唐長青

（湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 衡陽 421000）

靈芝（Ganoderma lucidum Karst）是我國的一種傳統(tǒng)藥材，其活性成分以多糖類、三萜類、生物堿、多肽核苷類、無機(jī)微量元素等為主[1]。已有多項(xiàng)研究顯示，靈芝有提升免疫能力、調(diào)節(jié)機(jī)體物質(zhì)代謝、改善疲勞等作用[1-2]。靈芝三萜（Ganoderma lucidum triterpenoids，GLTs） 是靈芝體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物，是靈芝的重要成分之一，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抑菌、護(hù)肝清肺等多種作用，優(yōu)異的藥用潛力巨大[3]。而靈芝三萜的抗疲勞作用，目前尚缺少相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。研究的目的是探討服用含有靈芝三萜的膠囊對(duì)運(yùn)動(dòng)員大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后體能恢復(fù)的作用，為運(yùn)動(dòng)員科學(xué)有效的膳食營養(yǎng)攝入提供理論參考。

1 試驗(yàn)對(duì)象與試驗(yàn)方法

1.1 靈芝三萜的提取與膠囊的制備

參照華正根等[4]的方法，以1.5 kg靈芝孢子粉（北京萬世堂中醫(yī)科學(xué)研究院，批準(zhǔn)文號(hào)：國食健字G20110430，衛(wèi)生許可證號(hào)：魯衛(wèi)食證字（2007） 第370000-000350號(hào)）為原料，采用常溫高壓超臨界CO2提取法提取靈芝三萜。在50℃下，采用50 MPa壓力提取4 h，獲得靈芝三萜粗提取物，待放冷干燥后，于20℃下以4 000 r·min-1離心10 min后獲得上清液。此后對(duì)上清液進(jìn)行硅膠柱層析分離純化，先后用配比分別為90∶10和20∶1的CHCl3/CH3OH進(jìn)行洗脫，獲得提純后的靈芝三萜。與湖南華聯(lián)康生物科技有限公司實(shí)驗(yàn)室合作，完成靈芝三萜膠囊的制作，規(guī)格為每粒膠囊含靈芝三萜75 mg。同時(shí)完成了安慰劑膠囊（成分為淀粉）的制作，其外形與靈芝三萜膠囊相同。

1.2 試驗(yàn)對(duì)象分組

所有研究對(duì)象均為湖南省大學(xué)生體育運(yùn)動(dòng)隊(duì)的運(yùn)動(dòng)員，共選取48人，訓(xùn)練年限3年～4年，均自愿參與試驗(yàn)，試驗(yàn)前進(jìn)行體格檢查、十二導(dǎo)聯(lián)心電圖等排除基礎(chǔ)器質(zhì)性病變。以上人員隨機(jī)分為2組，其中對(duì)照組（CK） 24人（男性15人，女性9人），平均年齡 （22.36±1.27） 歲；平均體重 （61.96±2.31）kg；試驗(yàn)組共24人（男性17人，女性7人），平均年齡 （22.89±1.56） 歲，平均體重 （62.25±2.41）kg。2組對(duì)象在性別、平均年齡、平均體重、訓(xùn)練內(nèi)容、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、日常作息時(shí)間等方面均無顯著性差異（P＞0.05），具有良好的可對(duì)比性。

1.3 試驗(yàn)方案

2組運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行為期30 d的日常訓(xùn)練，在訓(xùn)練期間，每日清晨試驗(yàn)組服用靈芝三萜膠囊1粒，對(duì)照組則服用相同劑量的安慰劑。30 d后，在當(dāng)天訓(xùn)練前30 min測定心率、抽取肘靜脈血，當(dāng)天訓(xùn)練結(jié)束后30 min再測定心率、抽取肘靜脈血，分別測量2組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前后反映身體機(jī)能的相關(guān)指標(biāo)。

血細(xì)胞、血清乳酸、尿素氮、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）水平檢測，測定以上指標(biāo)的試劑盒均購自深圳子科生物科技有限公司，按照說明書嚴(yán)格操作，ELISA法測定。

