王嘉佳，李曉倩，高山，牟德華*，何愛民，吉洋洋

1(河北科技大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北 石家莊，050018) 2(河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊，050020) 3(河北省核桃產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，河北 臨城縣，054300)

核桃，胡桃科植物，又稱羌桃、胡桃。其中含大量優(yōu)質(zhì)蛋白，人體必需ω-3脂肪酸，多種微量元素，礦物質(zhì)以及葉酸 (維生素B)、維生素E、胡蘿卜素、核黃素等多種維生素[1]，營養(yǎng)價(jià)值高。核桃粕作為榨油副產(chǎn)物常被用作飼料或丟棄，本實(shí)驗(yàn)從核桃粕中提取核桃蛋白質(zhì)，并進(jìn)一步制備核桃多肽，同時(shí)選取大豆多肽、核桃蛋白等功能因子加入核桃乳中，制備具有抗氧化、抗疲勞功效的功能性核桃乳。

生物活性肽是一種對機(jī)體有益的肽類化合物，通常含有3～20個氨基酸殘基，可以調(diào)節(jié)生物體的代謝和生理功能，對人體健康十分有益[2]。目前研究發(fā)現(xiàn)了抗菌肽[3]、降壓肽[4]、抗氧化肽[5]、抗血栓肽[6]、免疫調(diào)節(jié)肽[7]、礦物質(zhì)結(jié)合肽[8]、大豆多肽[9]等多種生物活性肽。核桃多肽和大豆多肽均為植物活性多肽，食用安全性高，具有抗疲勞、降血糖、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能[10-18]。由于目前核桃多肽、大豆多肽、核桃蛋白等功能因子對小鼠運(yùn)動耐力影響以及抗疲勞效果通常采用單一的負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行分析評價(jià)，而其抗氧化活性多以體外實(shí)驗(yàn)為主，缺乏多途徑且完備的分析評價(jià)機(jī)制，因此對其抗疲勞和抗氧化活性進(jìn)行深入研究已迫在眉睫。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

核桃仁、核桃粕，河北綠嶺果業(yè)有限公司；大豆多肽粉(肽含量≥80%)，北京中食海氏生物技術(shù)有限公司；堿性蛋白酶(200 U/mg)、木瓜蛋白酶(800 U/mg)，上海源葉生物科技有限公司；乳酸測試盒、肝/肌糖原測試盒、尿素氮測試盒(脲酶法)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)測試盒、總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)測試盒、過氧化氫酶(catalase，CAT)活性測試盒、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-PX)測試盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)測試盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

Adventurer分析電子天平，美國奧豪斯儀器有限公司；QI-24高通量組織研磨儀，上海啟前電子科技有限公司；DEL7A320 pH計(jì)，上海展儀儀器設(shè)備有限公司；EPOCH2全波長酶標(biāo)儀，美國博騰儀器有限公司方法；H2050R-1型低溫離心機(jī)，湖南湘儀儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

核桃蛋白復(fù)配核桃乳、核桃多肽復(fù)配核桃乳、大豆多肽復(fù)配核桃乳由實(shí)驗(yàn)室制備。為簡化不同種類核桃乳制備工藝，實(shí)驗(yàn)首先制備單一核桃乳，再將核桃蛋白粉、核桃多肽粉及大豆多肽粉分別按一定濃度添加到核桃乳中，均質(zhì)處理后得到不同種類的核桃乳，制備工藝如下：

核桃乳制備：挑選顆粒飽滿核桃仁50 g，按照料液比1∶20(g∶mL)加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5% NaOH溶液,煮沸5 min去皮，膠體磨磨漿20 min，過濾后定容至1 L，調(diào)節(jié)pH至9，高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)2次，灌裝到密閉玻璃瓶中，121 ℃滅菌20 min，冷卻后得到核桃乳,備用。

核桃蛋白復(fù)配核桃乳制備：將核桃粕放入55 ℃烘箱烘干，按料液比1∶55(g∶mL)配制成核桃粕溶液，調(diào)節(jié)pH至8.5，50 ℃超聲攪拌60 min，超聲功率為150 W，4 500 r/min離心10 min，去油層及下層沉淀，上清液調(diào)節(jié)pH值至4.5，4 500 r/min離心10 min取沉淀層，將沉淀用去離子水洗至中性，冷凍干燥后得到核桃蛋白粉。根據(jù)GB 5009.5—2016測得核桃蛋白粉蛋白含量為83.15%。將核桃蛋白粉以核桃乳作為溶劑復(fù)溶，質(zhì)量濃度為100 mg/mL，高壓均質(zhì)后得到核桃蛋白復(fù)配核桃乳。

