孫 皎，于曉風，付雯雯，李 敏，徐華麗，睢大筼*

（1.吉林大學藥學院藥理教研室，長春130021；2.吉林大學護理學院，長春130031）

人參果皂苷（GFS）系從五加科人參屬植物人參（Panax ginseng C.A.Mey）的成熟果實中分得的人參皂苷類物質，主要成分人參皂苷Re的含量達85%。課題組前期研究表明，GFS對大鼠急性心肌缺血、心肌梗死及其心肌缺血再灌注損傷均具有明顯保護作用[1～3]，能明顯降低心肌梗死犬的心肌缺血程度及缺血范圍，縮小心肌梗死面積，降低血清心肌三酶活性，能改善心肌代謝，提高內源性抗氧化酶活性，減輕氧自由基的損傷，亦可使急性心肌梗死犬心肌血流量明顯增加，冠脈血管阻力降低，心肌氧利用率及心肌耗氧量明顯減少[4～6]，并對四氧嘧啶及腎上腺素所致的實驗性高血糖均具有明顯降糖作用，可能與其清除自由基、抑制脂質過氧化及增加葡萄糖的轉化和利用有關[7]。

九里香葉總黃酮（TFMP）是從蕓香科九里香屬植物九里香（Murraya paniculata(L.)Jack）葉中提取出的黃酮類化合物，總黃酮含量達到92%以上。2009年，治療Ⅱ型糖尿病中藥5類新藥 《九里香葉總黃酮膠囊》臨床前研究，獲得國家“十一五重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項立項資助（2009ZX09102-102），已完成全部臨床前研究工作，并順利通過國家驗收。研究表明，TFMP對腎上腺素所致小鼠實驗性高血糖以及大鼠2型糖尿病均具有明顯保護作用，能提高胰島β細胞分泌指數(shù)，改善脂代謝紊亂，抵抗自由基介導的脂質過氧化，減輕炎性反應[8]，并對大鼠實驗性糖尿病腎病和心肌病具有保護作用[9、10]。本文建立大鼠糖尿病性心肌病模型，觀察二者聯(lián)合應用的協(xié)同作用，為其開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動物

Wistar大鼠，雄性，體重 160～180g，由吉林大學基礎醫(yī)學院動物實驗中心提供，質量合格證號：SCXK-（吉）2007-0003。

1.2 藥品及試劑

GFS由吉林省集安益盛藥業(yè)股份有限公司提供，批號：20180825，TFMP由長春瑞德醫(yī)藥科技有限公司提供，批號：20180810，均以0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配制成所需濃度；卡托普利由上海普康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：20180603；鏈脲佐菌素美國Sigma 化學公司，批號：087k1403；CK-MB、LDH、AST、MDA、SOD、GSH-Px、TNF-α 及 IL-1β 測試盒由南京建成生物工程研究所提供，批號：20180915；TC、TG、LDL-c及HDL-c測試盒由浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司提供，批號：20180910。

1.3 實驗方法

160只 Wistar大鼠隨機分為正常組（20只）和造模組 （140只）。造模組大鼠每日給予高糖高脂飲食（配方：20%蔗糖，10%豬油，10%雞蛋，1%膽固醇，0.1%膽酸鈉，0.2%丙硫氧嘧啶，正常大鼠飼料），正常組大鼠每日正常飲食、水。8周后，正常組和造模型組隨機各取10只大鼠，尾靜脈取血檢測血清TG、TC及FFA含量，確證造模組大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗后，舌下注射STZ（30mg/kg），正常組舌下注射等體積緩沖液。2周后，尾靜脈取血用血糖儀檢測空腹血糖，將空腹血糖值 （FBG）≥11.1mmol/L大鼠列入2型糖尿病動物。將成模大鼠按血糖和體重隨機分為5組，即：模型組、GFS（80mg/kg）組、TFMP（80mg/kg）組、聯(lián)合用藥（GFS 40mg/kg+TFMP 40mg/kg）組及陽性藥卡托普利（10mg/kg）組，每組20只。另選10只正常組大鼠作為對照組。各組大鼠按照上述劑量每日灌胃給藥1次，正常組及模型組灌胃給予0.5%CMC-Na 10mL/kg，連續(xù)12周。每周記錄體重，每3周尾靜脈取血，用血糖儀測定FBG一次。實驗結束時，腹腔注射10%水合氯醛30mg/kg麻醉，腹主動脈采血，離心分離血清，測定 CK-MB、LDH、AST 活性及 GSP、TC、TG、HDL-c及LDL-c含量，并通過TC/HDL-c計算冠狀動脈風險指數(shù)（CRI）。取大鼠心肌組織，在4℃環(huán)境下制備組織勻漿，3500r/min離心15min后吸取上清液，用試劑盒檢測心臟組織 SOD、GSH-Px活性及 MDA、TNF-α、IL-1β含量。

1.4 統(tǒng)計處理與數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用±s表示。應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行t檢驗統(tǒng)計學處理。

2 結果

2.1 對糖尿病性心肌病大鼠血清心肌三酶活性的影響

與對照組比較，模型組大鼠血清CK-MB、AST和LDH活性均明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，GFS、TFMP、聯(lián)合用藥及卡托普利組均可使血清CK-MB、AST 和 LDH 活性明顯降低（P＜0.05或 P＜0.01），詳見表1。

