dāng)水溫16～20 ℃時(shí)，降溫速率為2～3 ℃/h；當(dāng)水溫＜16 ℃時(shí)，降溫速率為1～2 ℃/h。觀察羅氏沼蝦在不同溫度條件下的行為狀態(tài)，以所有步足喪失活動(dòng)能力、蝦體側(cè)躺水底、對(duì)外界的刺激無(wú)反應(yīng)(蝦體尚未死亡)的溫度作為其臨界溫度。

1.3　羅氏沼蝦低溫保活工藝優(yōu)化試驗(yàn)

1.3.1單因素試驗(yàn)

分別對(duì)?；顪囟取⑽r水比和暫養(yǎng)時(shí)間3個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

選擇健康鮮活、個(gè)體大小一致的羅氏沼蝦暫養(yǎng)12 h后，以蝦水比為1∶10，分別在12、15、17、20、23、25 ℃條件下進(jìn)行?；顪囟仍囼?yàn)，在保活4、10、17、24、32、40、48 h時(shí)檢活，記錄和計(jì)算存活率。

選擇最佳?；顪囟?，將暫養(yǎng)12 h后的羅氏沼蝦分別放入不同的蝦水比(1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶15)的保活箱中進(jìn)行試驗(yàn)，在?；?、10、17、24、32、40、48 h時(shí)檢活，記錄和計(jì)算存活率。

選擇最佳的?；顪囟群臀r水比，分別將暫養(yǎng)0、12、24、36、48 h后的羅氏沼蝦進(jìn)行試驗(yàn)，在?；?、10、17、24、32、40、48 h時(shí)檢活，記錄和計(jì)算存活率。

1.3.2正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)?；顪囟?)(17、20、23 ℃)、蝦水比()(1∶8、1∶10、1∶12)和暫養(yǎng)時(shí)間()(12、24、36 h)進(jìn)行3因素3水平的正交優(yōu)化，以存活率≥50%時(shí)的存活時(shí)間、?；?4 h時(shí)的存活率、?；?4 h時(shí)的水中氨氮質(zhì)量濃度和?；?4 h時(shí)的水中菌落總數(shù)為檢測(cè)指標(biāo)，并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。

1.4　羅氏沼蝦低溫?；钤囼?yàn)及指標(biāo)測(cè)定

以正交優(yōu)化后的最優(yōu)工藝條件進(jìn)行羅氏沼蝦的低溫保活試驗(yàn)，并分別在?；?、12、24、36、48 h時(shí)取水樣和蝦樣進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。

水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定：使用5B-3N便攜式氨氮測(cè)定儀測(cè)定水樣的氨氮質(zhì)量濃度；參照GB 4789.2—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》測(cè)定養(yǎng)殖水樣中的菌落總數(shù)；用JPB-607型便攜式溶解氧分析儀測(cè)定水樣的溶解氧質(zhì)量濃度；用FE28型pH計(jì)測(cè)定水樣pH。

蝦體指標(biāo)測(cè)定：采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定蝦血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活力，肝臟中糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)、丙二醛(MDA)含量和總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力，肌肉中糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)和乳酸濃度；用Waters2695高效液相色譜儀測(cè)定蝦體ATP質(zhì)量分?jǐn)?shù)；用FE28型pH計(jì)測(cè)定蝦肉pH。

1.5　數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果均用Microsoft Excel 2010和SPSS 24.0進(jìn)行處理，在單因素方差分析(ANOVA)的基礎(chǔ)上，采用Duncan法多重比較。運(yùn)用Origin9.1繪圖。