心率水平測定：采用9026-ZK10型惠普監(jiān)護(hù)儀，美國惠普公司。運(yùn)動(dòng)前后分別測量3次，取平均值作為測量結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有資料用樣本均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s） 表示，計(jì)量資料如符合正態(tài)分布，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較，檢驗(yàn)水平α為0.05。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 2組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后紅系細(xì)胞水平檢測結(jié)果

不同組別運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后紅細(xì)胞（RBC）、網(wǎng)織紅細(xì)胞（RC）、血紅蛋白（Hb） 水平比較結(jié)構(gòu)見表1。

表1 不同組別運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后紅系細(xì)胞水平比較（±s）Tab.1 Comparison of erythroid cells levels between athletes of different groups before and after exercise（±s）

表1 不同組別運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后紅系細(xì)胞水平比較（±s）Tab.1 Comparison of erythroid cells levels between athletes of different groups before and after exercise（±s）

注：*表示與對(duì)照組相比差異顯著，P＜0.05；#表示與對(duì)照組相比差異極顯著，P＜0.01。Note:*The difference was significant compared with the control group,P＜0.05,#the difference was extremely significant compared with the control group,P＜0.01.

血紅蛋白/(g·L-1)組別 紅細(xì)胞/(×1012L-1) 網(wǎng)織紅細(xì)胞/%運(yùn)動(dòng)前 運(yùn)動(dòng)后 運(yùn)動(dòng)前試驗(yàn)組 4.63±0.20 4.61±0.21# 1.04±0.23* 1.04±0.22# 162.31±10.03 157.53±8.66*運(yùn)動(dòng)后 運(yùn)動(dòng)前 運(yùn)動(dòng)后對(duì)照組 （CK） 4.55±0.23 4.31±0.19 0.87±0.270.84±0.24 160.47±8.79 150.68±9.58

由表1可知，在運(yùn)動(dòng)后，各組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞比例、血紅蛋白含量等指標(biāo)的絕對(duì)值均較運(yùn)動(dòng)前有所下降。試驗(yàn)組在運(yùn)動(dòng)前的網(wǎng)織紅細(xì)胞比例（1.04±0.23）%顯著高于對(duì)照組，而紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量等指標(biāo)未見明顯差異。在運(yùn)動(dòng)后，試驗(yàn)組的血紅蛋白含量（157.53±8.66） g·L-1顯著高于對(duì)照組，而試驗(yàn)組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（4.61±0.21）×1012L-1、網(wǎng)織紅細(xì)胞比例（1.04±0.22）%均更顯著高于對(duì)照組。

2.2 2組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后心率、血清乳酸、尿素氮水平檢測結(jié)果

不同組別運(yùn)動(dòng)員心率、血清乳酸、尿素氮水平比較情況見表2。

表2 不同組別運(yùn)動(dòng)員心率、血清乳酸、尿素氮水平比較（±s）Tab.2 Comparison of heart rate,serum lactic acid and urea nitrogen cells levels between athletes of different groups before and after exercise（±s）

表2 不同組別運(yùn)動(dòng)員心率、血清乳酸、尿素氮水平比較（±s）Tab.2 Comparison of heart rate,serum lactic acid and urea nitrogen cells levels between athletes of different groups before and after exercise（±s）

注：*表示與對(duì)照組相比差異顯著，P＜0.05；#表示與對(duì)照組相比差異極顯著，P＜0.01。Note:*The difference was significant compared with the control group,P＜0.05,#the difference was extremely significant compared with the control group,P＜0.01.

尿素氮/（mmol·L-1）組別心率/（次/分）血清乳酸/（mmol·L-1）運(yùn)動(dòng)后 運(yùn)動(dòng)前 運(yùn)動(dòng)后運(yùn)動(dòng)前 運(yùn)動(dòng)后 運(yùn)動(dòng)前試驗(yàn)組 61.8±2.21 115.4±3.45# 1.06±0.19 13.68±1.76# 3.77±0.69 9.83±1.95*對(duì)照組 （CK） 63.2±1.65 131.5±3.21 1.13±0.2716.43±1.98 4.13±0.88 11.07±1.73

