朱俊平

摘要：將120羽1日齡楓葉鴨分成3組（Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組），Ⅰ組、Ⅱ組分別在日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L，Ⅲ組為對照組。結果顯示，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，胸腺指數(shù)分別提高13.89%（P<0.05）、10.19%（P<0.05），脾指數(shù)分別提高10.43%（P<0.05）、3.48%（P>0.05），法氏囊指數(shù)分別提高19.84%（P<0.05）、12.70%（P<0.05）;DVH中和抗體分別提高19.51%（P<0.05）、14.63%（P<0.05）;H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體分別提高23.90%（P<0.05）、16.98%（P<0.05），H5亞型禽流感Re-8血凝抑制抗體分別提高23.39%（P<0.05）、13.51%（P<0.05）。結果表明，雙黃連納米乳口服液能夠顯著提高楓葉鴨免疫功能。

關鍵詞：雙黃連;納米乳;楓葉鴨;免疫功能

中圖分類號： R285 ?文獻標志碼： A ?文章編號：1002-1302（2020）17-0183-03

雙黃連是由金銀花、黃芩、連翹三味藥物復方精提的中藥制劑，主要有清熱解毒、抗炎消腫、抑制病原和免疫調節(jié)等藥理作用[1]。雙黃連納米乳口服液是由運用納米技術制造的粒徑小于200 nm的藥物成分制成，具有藥物溶出率高、在消化道的吸收率高、生物利用度高等優(yōu)點[2]。本試驗研究了雙黃連納米乳口服液對楓葉鴨免疫器官指數(shù)及疫苗免疫效果的影響，為該產品的臨床應用特別是在鴨生產上的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 120羽1日齡楓葉鴨購自山東永惠楓葉種鴨有限公司;SPF雞胚購自山東斯帕法斯生物技術有限公司。

1.1.2 試驗藥品 疫苗雙黃連納米乳口服液由山東廣元藥業(yè)科技有限公司試產，含有黃芩苷 13.2 mg/mL、綠原酸1.2 mg/mL、連翹苷 0.6 mg/mL;鴨病毒性肝炎（DVH）活疫苗（A66株）由南京天邦生物科技有限公司生產;重組禽流感病毒H5亞型二價（Re-6株+Re-8株）滅活苗由肇慶大華農生物藥品有限公司生產。

1.1.3 診斷試劑 禽流感病毒H5亞型Re-6株和Re-8株血凝抑制抗原、陰性及陽性血清，由哈爾濱維科生物技術有限公司生產。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 將120羽1日齡楓葉鴨隨機分成3組，每組4個重復，每個重復10羽楓葉鴨。Ⅰ組、Ⅱ組為雙黃連納米乳口服液應用試驗組，Ⅲ組為空白對照組。2組楓葉鴨在相同條件下飼養(yǎng)。

1.2.2 給藥方案 Ⅰ組楓葉鴨的日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0 mL/L，Ⅱ組楓葉鴨的日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液0.5 mL/L，從5日齡開始連用7 d;Ⅲ組是空白對照組，楓葉鴨的日常飲水中不添加雙黃連納米乳口服液。

1.2.3 免疫方案 7日齡，根據(jù)疫苗說明書，Ⅰ組、Ⅱ組的楓葉鴨皮下注射鴨病毒性肝炎（DVH）活疫苗（A66株）0.5 mL/羽。

14日齡，根據(jù)疫苗說明書，Ⅰ組、Ⅱ組的楓葉鴨肌肉注射重組禽流感病毒H5亞型二價（Re-6株+Re-8株）滅活苗0.5 mL/羽。

1.2.4 檢查指標 （1）免疫器官指數(shù)。試驗鴨30日齡時，參照胡振華等的方法[3]進行屠宰，并采集胸腺、脾和法氏囊進行稱質量，計算免疫器官指數(shù)（胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和法氏囊指數(shù)）。（2）鴨病毒性肝炎活疫苗免疫效果。試驗鴨21日齡時，翅靜脈采血分離血清，參照徐新紅等的方法[4-5]，測定鴨病毒性肝炎（DVH）中和抗體。（3）重組禽流感病毒H5亞型二價（Re-6株+Re-8株）滅活疫苗免疫效果。試驗鴨28日齡時，翅靜脈采血分離血清，按照農業(yè)農村部《高致病性禽流感防治技術規(guī)范》的方法測定禽流感血凝抑制抗體。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