2　結(jié)果與分析

2.1　羅氏沼蝦的臨界溫度

當(dāng)溫度緩慢降低至14～15 ℃時(shí)，蝦體開(kāi)始出現(xiàn)劇烈的應(yīng)激反應(yīng)，尾部抽搐、水中掙扎等；11～13 ℃時(shí)，蝦體開(kāi)始失去平衡，側(cè)翻，對(duì)外界刺激反應(yīng)非常強(qiáng)烈，步足仍能正常游動(dòng)；10～11 ℃時(shí)，步足活動(dòng)減緩且呼吸不規(guī)律，側(cè)躺水中，反應(yīng)遲鈍，說(shuō)明蝦體已開(kāi)始進(jìn)入休眠狀態(tài)；9 ℃時(shí)，蝦體已完全靜止，側(cè)躺水底，對(duì)外界刺激已無(wú)反應(yīng)，尾部蜷曲。若繼續(xù)降溫，則導(dǎo)致蝦體死亡；若此時(shí)將蝦體轉(zhuǎn)移到常溫水中，蝦體在5～10 min內(nèi)可以恢復(fù)至正常狀態(tài)；因此，將9 ℃作為羅氏沼蝦的臨界溫度。

2.2　羅氏沼蝦低溫?；罟に噧?yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1單因素試驗(yàn)結(jié)果

由圖1可以看出，羅氏沼蝦在溫度12 ℃條件下的?；顣r(shí)間低于10 h；在15～20 ℃，隨溫度的增加，羅氏沼蝦?；顣r(shí)間與對(duì)應(yīng)的存活率均呈上升趨勢(shì)；?；顪囟壤^續(xù)升高，?；顣r(shí)間與對(duì)應(yīng)的存活率則均呈下降趨勢(shì)；其中，20 ℃時(shí)，保活時(shí)間可達(dá)48 h以上，存活率超過(guò)60%；因此，選擇?；顪囟?0 ℃進(jìn)行蝦水比和暫養(yǎng)時(shí)間單因素試驗(yàn)。

圖1　不同保活溫度下的羅氏沼蝦存活率

由圖2可以看出，?；?8 h內(nèi)，羅氏沼蝦的存活率隨蝦水比的減小而增大。當(dāng)蝦水比為1∶6時(shí)，保活時(shí)間只能達(dá)到24 h；當(dāng)蝦水比為1∶8時(shí)，存活時(shí)間可達(dá)32 h以上；而蝦水比為1∶10、1∶12、1∶15時(shí)，?；?8 h的存活率均在60%以上。在正常長(zhǎng)距離實(shí)際?；钸\(yùn)輸過(guò)程中，運(yùn)輸成本和存活率都是要考慮的因素，因此，選擇蝦水比為1∶10進(jìn)行暫養(yǎng)時(shí)間單因素試驗(yàn)。

圖2　不同蝦與水質(zhì)量比的羅氏沼蝦存活率

由圖3可以看出，暫養(yǎng)時(shí)間在0～24 h時(shí)，羅氏沼蝦保活48 h內(nèi)的存活率隨暫養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增大；而暫養(yǎng)時(shí)間超過(guò)24 h時(shí)，存活率隨暫養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，暫養(yǎng)24 h保活效果最好。超過(guò)24 h，由于不投喂餌料，造成蝦體體質(zhì)逐漸下降而影響到?；顣r(shí)間和成活率。

圖3　不同暫養(yǎng)時(shí)間的羅氏沼蝦存活率

2.2.2正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果列于表1。存活時(shí)間、存活率越大，蝦的?；钚Ч胶茫凰w氨氮質(zhì)量濃度、菌落總數(shù)越小，蝦的?；钚Ч胶谩１；顪囟?、蝦水比、暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)不同參考指標(biāo)的影響依次減小，最佳水平為232，即?；顪囟?0 ℃、蝦水比1∶12、暫養(yǎng)時(shí)間24 h。驗(yàn)證試驗(yàn)顯示，在此條件下羅氏沼蝦?；?4 h內(nèi)的存活率為100%，?；?8 h時(shí)存活率達(dá)80%以上，而25 ℃條件下保活24 h存活率低于50%；因此，確定232為羅氏沼蝦低溫有水?；畹南鄬?duì)最優(yōu)工藝。