由表2可知，在運(yùn)動(dòng)后，各組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后的心率次數(shù)、血清乳酸、尿素氮水平均較靜息狀態(tài)下正常值顯著升高。試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)后的平均心率（115.4±3.45）次/分和乳酸水平 （13.68±1.76） mmol·L-1均顯著低于對(duì)照組，運(yùn)動(dòng)前兩組心率水平無顯著性差異。試驗(yàn)組的運(yùn)動(dòng)后的尿素氮水平 （9.83±1.95） mmol·L-1顯著低于對(duì)照組，兩組運(yùn)動(dòng)前尿素氮水平無顯著性差異。

2.3 2組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、后血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶水平檢測結(jié)果

不同組別運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD） 水平比較結(jié)果見表3。

表3 不同組別運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶水平比較（±s）Tab.3 Comparison of AST、LDH、SOD levels between athletes of different groups before and after exercise（±s）

表3 不同組別運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶水平比較（±s）Tab.3 Comparison of AST、LDH、SOD levels between athletes of different groups before and after exercise（±s）

注：*表示與對(duì)照組相比差異顯著，P＜0.05；#表示與對(duì)照組相比差異極顯著，P＜0.01。Note:*The difference was significant compared with the control group,P＜0.05,#the difference was extremely significant compared with the control group,P＜0.01.

超氧化物歧化酶/（U·L-1）組別谷草轉(zhuǎn)氨酶/（U·L-1）乳酸脫氫酶/（U·L-1）運(yùn)動(dòng)后 運(yùn)動(dòng)前 運(yùn)動(dòng)后運(yùn)動(dòng)前 運(yùn)動(dòng)后 運(yùn)動(dòng)前試驗(yàn)組 29.0±2.51 59.7±7.82* 128.45±15.53* 149.36±15.69* 266.1±15.93# 332.3±16.58#對(duì)照組 （CK） 28.3±2.89 65.3±9.67 137.28±14.67161.13±17.34 253.7±15.44 281.5±17.23

由表3可知，2組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后的AST、LDH、SOD水平較運(yùn)動(dòng)前均明顯升高。試驗(yàn)組在運(yùn)動(dòng)后的AST水平為 （29.0±2.51） U·L-1，LDH 水平運(yùn)動(dòng)后為（149.36±15.69） U·L-1的均顯著低于對(duì)照組；而試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)前 （266.1±15.93） U·L-1、后 （332.3±16.58） U·L-1的SOD水平均顯著高于對(duì)照組，試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)前的AST水平較對(duì)照組無顯著性差異。

3 討論

在體育訓(xùn)練期間，運(yùn)動(dòng)員常處于高強(qiáng)度、高體能消耗的狀態(tài)下，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)各項(xiàng)機(jī)能下降。其產(chǎn)生受到多種機(jī)制調(diào)節(jié)，目前認(rèn)為主要是ATP和磷酸肌酸等能源物質(zhì)的消耗、血清乳酸、尿素氮等中間代謝產(chǎn)物的堆積、自由基水平過高、氧化應(yīng)激加劇等影響因素對(duì)肌肉、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生消極作用，從而導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能下降，甚至導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生[5]。在大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后迅速恢復(fù)體能是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)話題。