應用SPSS程序軟件統(tǒng)計分析3組數(shù)據(jù)的顯著性差異，結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 雙黃連納米乳口服液對楓葉鴨免疫器官指數(shù)的影響

從表1可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，胸腺指數(shù)分別提高13.89%（P<0.05）、10.19%（P<0.05），脾指數(shù)分別提高10.43%（P<0.05）、3.48%（P>0.05），法氏囊指數(shù)分別提高19.84%（P<0.05）、12.70%（P<0.05）;Ⅰ組和Ⅱ組相比，胸腺指數(shù)提高3.36%（P>0.05），脾指數(shù)提高6.72%（P>0.05），法氏囊指數(shù)提高6.38%（P>0.05）。結果表明，在楓葉鴨的日常飲水中加入1.0、0.5 mL/L 雙黃連納米乳口服液，都能顯著提高楓葉鴨的各免疫器官指數(shù);而在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L處理間各免疫器官指數(shù)差異不顯著。

2.2 雙黃連納米乳口服液對楓葉鴨DVH活疫苗免疫效果的影響

從表2可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，DVH中和抗體分別提高19.51%（P<0.05）、14.63%（P<0.05）;Ⅰ組、Ⅱ組相比，DVH中和抗體提高4.26%（P>0.05）。結果表明，在楓葉鴨的日常飲水中加入1.0、0.5 mL/L雙黃連納米乳口服液，都能顯著提高楓葉鴨DVH活疫苗免疫效果;而在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L 處理間免疫效果差異不顯著。

2.3 雙黃連納米乳口服液對楓葉鴨重組禽流感病毒H5亞型二價（Re-6株+Re-8株）滅活苗免疫效果的影響

從表3可以看出，Ⅰ組、Ⅱ組與Ⅲ組相比，H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體分別提高23.90%（P<0.05）、16.98%（P<0.05），H5亞型禽流感 Re-8血凝抑制抗體分別提高23.39%（P<0.05）、13.51%（P<0.05）;Ⅰ組和Ⅱ組相比，H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體提高5.91%（P>0.05），H5亞型禽流感Re-8血凝抑制抗體提高8.70%（P>0.05）。結果表明，在楓葉鴨的日常飲水中加入1.0、0.5 mL/L雙黃連納米乳口服液，都使楓葉鴨重組禽流感病毒H5亞型二價（Re-6株+Re-8株）滅活苗的免疫效果顯著增強;而在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L處理間免疫效果差異不顯著。

3 討論與結論

免疫器官是動物免疫的物質基礎，免疫器官指數(shù)能夠反映動物免疫功能的強弱[6-7]?？贵w效價的高低是評價疫苗免疫效果最直接的方法，同時也能反映動物免疫功能的強弱。因此，本研究選擇免疫器官指數(shù)、鴨病毒性肝炎中和抗體效價及禽流感血凝抑制抗體效價，研究雙黃連納米乳口服液對楓葉鴨免疫功能的影響。結果表明，在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L與空白對照組相比，各免疫器官指數(shù)都有顯著提高，本結果與楊麗梅等報道的雙黃連蜂膠口服液提高肉雞免疫器官指數(shù)的研究結論[6]相近;DVH中和抗體效價提高顯著，也高于徐新紅等檢測的DVH中和抗體效價;H5亞型禽流感Re-6血凝抑制抗體效價和H5亞型禽流感Re-8血凝抑制抗體效價都有顯著提高[4-5]，也高于楊飛燕等在鴨首次免疫14 d后檢測的Re-6和Re-8血凝抑制抗體效價[8-9]。所有試驗結果也都與畢文術等報道[10]的雙黃連提高淋巴細胞轉化率，增強體液免疫試驗研究相符。說明在楓葉鴨日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液1.0、0.5 mL/L能顯著提高楓葉鴨的免疫器官指數(shù)和疫苗免疫效果。