表1　羅氏沼蝦低溫?；钫辉囼?yàn)結(jié)果

括號(hào)內(nèi)數(shù)字為正交試驗(yàn)因素水平編號(hào)。

2.3　羅氏沼蝦低溫?；钸^(guò)程中水質(zhì)指標(biāo)和蝦體指標(biāo)的變化

2.3.1水質(zhì)指標(biāo)的變化

由表2可知，在羅氏沼蝦低溫保活過(guò)程中，除?；顣r(shí)間36、48 h的水樣中溶解氧質(zhì)量濃度外，水樣中溶解氧質(zhì)量濃度、氨氮質(zhì)量濃度、pH及菌落總數(shù)均具有顯著性變化(＜0.05)。隨著保活時(shí)間的延長(zhǎng)，氨氮質(zhì)量濃度和菌落總數(shù)快速上升，引起水質(zhì)pH的升高和溶解氧被大量消耗，因保活期間持續(xù)向?；钕渲谐溲跫皩?duì)?；顪囟鹊目刂疲芙庋踬|(zhì)量濃度和pH均在羅氏沼蝦適宜生存的水體參數(shù)范圍(溶解氧質(zhì)量濃度≥4.0 mg/L，pH值7.0～8.5[6])內(nèi)。

表2　羅氏沼蝦低溫?；钸^(guò)程中水體的溶解氧和氨氮質(zhì)量濃度與pH及菌落總數(shù)

同列不同字母示不同?；顣r(shí)間處理間差異顯著(<0.05)。

2.3.2蝦體肌肉和血液與肝臟指標(biāo)的變化

由表3可知，在低溫?；钸^(guò)程中，除0、12、24 h的ATP質(zhì)量分?jǐn)?shù)外，肌肉糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)、乳酸濃度、pH和ATP質(zhì)量分?jǐn)?shù)均呈顯著性變化(＜0.05)。在?；畛跗冢_氏沼蝦為抵御低溫環(huán)境而大量消耗肌肉糖原，導(dǎo)致肌肉糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)劇烈下降；在?；钇陂g無(wú)能量補(bǔ)充，加之羅氏沼蝦對(duì)水溫環(huán)境的逐漸適應(yīng)，使得ATP質(zhì)量分?jǐn)?shù)先保持平衡，后隨著?；顣r(shí)間延長(zhǎng)而快速下降；而蝦體肌肉乳酸濃度不斷累積，導(dǎo)致肌肉pH的持續(xù)下降。

表3　羅氏沼蝦低溫?；钸^(guò)程中的肌肉和血液及肝臟指標(biāo)

同列不同字母示不同?；顣r(shí)間處理間差異顯著(<0.05)。

羅氏沼蝦低溫保活過(guò)程中，蝦體ALT和AST活性呈顯著上升(＜0.05)趨勢(shì)，說(shuō)明在低溫環(huán)境中蝦體肝臟受到一定程度的損傷。隨?；顣r(shí)間的延長(zhǎng)，羅氏沼蝦肝臟糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈顯著下降(＜0.05)趨勢(shì)，T-SOD活性呈先降后升趨勢(shì)，而MDA含量呈先上升后下降趨勢(shì)。

3　結(jié)論與討論

本研究中，通過(guò)對(duì)保活溫度、蝦水比和暫養(yǎng)時(shí)間這3個(gè)因素進(jìn)行羅氏沼蝦低溫保活工藝優(yōu)化，得到最優(yōu)工藝條件為保活溫度20 ℃、蝦水比1∶12、暫養(yǎng)時(shí)間24 h。對(duì)于屬熱帶蝦類(lèi)的羅氏沼蝦而言，20 ℃是其正常生存的較低溫度，適當(dāng)?shù)牡蜏丨h(huán)境可減少蝦體的耗氧量，降低其新陳代謝，減輕水質(zhì)惡化，提高存活率并延長(zhǎng)存活時(shí)間。據(jù)此，設(shè)置?；顪囟葹?7～23 ℃的優(yōu)化試驗(yàn)。這個(gè)溫度與COYLE等[4]對(duì)羅氏沼蝦適宜溫度的研究結(jié)果相似。蝦水比對(duì)于有水保活而言是關(guān)鍵因素之一，水量較多，在一定程度上降低水中氨氮質(zhì)量濃度，減緩蝦體應(yīng)激反應(yīng)，防止蝦體因代謝紊亂而死亡，從而得到較好的?；钚Ч１狙芯客ㄟ^(guò)單因素試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蝦水比不大于1∶10時(shí)可明顯提高羅氏沼蝦的存活率和?；顣r(shí)間，通過(guò)正交優(yōu)化后確定蝦水比為1∶12。暫養(yǎng)是?；钋暗谋匾h(huán)節(jié)，適當(dāng)?shù)臅吼B(yǎng)可使蝦體充分排泄，起到平衡蝦體生理狀態(tài)的關(guān)鍵作用。本研究中，確定暫養(yǎng)時(shí)間為24 h，若延長(zhǎng)暫養(yǎng)時(shí)間，則會(huì)導(dǎo)致蝦體活力下降，健康受損，對(duì)后續(xù)保活具有較大影響。