核桃多肽復(fù)配核桃乳制備：稱取一定量的核桃蛋白粉，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%核桃蛋白溶液，60 ℃搖床水浴30 min后，調(diào)節(jié)pH至7.5，按質(zhì)量比2∶1的比例加入堿性蛋白酶與木瓜蛋白酶，使最終加酶量為9 000 U/g，60 ℃搖床酶解3 h，沸水浴滅酶10 min后離心取上清液，過分子質(zhì)量為5 000 Da的透析袋，透析液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，冷凍干燥制成核桃多肽粉。通過雙縮脲法測得核桃多肽含量為75.43%。將核桃多肽粉用核桃乳作為溶劑復(fù)溶，質(zhì)量濃度為100 mg/mL，高壓均質(zhì)后得到核桃多肽復(fù)配核桃乳。

大豆多肽復(fù)配核桃乳制備：將大豆多肽粉用核桃乳作為溶劑復(fù)溶，質(zhì)量濃度為100 mg/mL，高壓均質(zhì)后得到大豆多肽復(fù)配核桃乳。

1.4 實(shí)驗(yàn)動物

昆明小鼠，SPF 級，體質(zhì)量22～26 g，雄性，河北醫(yī)科大學(xué)所提供。動物分組飼養(yǎng)于12 h明暗交替的鼠房中，鼠房溫度為18～21 ℃，相對濕度為(50±5)%，標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，可自由攝食、飲水。

分組處理情況：取雄性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為空白組(NC)，疲勞模型組(FC)，實(shí)驗(yàn)組：核桃蛋白復(fù)配核桃乳組(WEP)、核桃多肽復(fù)配核桃乳組(WPP)、大豆多肽復(fù)配核桃乳組(SP)。WEP組、WPP組、SP組分別灌胃5 mL/(kg·d)(按照60 kg成人每天飲用300 mL核桃乳為標(biāo)準(zhǔn))的核桃蛋白復(fù)配核桃乳、核桃多肽復(fù)配核桃乳、大豆多肽復(fù)配核桃乳，每天灌胃1次，NC組及FC組正常飲水進(jìn)食，連續(xù)灌胃28 d后，小鼠開始進(jìn)行懸掛、爬桿、游泳、負(fù)重游泳4種運(yùn)動實(shí)驗(yàn)，每天完成1種，記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。各試驗(yàn)組進(jìn)行游泳運(yùn)動后，將各組小鼠撈出擦干，摘眼球取血，脫頸處死，測定疲勞與抗氧化等生理生化指標(biāo)。

小鼠運(yùn)動性疲勞模型的建立：小鼠采用游泳運(yùn)動的方式進(jìn)行疲勞模型的建立，除NC組小鼠，F(xiàn)C組、WEP組、WPP組和SP組小鼠每周進(jìn)行6次游泳訓(xùn)練，周日休息，每天下午4點(diǎn)開始，每次訓(xùn)練60 min，避免小鼠在水上漂浮偷懶，不時(shí)用玻璃棒攪動水面，使小鼠產(chǎn)生疲勞。

1.5 方法

1.5.1 小鼠體質(zhì)量及臟器指數(shù)測定

每周稱量并記錄小鼠體質(zhì)量，4周后小鼠脫頸處死，取心、肝、脾、腎、腎周脂肪、睪丸、附睪脂肪稱取質(zhì)量，記錄數(shù)據(jù)。通過公式(1)計(jì)算臟器指數(shù)：

(1)

1.5.2 懸掛實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[19]方法，將小鼠雙前肢懸掛在水平電線上，觀察小鼠，若2只后肢均能抓住電線，記3分；僅能用1只后肢抓住電線，記2分；2只后肢均不能抓住電線，記1分；小鼠跌落記為0分。

1.5.3 爬桿實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[20]方法，小鼠灌胃30 min后，開始爬桿試驗(yàn)，將小鼠懸掛在一長30 cm，直徑約0.6 cm的光滑鐵桿上端，開始計(jì)時(shí)，當(dāng)小鼠肌肉疲勞滑落下來，停止計(jì)時(shí)，記3次滑落時(shí)間之和作為爬桿時(shí)間。