在機(jī)體內(nèi)，紅細(xì)胞承載向組織細(xì)胞運(yùn)輸氧氣、進(jìn)行氣體交換和物質(zhì)代謝的功能[6]，體育運(yùn)動(dòng)中，紅細(xì)胞活性對(duì)運(yùn)動(dòng)員的水平發(fā)揮有著關(guān)鍵作用。紅細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)不僅可以改善最大耗氧量等反映運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的指標(biāo)，對(duì)心血管系統(tǒng)也有一定作用，可以調(diào)節(jié)靜息心率，保護(hù)心肌與血管壁。在長期運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練中，人體中的各種維生素和微量元素等容易出現(xiàn)缺乏，導(dǎo)致血紅蛋白合成減少，進(jìn)而造成“運(yùn)動(dòng)性貧血”的發(fā)生[7]。試驗(yàn)中，2組運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、織紅細(xì)胞比例、血紅蛋白含量等指標(biāo)的絕對(duì)值均較運(yùn)動(dòng)前有所下降，而試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)后的上述指標(biāo)低于對(duì)照組，差異具有顯著性。提示靈芝三萜對(duì)機(jī)體紅細(xì)胞水平及活性有一定的促進(jìn)作用，其作用機(jī)制可能與靈芝三萜促進(jìn)網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟和內(nèi)源性紅細(xì)胞生成素（EPO） 的生成作用有關(guān)[8]。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)大量的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后，運(yùn)動(dòng)員的心率較靜息狀態(tài)下明顯升高[9]。當(dāng)心率過快時(shí)，心臟的收縮和舒張周期均明顯縮短，導(dǎo)致射血分?jǐn)?shù)下降，心臟泵血減少；影響血液流動(dòng)和組織物質(zhì)代謝交換，導(dǎo)致組織缺氧，機(jī)體代謝產(chǎn)物堆積[10]。試驗(yàn)中，試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)后的平均心率、代謝產(chǎn)物水平顯著低于對(duì)照組，說明靈芝三萜可以有效降低心率、減少機(jī)體代謝產(chǎn)物。已文獻(xiàn)報(bào)道，靈芝三萜可以調(diào)控游離脂肪酸進(jìn)入線粒體的數(shù)量，促進(jìn)脂肪酸的氧化代謝，保證氧化功能，促進(jìn)合成糖原，減少中間代謝產(chǎn)物的生成[11]。

肝臟是人體內(nèi)的重要臟器，是體內(nèi)物質(zhì)代謝的主要場所之一；肝臟還原性谷胱甘肽對(duì)抗氧化應(yīng)激、減少體內(nèi)氧自由基和抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有重要的意義；肝糖原反映體內(nèi)能量儲(chǔ)備水平，直接影響機(jī)體的持續(xù)運(yùn)動(dòng)能力[12]。在大量運(yùn)動(dòng)后，體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除失衡，會(huì)加速肝細(xì)胞凋亡和壞死。同時(shí)，運(yùn)動(dòng)性疲勞會(huì)導(dǎo)致肝臟中脂肪和氨基酸代謝加快，導(dǎo)致肝臟受損[13]。大量研究表明，靈芝三萜可以有效清除自由基，是良好的抗氧化劑[14]。谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶等是反映肝臟功能和抗氧化能力的重要指標(biāo)，在試驗(yàn)中，運(yùn)動(dòng)員運(yùn)動(dòng)后的谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶水平較運(yùn)動(dòng)前明顯升高，提示肝臟功能存在一定損傷，超氧化物歧化酶水平升高，可能是機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)的應(yīng)激反應(yīng)。試驗(yàn)組運(yùn)動(dòng)后的谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶水平顯著低于對(duì)照組，而超氧化物歧化酶活性在運(yùn)動(dòng)前、運(yùn)動(dòng)后都更顯著地高于對(duì)照組。提示靈芝三萜對(duì)肝臟具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力，提升超氧化物歧化酶活性，從而減輕了肝臟損傷，增強(qiáng)機(jī)體運(yùn)動(dòng)后的恢復(fù)能力。

4 結(jié)論

系統(tǒng)測定反映運(yùn)動(dòng)員身體機(jī)能的相關(guān)生理指標(biāo)。在試驗(yàn)中，2組運(yùn)動(dòng)員在運(yùn)動(dòng)后的紅系細(xì)胞較運(yùn)動(dòng)前均明顯下降，而其余指標(biāo)則明顯升高。運(yùn)動(dòng)后試驗(yàn)組的紅系細(xì)胞水平、血清超氧化物歧化酶水平顯著高于對(duì)照組；試驗(yàn)組的平均心率、血清乳酸、尿素氮等代謝產(chǎn)物水平、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶水平均顯著低于對(duì)照組。而試驗(yàn)組的網(wǎng)織紅細(xì)胞、超氧化物歧化酶水平在運(yùn)動(dòng)前也顯著高于對(duì)照組。綜合上述分析，靈芝三萜可以有效減輕氧化應(yīng)激、清除代謝產(chǎn)物、保護(hù)臟器功能，對(duì)大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后的體能恢復(fù)具有明確的促進(jìn)作用，可為體育運(yùn)動(dòng)員膳食營養(yǎng)的搭配和相關(guān)保健食品的研究提供新的思路。