表1 聯(lián)合用藥對糖尿病性心肌病大鼠血清心肌三酶活性的影響（）

表1 聯(lián)合用藥對糖尿病性心肌病大鼠血清心肌三酶活性的影響（）

與對照組比較 ##P＜0.01；與模型組比較 *P＜0.05，**P＜0.01

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2.2 對糖尿病性心肌病大鼠血糖的影響

與對照組比較， 模型組大鼠第 0、3、6、9、12 周FBG 均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，GFS、TFMP及聯(lián)合用藥組于藥后第3周FBG均顯著降低 （P＜0.05或 P＜0.01），并持續(xù)到12周；卡托普利組FBG無明顯差異（P＞0.05），詳見表 2。

表2 聯(lián)合用藥對糖尿病性心肌病大鼠血糖的影響（x±s）

2.3 對糖尿病性心肌病大鼠血脂的影響

與對照組比較，模型組大鼠TG、TC及LDL-c含量及CRI均顯著升高，HDL-c含量顯著降低 （P＜0.05或 P＜0.01）。與模型組比較，GFS、TFMP及聯(lián)合用藥組可使TG、TC及LDL-c含量及CRI顯著降低，HDL-c含量顯著升高 （P＜0.05或 P＜0.01），卡托普利組對TG、TC、LDL-c、HDL-c含量及 CRI均無明顯影響（P＞0.05），詳見表 3。

表3 聯(lián)合用藥對糖尿病性心肌病大鼠血脂的影響（x±s）

2.4 對糖尿病性心肌病大鼠血清GSP及心肌組織TNF-α及IL-1β含量的影響

與對照組比較，模型組大鼠血清GSP及TNF-α及IL-1β含量均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，GFS、TFMP及聯(lián)合用藥組均可使血清GSP、TNF-α及IL-1β 含量明顯降低（P＜0.05 或 P＜0.01），卡托普利組可使血清TNF-α及IL-1β含量明顯降低 （P＜0.05或P＜0.01），對 GSP 含量無明顯影響（P＞0.05），詳見表 4。

表4 聯(lián)合用藥對糖尿病性心肌病大鼠GSP、TNF-α及IL-6的影響（x±s）

2.5 對糖尿病性心肌病大鼠心肌組織氧化應激的影響

與對照組比較，模型組大鼠心肌組織SOD、GSHPx活性顯著降低，MDA 含量顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，GFS、TFMP、聯(lián)合用藥及卡托普利組均可使心肌組織SOD、GSH-Px活性顯著提高，MDA含量顯著降低（P＜0.05 或 P＜0.01），詳見表 5。

表5 聯(lián)合用藥對糖尿病性心肌病大鼠心肌組織氧化應激的影響（x±s）

3 討論

糖尿病心肌病是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，主要是由心肌能量代謝異常，包括糖和乳酸鹽代謝減少，脂肪代謝增加導致游離脂肪酸堆積以及體內穩(wěn)態(tài)失衡。在此基礎上出現(xiàn)氧化應激，最終導致細胞凋亡、炎癥反應增加、內皮功能紊亂以及心肌纖維化等病理生理改變。本實驗采用高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ注射誘導大鼠2型糖尿病，模型成功后繼續(xù)高脂飲食喂養(yǎng)12周，維持大鼠體內高血脂狀態(tài)。研究表明，模型組大鼠FBG及GSP均明顯增高，心室重量/體重比增加，HE染色顯示心肌損傷嚴重。GFS與TFMP聯(lián)合用藥能明顯改善心肌病理組織形態(tài)改變，提示對大鼠2型糖尿病心肌病變具有保護作用（另文發(fā)表）。本實驗研究表明，糖尿病性心肌病大鼠血清TG、TC、LDH-c明顯升高，HDL-c下降。這是糖尿病出現(xiàn)代謝紊亂的表現(xiàn)，是糖尿病心肌病發(fā)生的基礎。GFS與TFMP聯(lián)合用藥12周能明顯降低大鼠血清TG、TC、LDH-c，升高HDL-c，提示其能通過改善2型糖尿病大鼠血脂紊亂，改善糖尿病性心肌病引起的心肌細胞收縮功能異常。

Evans等[11]認為，高糖引起的組織及細胞損傷最早出現(xiàn)的是氧化應激。體內抗氧化酶SOD、CAT及GSH-Px等在糖尿病心肌病中起重要作用。本實驗結果顯示，高糖高脂伴小劑量STZ可導致2型糖尿病大鼠心肌組織SOD和GSH-Px活性下降，MDA含量上升，提示糖尿病已引發(fā)了心肌組織氧化應激的發(fā)生。GFS與TFMP聯(lián)合用藥可使SOD及GSH-Px活性明顯上升，MDA含量明顯下降，表明其可通過改善高糖誘導的氧化應激損傷保護糖尿病心肌病變。炎性因子主要以IL-6、TNF-α為主導。TNF-α通過激活細胞因子級聯(lián)反應，促進氧自由基產(chǎn)生，活化中性粒細胞，誘導心肌細胞凋亡等方式，加重心肌損傷。研究表明，心肌細胞產(chǎn)生的IL-6主要由缺血及再灌注誘導[12]。GFS與TFMP聯(lián)合用藥使血液中IL-6、TNF-α濃度降低，表明其也通過抗炎作用保護心肌，也可能通過影響TNF-α參與的死亡受體通路激活的心肌細胞凋亡發(fā)揮心肌保護作用。