1.5.4 游泳實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[21]中游泳實(shí)驗(yàn)方法：小鼠灌胃30 min 后，放入一個水深約15 cm，水溫約25℃的方形游泳箱中，讓其自由游泳，若小鼠能夠在1 min內(nèi)持續(xù)游泳，記3.0分；30 s以上時(shí)間持續(xù)游泳僅偶爾漂浮，記2.5分；30 s以上時(shí)間漂浮，記2.0分；僅偶爾游泳，記1.5分；持續(xù)漂浮，記1.0分，取5次實(shí)驗(yàn)結(jié)果平均值為小鼠最終得分。

參考文獻(xiàn)[22]中負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)方法：小鼠灌胃30 min后，每只小鼠尾部綁上占體質(zhì)量5%的小玻璃珠，放入游泳箱開始負(fù)重游泳，游泳箱水深約30 cm，水溫約25 ℃。將小鼠放入水中開始計(jì)時(shí)，至小鼠力竭結(jié)束計(jì)時(shí)，力竭標(biāo)準(zhǔn)為小鼠沉入水下7 s不上浮。

1.5.5 疲勞及抗氧化生理生化指標(biāo)的測定

小鼠血清、骨骼肌或肝臟中乳酸含量，肝/肌糖原含量，尿素氮含量，MDA含量、T-AOC能力、CAT酶活力、GSH-PX酶活力、SOD酶活力均按相對應(yīng)的試劑盒中的方法測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體質(zhì)量及臟器指數(shù)

小鼠的體質(zhì)量增長情況及臟器指數(shù)反應(yīng)了小鼠的機(jī)體健康狀態(tài)，小鼠的體質(zhì)量增長情況見表1，小鼠臟器重質(zhì)量及臟器指數(shù)見表2，在連續(xù)灌胃4周后，各組小鼠體質(zhì)量均呈增長趨勢，小鼠體質(zhì)量增長在試驗(yàn)前、中、末期與NC組相比均無顯著性差異(P>0.05，n=10)，各臟器質(zhì)量與臟器指數(shù)與NC組相比無顯著性差異(P>0.05，n=10)，表明灌胃的核桃多肽復(fù)配核桃乳、核桃蛋白復(fù)配核桃乳及大豆多肽復(fù)配核桃乳對小鼠機(jī)體均無毒副作用。

2.2 耐力實(shí)驗(yàn)

運(yùn)動耐力的提高是評估抗疲勞活動的重要指標(biāo)，通過小鼠的運(yùn)動耐力直接證實(shí)了抗疲勞效果[23]。懸掛實(shí)驗(yàn)用來測定小鼠的肢體肌力，評分越高，小鼠肢體肌力越強(qiáng)，耐疲勞效果越好。爬桿實(shí)驗(yàn)考察了小鼠肌肉對靜態(tài)力的持久能力，爬桿時(shí)間的越長，小鼠的肌肉持久力越長，耐疲勞程度越強(qiáng)。游泳實(shí)驗(yàn)考察了小鼠的運(yùn)動耐力，若小鼠能在水中連續(xù)不斷地游泳，評分越高，運(yùn)動耐力越強(qiáng)，抗疲勞效果越顯著[24]。負(fù)重游泳測試是評估抗疲勞實(shí)驗(yàn)運(yùn)動的模型，用負(fù)重游泳時(shí)間長短來代表小鼠的疲勞程度[25]。

表1 小鼠體質(zhì)量變化表 單位：g

表2 小鼠臟器指數(shù) 單位：%

由圖1-a可知，各組懸掛評分排序?yàn)椋篧PP組2.8分>SP組2.5分>WEP組2.4分>NC組2.3分>FC組2.1分。WPP組懸掛評分與FC組相比存在顯著性差異(P<0.05，n=10)，表明核桃多肽復(fù)配核桃乳有效提高了小鼠的肢體肌力。由圖1-b可知， WEP、WPP、SP組與FC組相比顯著延長了小鼠的爬桿時(shí)間，爬桿時(shí)間分別是FC組的2.15、2.70、2.28倍，表明3種復(fù)配核桃乳提高肌肉對靜態(tài)力的持久能力效果顯著，肌肉耐疲勞程度順序?yàn)閃PP組>SP組>WEP組。由圖1-c可知，各組游泳評分排序?yàn)椋篧PP組2.60分>SP組2.40分>WEP組2.36分>NC組2.05分>FC組1.75分，WPP組相與NC組比差異極顯著， WPP、SP組與FC組相比差異顯著，3種復(fù)配核桃乳均在一定程度上提高了小鼠的運(yùn)動耐力，核桃多肽及大豆多肽復(fù)配核桃乳耐疲勞效果更顯著。由圖1-d可知，WEP、SP組與NC組比差異不顯著，WPP組與NC組比差異極顯著，WEP、WPP、SP 組與FC組相比均能極顯著延長小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，分別是FC組的2.57、3.53、2.69倍，3種復(fù)配核桃乳均能有效增強(qiáng)小鼠的抗疲勞能力，耐疲勞程度順序?yàn)閃PP組>SP組>WEP組。