在低溫?；钸^(guò)程中，水體中的菌落總數(shù)和氨氮質(zhì)量濃度是影響蝦體存活率的重要因素。水中氨氮急劇積累，細(xì)菌滋生，水中氧分壓降低等因素會(huì)導(dǎo)致存活率下降[7]。本研究采用正交優(yōu)化后的最佳工藝進(jìn)行?；钤囼?yàn)，其間水體菌落總數(shù)與氨氮質(zhì)量濃度顯著上升，這與丁亞濤等[8]對(duì)鳊魚(yú)麻醉?；钛芯康慕Y(jié)果相同。這可能是由于來(lái)自蝦體本身排泄物的積累和部分蝦體的死亡[9]導(dǎo)致微生物的生長(zhǎng)繁殖。低溫可防止嗜溫、嗜熱微生物滋生并抑制細(xì)菌的增長(zhǎng)速率，降低蝦體新陳代謝過(guò)程中氨氮的形成，有效延遲其毒性反應(yīng)的發(fā)生。

本研究中，蝦體肌肉pH和糖原、ATP質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降，乳酸濃度顯著上升(＜0.05)。在低溫?；钸^(guò)程中，蝦體肌肉中的糖原酵解生成乳酸[10-12]，乳酸的持續(xù)積累導(dǎo)致pH下降。ATP含量在?；?4 h內(nèi)的變化不明顯，推測(cè)可能一方面在?；畛跗冢|(zhì)環(huán)境好，尤其是溶解氧充足，為維持機(jī)體的穩(wěn)態(tài)平衡，蝦體能量主要由蝦體內(nèi)糖原的有氧氧化所供給；另一方面此時(shí)的ATP消耗速率不大于糖酵解重新合成ATP的速率[13]。而肌肉糖原的持續(xù)下降，主要是低溫下蝦體依靠持續(xù)消耗糖原來(lái)提供熱量，抵御環(huán)境脅迫。