Ⅰ組楓葉鴨日常飲水中加入試驗品推薦量雙黃連納米乳口服液1.0 mL/L，高于《中國藥典》（2010年版）關于雙黃連口服液有效成分黃芩苷 10.0 mg/mL、綠原酸0.60 mg/mL、連翹苷 0.30 mg/mL 的量，Ⅱ組楓葉鴨日常飲水中加入試驗品雙黃連納米乳口服液0.5 mL/L，各有效成分低于或等于《中國藥典》的量。而Ⅱ組也能夠顯著提高楓葉鴨免疫功能，這可能與本試驗產品采用納米乳生產技術有關。納米乳技術提高了本試驗產品有效成分（黃芩苷、綠原酸、連翹苷）的溶出度、穩(wěn)定性、在消化道的吸收率和生物利用度[11]，相同藥量的情況下，免疫增強效果更佳。在本試驗產品的其他作用研究中，將繼續(xù)研究此用量的效果。

綜上所述，通過在日常飲水中加入雙黃連納米乳口服液，顯著提高楓葉鴨的免疫功能，可在畜牧業(yè)特別是鴨生產上推廣應用。

參考文獻：

[1]侯明香，石朝友. 雙黃連制劑在獸醫(yī)臨床中的應用與觀察[J]. 當代畜牧，2014（9）：82-83.

[2]張一帆. 雙黃連納米的制備工藝的研究[J]. 海峽藥學，2010，22（1）：22-23.

[3]胡振華，楊永平，楊 宇，等. 枯草芽孢桿菌對櫻桃谷肉鴨生長性能、免疫器官指數(shù)、腸道菌群及腸道形態(tài)的影響[J]. 動物營養(yǎng)學報，2018，30（4）：1504-1512.

[4]徐新紅，屠益平，黃 忠. 鴨病毒性肝炎Ⅰ型疫苗中和抗體效果實驗[J]. 獸醫(yī)導刊，2014（13）：75-76.

[5]叢秋實，胡瑞鴻，李叔偉. 鴨病毒性肝炎活疫苗（CH60株）的田間免疫效果評價[J]. 廣東畜牧獸醫(yī)科技，2015，40（3）：51-52.

[6]楊麗梅，馬 力，郭時金，等. 雙黃連蜂膠口服液對肉雞免疫功能的影響[J]. 中國家禽，2015，37（11）：59-60.

[7]付興周，路志芳，申海燕. 番茄紅素復合添加劑對肉雞生長性能、免疫器官指數(shù)及肉質的影響[J]. 江蘇農業(yè)科學，2018，46（19）：202-205.

[8]楊飛燕，劉 穎，張 廉，等. 不同劑量禽流感疫苗免疫肉鴨的效果分析[J]. 中國家禽，2015，37（5）：64-65.

[9]王友令，亓麗紅，徐懷英，等. 櫻桃谷肉鴨H5N1亞型禽流感滅活疫苗（Re-6+Re-8）免疫程序研究[J]. 中國家禽，2017，39（1）：60-63.

[10]畢文術，楊雪冰. 雙黃連免疫增強作用的實驗研究[J]. 黑龍江醫(yī)學，1998（10）：56-57.

[11]楊雪峰，趙 坤，姜金慶. 納米乳給藥系統(tǒng)的應用[J]. 廣東農業(yè)科學，2011，38（7）：125-127.