a-小鼠懸掛評分;b-小鼠爬桿時(shí)間;c-小鼠游泳實(shí)驗(yàn)評分;d-鼠負(fù)重游泳時(shí)間,(x±s,n=10)圖1 耐力實(shí)驗(yàn)Fig.1 Endurance test 注：*表示與FC組比存在顯著性差異(P<0.05)，**表示與FC組比存在極顯著性差異(P<0.01)； #表示與NC組比存在顯著性差異(P<0.05)，##表示與NC組比存在極顯著性差異(P<0.01)(下同)

2.3 疲勞生理生化指標(biāo)測定

在進(jìn)行高強(qiáng)度、長時(shí)間運(yùn)動時(shí)，機(jī)體中的糖進(jìn)行無氧酵解產(chǎn)生大量的乳酸從而獲得足夠能量，乳酸的含量可以反映組織供氧和代謝狀態(tài)，是評價(jià)機(jī)體疲勞的一個重要指標(biāo)[26-27]。由表3可知，WEP、WPP、SP各實(shí)驗(yàn)組血清和骨骼肌中乳酸含量與FC組相比均極顯著降低(P<0.01)，血清中各組分別降低了32.60%、37.81%、35.20%，骨骼肌中各組分別降低了20.00%、37.20%、24.72%，說明各實(shí)驗(yàn)組均能夠增強(qiáng)乳酸的有氧代謝活動[28]，緩解機(jī)體的疲勞狀態(tài)；血清尿素氮是評價(jià)機(jī)體疲勞的另一個重要的指標(biāo)，由表3可知，WEP、WPP、SP組與FC組相比血清尿素氮的含量均極顯著降低，分別降低了15.03%、39.40%、19.62%，表明3種復(fù)配核桃乳均能夠有效清除血清尿素氮的累積，降低運(yùn)動過程中對機(jī)體造成的損傷，乳酸和尿素氮代謝效果依次為：WPP組>SP組>WEP組。

表3 疲勞生理生化指標(biāo)Table 3 Fatigue physiological and biochemical indicators

肝/肌糖原的儲量是產(chǎn)生疲勞的決定性因素，當(dāng)機(jī)體需要供能時(shí)，肝/肌糖原可以迅速供給以滿足機(jī)體需求[29]，兩者含量的高低與機(jī)體抗疲勞能力成正相關(guān)。由表3可知，WEP、WPP、SP組中肝糖原含量與FC相比有極顯著性差異，分別為FC組的1.50、1.64、1.44倍，說明高強(qiáng)度耐力運(yùn)動使FC組小鼠肝糖原的消耗大于積累，導(dǎo)致運(yùn)動組小鼠肝糖原的耗竭，而WEP、WPP、SP各實(shí)驗(yàn)組肝糖原含量充足，其中WPP組含量最高7.43 mg/g，差異最為顯著，小鼠運(yùn)動耐力最強(qiáng)；肌肉中的糖以肌糖原的形式儲存，在機(jī)體劇烈運(yùn)動大量消耗血糖時(shí)，肌糖原開始分解，提供能量[30]。WEP、WPP和SP組的肌糖原含量與FC組比有顯著差異，分別提高了1.31、1.48、1.41倍，其中WPP組肌糖原含量最高達(dá)1.54 mg/g，肌糖原供應(yīng)充足，有效提高了小鼠運(yùn)動耐力。