本低溫保活試驗(yàn)中，蝦體血液ALT和AST活力顯著上升(＜0.05)，肝臟糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著下降(＜0.05)，T-SOD活力先降后升，而MDA含量則先升后降。長(zhǎng)時(shí)間的低溫?；顣?huì)在一定程度上損傷蝦體肝臟細(xì)胞，但蝦體自身的抗氧化防御系統(tǒng)可大量清除?；钸^(guò)程中所產(chǎn)生的自由基，對(duì)蝦體的存活起重要作用。隨著保活時(shí)間的延長(zhǎng)，水質(zhì)的逐漸惡化，導(dǎo)致蝦體有氧代謝強(qiáng)度降低，進(jìn)而促使蝦體內(nèi)某些纖維蛋白發(fā)生變性，最終導(dǎo)致肝臟細(xì)胞受損[14]。ALT和AST是肝臟中重要的轉(zhuǎn)氨酶，肝臟若受損，細(xì)胞膜通透性會(huì)增加[15]，使得原本存在肝臟細(xì)胞中的ALT、AST被釋放到蝦體血液中，從而導(dǎo)致血液中ALT和AST活性上升[16-17]。這可能也與皮質(zhì)醇激素參與肝臟代謝的調(diào)節(jié)有關(guān)。此結(jié)果與周萌等[18]對(duì)南美白對(duì)蝦急性降溫研究的結(jié)果相同。T-SOD和MDA主要反映肝臟氧化應(yīng)激水平，在低溫?；钸^(guò)程呈負(fù)相關(guān)變化，說(shuō)明在?；钋捌?，蝦體受到環(huán)境脅迫后產(chǎn)生大量自由基，此時(shí)活性氧產(chǎn)生的速率超過(guò)抗氧化防御系統(tǒng)的清除能力，蝦體氧化應(yīng)激反應(yīng)升高，導(dǎo)致蝦體組織生物細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，生成脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟組織受損；而后蝦體T-SOD活性逐漸上升，抗氧化能力恢復(fù)，蝦體產(chǎn)生的自由基被清除，MDA含量下降，從而導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量下降[19]。董學(xué)興等[20]通過(guò)對(duì)SOD和MDA的研究表明，氨氮脅迫是造成羅氏沼蝦肌肉氧化損傷的主要因素，本研究的結(jié)論與其相似。T-SOD活性的上升對(duì)羅氏沼蝦在低溫條件下的存活起到重要作用。朱孟凱等[13]研究溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝臟SOD活力的影響，其結(jié)果也證實(shí)了這一觀點(diǎn)。

總的來(lái)說(shuō)，低溫有水?；罘茉谝欢ǔ潭壬嫌行Э刂扑|(zhì)惡化，降低羅氏沼蝦在?；钸^(guò)程中的生理代謝，從而提高羅氏沼蝦的存活率和存活時(shí)間。

[1] 張成．中國(guó)水產(chǎn)品供需問(wèn)題研究[D]．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2015． ZHANG C．Study on supply and demand of aquatic product in China[D]．Beijing：Chinese Academy of Agricultural Sciences，2015．

[2] 儲(chǔ)張杰．水生動(dòng)物珍品暫養(yǎng)及?；钸\(yùn)輸技術(shù)[M]．北京：海洋出版社，2011． CHU Z J．Temporary Breeding and Alive Transportation Technology of Aquatic Animal Treasures[M]．Beijing：Ocean Press，2011．

[3] SALIN K R．Live transportation of(De Man) in chilled sawdust[J]．Aquaculture Research，2005，36(3)：300-310．

[4] COYLE S D，TIDWELL J H，YASHARIAN D K，et al. The effect of biomass density，temperature，and substrate on transport survival of market-size freshwater prawn，[J]．Journal of Applied Aquaculture，2005，17(4)：61-71．

[5] 郭豐紅．鱖魚(yú)?；钸\(yùn)輸?shù)难芯縖D]．上海：上海海洋大學(xué)，2010． GUO F H．Research on the keep-alive transportation of[D]．Shanghai：Shanghai Ocean University，2010．

[6] 葉金明，張朝暉．羅氏沼蝦高效生態(tài)養(yǎng)殖新技術(shù)[M]．北京：海洋出版社，2017． YE J M，ZHANG C H．New Technology of Efficient Ecological Farming of[M]. Beijing：Ocean Press，2017．

[7] 汪之和，張飲江，李勇軍．水產(chǎn)品?；钸\(yùn)輸技術(shù)[J]．漁業(yè)現(xiàn)代化，2001，28(2)：31-34． WANG Z H，ZHANG Y J，LI Y J．Aquatic products keeping alive transportation technology[J]．Fishery Modernization，2001，28(2)：31-34．

[8] 丁亞濤，汪之和，王林林，等．MS-222對(duì)鳊魚(yú)麻醉?；钸\(yùn)輸效果的研究[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2019，38(3)：296-304． DING Y T，WANG Z H，WANG L L，et al．Effect of MS-222 on survival of bream fish during anaesthesia transportation[J]．Fisheries Science，2019，38(3)：296-304．

