潘 虹，顧愛國，孫長恩

（國家農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，南京 210007）

丙硫菌唑是拜耳公司研發(fā)的新型廣譜三唑硫酮類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑[1]。咪鮮胺為咪唑類廣譜殺菌劑，通過抑制甾醇的生物合成發(fā)揮作用[2]。丙硫菌唑·咪鮮胺懸乳劑作為一種新型廣譜復(fù)配殺菌劑，對大田作物、水果、蔬菜的多種病蟲害兼具治療、鏟除作用，尤其對小麥赤霉病的防治效果顯著、持效期長，對小麥安全，應(yīng)用前景廣闊[3-4]。目前，關(guān)于丙硫菌唑、咪鮮胺單劑以及其他復(fù)配制劑的檢測方法均有報道[5-7]，但有關(guān)丙硫菌唑·咪鮮胺復(fù)配制劑的高效液相色譜分析方法未見報道。本文建立的HPLC方法，以甲醇＋0.2%磷酸水溶液為流動相，采用Agilent Eclipse XDB-C18柱和可變波長紫外檢測器，對有效成分丙硫菌唑和咪鮮胺同時分離、定量。該方法可供檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)分析室人員監(jiān)督和把控丙硫菌唑·咪鮮胺復(fù)配制劑質(zhì)量時作參考。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Thermo高效液相色譜儀U3000，可變波長紫外檢測器，色譜工作站；甲醇（色譜純）；Millipore超純水制備系統(tǒng)；丙硫菌唑（98.5%）對照物和咪鮮胺（99.0%）對照物，國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（沈陽）。42%丙硫菌唑·咪鮮胺懸乳劑，江西中迅農(nóng)化有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18不銹鋼柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測波長235 nm，流動相：甲醇＋0.2%磷酸水溶液（體積比76︰24）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積5 μL；柱溫30℃。保留時間：丙硫菌唑約為6.1 min，咪鮮胺約為4.3 min。液相色譜圖見圖1、圖2。

圖1 丙硫菌唑和咪鮮胺對照物液相色譜圖

圖2 42%丙硫菌唑·咪鮮胺懸乳劑被試物液相色譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 對照物溶液的配制

在100 mL容量瓶中，稱取0.03 g丙硫菌唑?qū)φ瘴锖?.06 g咪鮮胺對照物（均精確至0.000 2 g），加入甲醇溶解，超聲振蕩并稀釋，待溫度恢復(fù)至室溫后再定容，搖勻備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取0.21 g被試物（精確至0.000 2 g）于100 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，超聲振蕩并稀釋，待溫度恢復(fù)至室溫后再定容，搖勻后經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾備用。

1.3.3 測定

當(dāng)儀器基線穩(wěn)定后，在優(yōu)化的試驗條件下，使對照物溶液連續(xù)進(jìn)樣，直至相鄰兩針的峰面積響應(yīng)值相對變化小于1.5%，再按照對照物溶液、被試物溶液、被試物溶液、對照物溶液順序依次進(jìn)樣測定。1.3.4 計算

將試驗檢測的兩針被試物溶液及其前后兩針對照物溶液中的丙硫菌唑（咪鮮胺）峰面積分別進(jìn)行平均。被試物中丙硫菌唑（咪鮮胺）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)按式（1）進(jìn)行計算。

式中：A1為對照物溶液中丙硫菌唑（咪鮮胺）峰面積平均值，mAU·min；A2為被試物溶液中丙硫菌唑（咪鮮胺）峰面積平均值，mAU·min；m1為對照物溶液中丙硫菌唑（咪鮮胺）的質(zhì)量，g；m2為被試物的質(zhì)量，g；P為對照物中丙硫菌唑（咪鮮胺）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分離條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

試驗過程中，反復(fù)比對被試物丙硫菌唑和咪鮮胺與對照物在波長為190～400 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜曲線，同時考慮溶劑峰、雜質(zhì)峰干擾以及各組分的靈敏度、分離度和數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，最終確定最適檢測波長為235 nm。

2.1.2 色譜柱及流動相的選擇

為保證快速檢測有效成分丙硫菌唑和咪鮮胺且峰形良好，選擇150 mm×4.6 mm Agilent Eclipse XDB-C18不銹鋼柱和250 mm×4.6 mm Agilent ZORBAX XDB-C18柱分別進(jìn)行研究，采用不同比例的甲醇-水和乙腈-水作為流動相，均未得到良好的分離度。經(jīng)分析比較，發(fā)現(xiàn)在酸性條件下被測組分相對穩(wěn)定。添加不同濃度的冰乙酸和磷酸，最終選擇150 mm×4.6 mm Agilent Eclipse XDB-C18不銹鋼柱，并采用磷酸作為減尾劑，確定流動相為甲醇＋0.2%磷酸水溶液（體積比76︰24），流速為1.0mL/min。該測定保留時間適中，實現(xiàn)了丙硫菌唑和咪鮮胺的有效分離，且峰形良好。

2.2 線性相關(guān)性

配制不同質(zhì)量濃度的對照物溶液，在優(yōu)化的色譜分離條件下進(jìn)行測定。橫坐標(biāo)為丙硫菌唑（咪鮮胺）的質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)為其峰面積值。二者線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)分別為：y丙硫菌唑=0.047 4x＋0.486 3，r=0.999 9；y咪鮮胺=0.063 4x-0.781 7，r=0.999 7。丙硫菌唑和咪鮮胺定量線性關(guān)系在100～800 mg/L質(zhì)量濃度下良好，結(jié)果見圖3、圖4。

圖3 丙硫菌唑線性曲線

圖4 咪鮮胺線性曲線

2.3 方法的精密度

試驗采用3批次的被試物42%丙硫菌唑·咪鮮胺懸乳劑，連續(xù)重復(fù)測定5次，研究了定量分析方法的精密度，結(jié)果見表1。丙硫菌唑和咪鮮胺的變異系數(shù)分別為0.36%和0.25%，滿足被試物定量分析的要求。

2.4 方法的準(zhǔn)確度

試驗采用產(chǎn)品空白制劑中添加不同濃度丙硫菌唑和咪鮮胺對照物的方法，配制4份與被試物相近的模擬樣品，開展添加回收率試驗，研究方法的準(zhǔn)確度。試驗數(shù)據(jù)表明丙硫菌唑添加回收率為99.46%～100.17%，咪鮮胺添加回收率為99.21%～100.02%，兩者平均回收率分別為99.75%和99.58%（表2），準(zhǔn)確度較高，可以滿足定量分析要求。

表1 42%丙硫菌唑·咪鮮胺懸乳劑精密度測定結(jié)果

表2 42%丙硫菌唑·咪鮮胺懸乳劑回收率測定結(jié)果

3 結(jié) 論

綜上，本文建立的HPLC分析方法，保留時間合理，精密度與準(zhǔn)確度較高，可快速分離及測定丙硫菌唑·咪鮮胺制劑中兩種有效成分的含量，且線性相關(guān)性好，適用于檢驗檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)分析室對丙硫菌唑·咪鮮胺復(fù)配制劑質(zhì)量的監(jiān)督與把控。