2.4 抗氧化生理生化指標(biāo)測定

2.4.1 SOD酶活力的測定

活性氧(reactive oxygen species,ROS)和抗氧化劑分子之間的不平衡引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，氧化應(yīng)激和ROS是引起機(jī)體運(yùn)動疲勞最重要原因，尤其是骨骼肌中的氧化失衡會導(dǎo)致肌肉疲勞增加[31]。因此，提高體內(nèi)抗氧化酶的活性，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的防御機(jī)制，能夠起到抗疲勞的作用[32]。SOD能夠有效清理超氧陰離子自由基，通過抵消氧化應(yīng)激來緩解疲勞[33]。由圖2可知，小鼠血清、肝臟和骨骼肌中FC組與NC組比SOD酶活力均極顯著降低，疲勞模型成立；小鼠血清、肝臟和骨骼肌中各實(shí)驗(yàn)組SOD酶活力與NC組相比，WEP、SP組均無顯著性差異，WPP組SOD酶活力有極顯著升高趨勢，3組均有效提高了疲勞小鼠體內(nèi)SOD酶活力，能有效清除超氧陰離子自由基。WEP、WPP、SP 組SOD酶活力與FC組相比均呈明顯升高趨勢，血清中分別升高0.24、0.37、0.30倍，肝臟中分別升高0.20、0.30、0.26倍，骨骼肌中分別升高0.37、0.48、0.39倍，均有極顯著差異。表明3種復(fù)配核桃乳均可有效提高小鼠耐力運(yùn)動后肝臟SOD酶活力，對提高SOD酶活力影響順序依次為WPP>SP>WEP。

a-血清；b-肝臟；c-骨骼肌圖2 核桃蛋白乳、核桃多肽乳和大豆肽乳對小鼠SOD活力的影響Fig.2 Effects of walnut protein milk, walnut polypeptide milk and soy peptide milk on SOD activity in mice

2.4.2 GSH-PX酶活力的測定

由圖3可知，小鼠血清、肝臟和骨骼肌中FC組與NC組相比，GSH-PX酶活力均極顯著降低，分別降低了51.3%、36.6%、52.0%，疲勞模型成立；小鼠血清、肝臟和骨骼肌中WEP、WPP、SP各實(shí)驗(yàn)組的 GSH-PX酶活力與NC組相比均有升高趨勢，WPP組GSH-PX酶活力均有極顯著差異，WEP組差異均不顯著，SP組在血清及肝臟中GSH-PX酶活力差異顯著，骨骼肌中差異不顯著，3組均有效提高了疲勞小鼠體內(nèi)的 GSH-PX酶活力。WEP、WPP、SP 組GSH-PX酶活力與FC組比均呈明顯升高趨勢，血清中GSH-PX酶活力分別提高2.13、2.70、2.48倍，肝臟中分別提高1.74、1.94、1.87倍，骨骼肌中分別提高2.16、2.58、2.27倍，均有極顯著差異。表明3種復(fù)配核桃乳均可提高耐力運(yùn)動后疲勞小鼠體內(nèi)的 GSH-PX酶活力，有較強(qiáng)的清除ROS的能力，可以有效緩解機(jī)體運(yùn)動后的疲勞感，對提高GSH-PX酶活力影響順序依次為WPP>SP>WEP。

a-血清；b-肝臟；c-骨骼肌圖3 核桃蛋白乳、核桃多肽乳和大豆肽乳對小鼠GSH-PX活力的影響Fig.3 Effects of walnut protein milk, walnut polypeptide milk and soy peptide milk on the activity of GSH-PX in mice

2.4.3 CAT酶活力的測定

由圖4可知，小鼠血清、肝臟和骨骼肌中FC組與NC組相比，CAT酶活力均極顯著降低，分別降低了38.0%、55.1%、61.8%，疲勞模型成立；小鼠血清、肝臟和骨骼肌中WEP組與NC組比CAT酶活力均無顯著性差異，WPP組與NC組比CAT酶活力均有極顯著升高趨勢，SP組與NC組比CAT酶活力在血清中差異顯著，肝臟和骨骼肌中差異不顯著，WEP、WPP、SP 組對疲勞小鼠體內(nèi)CAT酶活力的升高有明顯促進(jìn)作用。WEP、WPP、SP 組CAT酶活力與FC組相比均呈明顯升高趨勢，差異極顯著，血清中GSH-PX酶活力分別提高1.86、2.13、2.00倍，肝臟中分別提高2.46、2.71、2.47倍，骨骼肌中分別提高3.01、3.99、2.63倍。表明3種復(fù)配核桃乳均能有效分解過氧化物，阻斷過氧化鏈，緩解氧化應(yīng)激導(dǎo)致的機(jī)體疲勞，對提高CAT酶活力影響順序依次為WPP>SP>WEP。

a-血清；b-肝臟；c-骨骼肌圖4 核桃蛋白乳、核桃多肽乳和大豆肽乳對小鼠CAT活力的影響Fig.4 Effects of walnut protein milk, walnut polypeptide milk and soy peptide milk on CAT activity in mice