[9] 潘瀾瀾，林成新，張國(guó)琛，等．凈化暫養(yǎng)及低溫離水?；钸\(yùn)輸對(duì)蝦夷扇貝品質(zhì)的影響[J]．農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2017，33(19)：301-307． PAN L L，LIN C X，ZHANG G C，et al．Effects of purification, temporary rearing and low temperature waterless-keeping alive-transportation on quality characteristics of live[J]. Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering，2017，33(19)：301-307．

[10] 張麗．大黃魚(yú)?；钸\(yùn)輸及冰溫保鮮的研究[D]．上海：上海海洋大學(xué)，2011．ZHANG L．Study on technology of keeping alive and super- chilling preservation of[D]. Shanghai：Shanghai Ocean University，2011．

[11] 金一春，胡萍華，曲學(xué)偉，等．二氧化碳麻醉對(duì)白斑狗魚(yú)的影響[J]．湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009(12)：138-140． JIN Y C，HU P H，QU X W，et al．Anesthetic effect of carbon dioxide on[J]．Hunan Agricultural Sciences，2009(12)：138-140．

[12] 李黎，曹振東，付世建．力竭性運(yùn)動(dòng)后鲇魚(yú)幼魚(yú)乳酸、糖原和葡萄糖水平的變動(dòng)[J]．水生生物學(xué)報(bào)，2007(6)：880-885． LI L，CAO Z D，F(xiàn)U S J．Lactate, glycogen and glucose levels of juvenile catfish(Linnaeus) in response to exhaustive exercise[J]．Acta Hydrobiologica Sinica，2007，31(6)：880-885．

[13] 朱孟凱，姚翠鸞．溫度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺氧代謝及能量代謝的影響[J]．水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2015，39(5)：669-678． ZHU M K，YAO C L．The impact of temperature stress on the oxygen metabolism and energy metabolism in the hepatopancreas of shrimp[J]. Journal of Fisheries of China，2015，39(5)：669-678．

[14] 趙艷麗，楊先樂(lè)，黃艷平，等．丁香酚對(duì)大黃魚(yú)麻醉效果的研究[J]．水產(chǎn)科技情報(bào)，2002(4)：163-165． ZHAO Y L，YANG X L，HUANG Y P，et al．Study on the effect of eugenol on anaesthesia in[J]．Fisheries Science & Technology Information，2002(4)：163-165．

[15] 陳濤，沈藝敏，李仁煥．飼料脂肪水平對(duì)紅羅非魚(yú)稚魚(yú)生長(zhǎng)性能及血液生化指標(biāo)的影響[J]．飼料研究，2019，42(5)：20-23． CHEN T，SHEN Y M，LI R H．Effect of different fat levels on the growth and blood biochemical indices of juvenile red tilapia[J]．Feed Research，2019，42(5)：20-23．

[16] 馮廣朋，莊平，章龍珍，等．溫度對(duì)中華鱘幼魚(yú)代謝酶和抗氧化酶活性的影響[J]．水生生物學(xué)報(bào)，2012，36(1)：137-142． FENG G P，ZHUANG P，ZHANG L Z，et al．Effects of water temperature on metabolic enzyme and antioxidase activities in juvenile Chinese sturgeon() [J]．Acta Hydrobiologica Sinica，2012，36(1)：137-142．

[17] 何玲，王佩，羅來(lái)婷，等．螺旋藻對(duì)中華鱉生長(zhǎng)和體組成及血清生化指標(biāo)的影響[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2019，45(5)：536-540． HE L，WANG P，LUO L T，et al．Effects of feeding Spirulina on growth performance，body composition and serum biochemical indexes of[J]. Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)，2019，45(5)：536-540．

[18] 周萌，吳灶和，梁日深，等．急性降溫對(duì)凡納濱對(duì)蝦血液生化指標(biāo)及細(xì)胞免疫指標(biāo)的影響[J]．廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，42(24)：134-139． ZHOU M，WU Z H，LIANG R S，et al．Biochemical and cellular immunological responses of Pacific white shrimp,to cold shock[J]．Guangdong Agricultural Sciences，2015，42(24)：134-139．