2.4.4 MDA含量的測定

MDA是自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，自由基過量積累能夠與核酸、膜脂、細(xì)胞蛋白等反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體氧化損傷，因此細(xì)胞的受脂質(zhì)氧化的損傷程度可以通過 MDA 的含量反映出來[34]。由圖5可知，小鼠血清、肝臟和骨骼肌中FC組與NC組比MDA含量急劇上升，分別為NC組的2.02、2.95、1.81倍，有極顯著性差異(P<0.01)，疲勞模型成立；WEP、WPP、SP 各組MDA含量與NC組相比，WPP組在血清、肝臟及骨骼肌中均無顯著性差異(P>0.05)，SP組在肝臟和骨骼肌中無顯著性差異。WEP、WPP、SP 3組MDA含量與FC組比均呈明顯降低趨勢，血清中分別下降34.1%、49.0%、43.1%，肝臟中分別下降49.8%、64%、61%，骨骼肌中分別下降20.8%、37.9%、34.3%，均有極顯著差異。表明3種復(fù)配核桃乳均可降低小鼠劇烈運(yùn)動后血清及臟器中 MDA的含量，加速M(fèi)DA的及時(shí)清除，避免機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷，對MDA清除效果強(qiáng)弱順序依次為WPP>SP>WEP。

a-血清；b-肝臟；c-骨骼肌圖5 核桃蛋白乳、核桃多肽乳和大豆肽乳對小鼠MDA含量的影響Fig.5 Effects of walnut protein milk, walnut polypeptide milk and soy peptide milk on MDA content in mice

2.4.5 T-AOC的測定

圖6比較了各組在血清、肝臟及骨骼肌中的T-AOC。小鼠血清、肝臟和骨骼肌中FC組與NC組比T-AOC均極顯著降低，分別降低了38.3%、77.4%、90.3%，疲勞模型成立；小鼠血清、肝臟和骨骼肌中WEP、WPP、SP 組與NC組比T-AOC均無顯著性差異，表明3種復(fù)配核桃乳均有效提高了疲勞小鼠體內(nèi)總抗氧化能力。WEP、WPP、SP 組T-AOC與FC組比呈明顯升高趨勢，血清中T-AOC分別提高1.76、2.04、1.64倍，肝臟中分別提高2.34、6.58、3.69倍，骨骼肌中分別提高8.35、14.31、12.22倍，對提高疲勞小鼠體內(nèi)總抗氧化能力影響順序依次為WPP>SP>WEP。

a-血清；b-肝臟；c-骨骼肌圖6 核桃蛋白乳、核桃多肽乳和大豆肽乳對小鼠T-AOC的影響Fig.6 Effect of walnut protein milk, walnut peptide milk and soybean peptide milk on mouse T-AOC 注：在37 ℃時(shí)，每分鐘每毫克血清或組織蛋白是反應(yīng)體系的吸光度值每增加0.01時(shí)，為一個總抗氧化能力單位

3 結(jié)論

3種復(fù)配核桃乳均能一定程度上提高小鼠的運(yùn)動耐力，有一定的抗疲勞效果，其中核桃多肽復(fù)配核桃乳的抗疲勞效果更為顯著。3種復(fù)配核桃乳均能顯著增強(qiáng)小鼠血清和骨骼肌中乳酸的有氧代謝活動，清除血清尿素氮的累積，提高肝糖原和肌糖原含量，其中核桃多肽復(fù)配核桃乳代謝乳酸效果最顯著。3種復(fù)配核桃乳均可降低小鼠劇烈運(yùn)動后血清及臟器中 MDA的含量，加速M(fèi)DA的及時(shí)清除，均有較強(qiáng)的 GSH-PX，CAT及SOD酶活力，可以有效清除體內(nèi)的ROS，其中WPP組抗氧化酶活力最強(qiáng)，總抗氧化能力最強(qiáng)，抗氧化效果最好。本研究結(jié)果將為未來功能性核桃乳的開發(fā)與應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。