[19] 黎一鳴，徐心，吉鴻，等．肝動(dòng)脈缺血對(duì)肝細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制初探[J]．西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2002(4)：393-394． LI Y M，XU X，JI H，et al．Effects of hepatic artery ischemia on hepatocytic apoptosis and its mechanism[J]. Journal of Xi'an Jiaotong University(Medical Sciences)，2002(4)：393-394．

[20] 董學(xué)興，呂林蘭，趙衛(wèi)紅，等．氨氮脅迫與恢復(fù)對(duì)羅氏沼蝦幼蝦非特異性免疫的影響[J]．海洋漁業(yè)，2018，40(6)：713-719． DONG X X，LV L L，ZHAO W H，et al．Effects of ammonia-N stress and post-exposure recovery on nonspecific immunity ofjuveniles[J]. Marine Fisheries，2018，40(6)：713-719．

Test on keepingalive under water at low temperature

YANG Feng1, WU Han1, WANG Yixin1, LI Nian1, SHI Wenzheng1,2, WANG Zhihe1,2,3*

(1.Food College, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; 2.National Research and Development Center for Processing Technology of Freshwater Aquatic Products(Shanghai), Shanghai 201306, China; 3.Shanghai Aquatic Product Processing and Storage Engineering Technology Research Center, Shanghai 201306, China)

Through the single factor test and orthogonal test on the three factors of keeping alive temperature(12, 15, 17, 20, 23, 25 ℃), shrimp to water mass ratio(1∶6, 1∶8, 1∶10, 1∶12, 1∶15) and holding time(0, 12, 24, 36, 48 h), find the optimal conditions for the low temperature keeping alive of, and detect changes in the water quality indicators and shrimp tissue indicators including muscle, blood, liver, etc, to explore the mechanism of affecting the survival of. The results showed that the critical temperature ofwas 9 ℃; in the single factor experiment, the best keeping alive temperature was 20 ℃, the best shrimp to water mass ratio was 1∶10, and the best holding time was 24 h; in the orthogonal test, the optimal process was keeping alive temperature of 20 ℃, shrimp to water mass ratio 1∶12, holding time 24 h, and the survival rate within 24 h of keeping alive could reach 100%. The optimal process conditions after orthogonal optimization were used for keeping alive test in the low-temperature of, the concentration of ammonia nitrogen and the total number of colonies in the water samples increased significantly(＜0.05), but the dissolved oxygen mass concentration and pH were still changing within the suitable range. The mass fraction of muscle glycogen, pH and ATP mass fraction decreased, lactic acid concentration increased significantly(＜0.05), blood ALT and AST activities increased significantly(＜0.05), liver glycogen mass fraction decreased significantly(＜0.05), T-SOD activity first decreased and then increased, while the content of MDA first increased and then decreased. It shows that changes in water quality indicators would affect the normal physiological metabolism of shrimp muscles, blood and liver tissues, thereby affecting their survival time and survival rate.

; keep alive with water; keep alive at low temperature; keep alive temperature; holding time; keep alive time; survival rate

S983.210.9

A

1007-1032(2020)05-0601-07

楊豐，吳涵，王逸鑫，李念，施文正，汪之和．羅氏沼蝦低溫有水保活試驗(yàn)[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2020，46(5)：601-607．

YANG F, WU H, WANG Y X, LI N, SHI W Z, WANG Z H. Test on keepingalive under water at low temperature[J]. Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences), 2020, 46(5): 601-607.

http://xb.hunau.edu.cn

2019-10-18

2019-12-03

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2018YFD0901006)

楊豐(1994—)，男，江蘇揚(yáng)州人，碩士研究生，主要從事水產(chǎn)品加工與貯藏研究，F(xiàn)rankyyang01@126.com；*通信作者，汪之和，教授，主要從事水產(chǎn)品加工與綜合利用研究，zhwang@shou.edu.cn

責(zé)任編輯：鄒慧玲

英文編輯：柳正