高 霞，陳 輝，李玉秀，李文君，譚 敏

（1. 湖南新程檢測有限公司，湖南 株洲 412000；2. 工業(yè)和信息化部電子第五研究所，廣東 廣州 510000）

鄰苯二甲酸酯，又稱酞酸酯，縮寫PAEs，作為一種塑料改良劑，鄰苯二甲酸酯廣泛應(yīng)用于玩具、食品包裝材料、醫(yī)用血袋和膠管、乙烯地板和壁紙、清潔劑、潤滑油、個(gè)人護(hù)理用品等產(chǎn)品中。研究表明，鄰苯二甲酸酯在人體和動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮著類似雌性激素的作用，可干擾內(nèi)分泌，若長期食用可能引起生殖系統(tǒng)異常、甚至造成畸胎、癌癥的危險(xiǎn)[1]。目前我國塑料瓶/桶裝花生油廣泛被人們食用，鄰苯二甲酸酯類塑化劑極易浸出和揮發(fā)到花生油中，并通過存儲(chǔ)期間與包裝的接觸及塑料包裝的老化，使花生油中的塑化劑不斷積累[3-8]，因此，檢測花生油中PAEs具有重要意義。

目前PAEs檢測方法主要有氣相色譜法[1-3]、液相色譜法[1,4]、氣相色譜-質(zhì)譜法[1,5-9]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1,10]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1,11]等。氣相色譜和液相色譜儀器靈敏度較低，方法檢出限高；氣相色譜-質(zhì)譜儀靈敏度高，方法檢出限低、選擇性好、定量準(zhǔn)確；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，儀器普及率低。前處理方法主要有凝膠色譜（GPC）[1,5]、固相萃?。⊿PE）[1,3,6-7]、QuEChERS[8-9]等。GPC儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，所用的溶劑純度要求高，用量大，成本高，不適合日常批量樣品檢測；固相萃取操作過程復(fù)雜，檢測成本高；QuEChERS方法與GPC和SPE方法相比，具有快速（quick）、簡單（easy）、廉價(jià)（cheap）、有效（effective）、可靠（rugged）、安全（safe）等特點(diǎn)。

本研究以正己烷飽和乙腈提取、改進(jìn)QuEChERS方法分離凈化，通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測花生油中17種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)。與常規(guī)方法相比，本方法提高了檢測效率，經(jīng)驗(yàn)證，鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)檢出限低至0.01 mg/kg，定量限低至 0.03 mg/kg，精密度低至 1.10%。本方法操作簡單快捷、靈敏度高、準(zhǔn)確性好，可用以快速測定花生油中17種鄰苯二甲酸酯類化合物。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

TSQ7000氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、TG-5MS色譜柱（30 m×0. 25 mm×0.25 μm）：美國 Thermo fisher公司；VORTEX-6渦旋混合器：其林貝爾公司；H2050R冷凍離心機(jī)：長沙湘儀公司；FG-24固相萃取儀、CM-24圓形水浴氮吹儀：廣州丹安公司。

1.2 材料試劑

乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）：美國Supelco公司；

16種鄰苯二甲酸酯混標(biāo)（1 000 mg/L，溶劑為正己烷，包括：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二-4-甲基-2-戊基酯（BMPP）、鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二正戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸丁芐酯（BBP）、鄰苯二甲酸二丁氧基乙基酯（DBEP）、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP）、鄰苯二甲酸二-2-乙基己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPhP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（DNP））：上海安譜公司；

鄰苯二甲酸二烯丙酯（DAP，98.3 %）：德國Dr.E公司；

乙腈（色譜純）、正己烷（色譜純）：美國TEDIA公司；花生油樣品（塑料瓶裝）：市售。

1.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件

色譜條件：進(jìn)樣口溫度300 ℃；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積：1 μL；載氣（高純氦氣）流速1 mL/min；程序升溫：初始溫度 60 ℃（保持 1 min），以20 ℃/min升至 220 ℃（保持 1 min），再以5 ℃/min升至 250 ℃（保持 1 min），再以20 ℃/min升至280 ℃（保持10 min）。

質(zhì)譜條件：傳輸線溫度300 ℃；離子源溫度320 ℃；電離方式EI；電離能量70 eV；監(jiān)測方式，SIM模式；溶劑延遲6.5 min。

1.4 17種鄰苯二甲酸酯保留時(shí)間和特征離子

表1為采用1.3條件SIM模式下17種鄰苯二甲酸酯保留時(shí)間和特征離子。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.5.1 鄰苯二甲酸二烯丙酯（DAP）標(biāo)準(zhǔn)貯備液

稱取適量DAP，以正己烷為溶劑配制濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

1.5.2 17種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間液

分別移取適量 16種鄰苯二甲酸酯混標(biāo)和DAP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以正己烷配制成濃度為10 mg/L的17種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.6 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取0.5 g混勻后的花生油樣品于10 mL玻璃具塞離心管中，加入5 mL正己烷飽和乙腈，渦旋5 min，5 000 r/min離心5 min，轉(zhuǎn)移上清液于預(yù)先加入25 mg PSA和25 mg C18的離心管中，渦旋5 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液于40 ℃水浴中氮?dú)獯蹈?，加?.0 mL正己烷，渦旋溶解，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，待氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。

表1 17種鄰苯二甲酸酯保留時(shí)間和特征離子

1.7 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

向花生油樣品中準(zhǔn)確加入 17種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.5.2）適量，制備3個(gè)水平的添加樣品，每個(gè)水平重復(fù)6次。添加水平分別為0.5、1.0、5.0 mg/kg。按照1.6的方法處理樣品，按照1.3的方法分析，外標(biāo)法定量，扣除樣品本底，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品、加標(biāo)實(shí)驗(yàn)用樣品及樣品加標(biāo)總離子流圖

標(biāo)準(zhǔn)品、加標(biāo)實(shí)驗(yàn)用樣品及樣品加標(biāo)總離子流圖分別見圖1～3。

圖1 17種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品總離子流色譜圖

圖2 加標(biāo)試驗(yàn)用樣品總離子流色譜圖

圖3 樣品加標(biāo)總離子流色譜圖

2.2 QuEChERS凈化條件的優(yōu)化

QuEChERS常用吸附劑PSA可有效去除脂肪酸、有機(jī)酸、極性色素以及糖類等干擾物，同時(shí)它也是很有用的螯合劑，C18可除去非極性的干擾物如脂類、花青素、蠟質(zhì)等，本研究使用PSA和C18兩種吸附劑凈化油脂樣品，考察兩種吸附劑用量對(duì)凈化效果的影響。

2.2.1 PSA用量的優(yōu)化

考察C18用量為25 mg，PSA用量對(duì)凈化效果的影響，分別往5 mL預(yù)先加入1.0 mg/kg的17種鄰苯二甲酸酯的油脂提取液中，添加 5、10、25、50和100 mg PSA，結(jié)果（表2）表明，PSA用量在25 mg以上時(shí)，各鄰苯二甲酸酯類加標(biāo)回收率在 80%～110%之間的比例最高，均為 94%以上，考慮成本和凈化效果，確定 PSA用量為25 mg。

2.2.2 C18用量的優(yōu)化

考察PSA用量為25 mg，C18用量對(duì)凈化效果的影響，分別往 5 mL預(yù)先加入 1.0 mg/kg的17種鄰苯二甲酸酯的油脂提取液中，添加 2.5、5、10、25和 50 mg C18，結(jié)果（表 3）表明，C18用量在25 mg以上時(shí)，各鄰苯二甲酸酯類加標(biāo)回收率在 80%～110%之間的比例最高，均為94%以上，考慮成本和凈化效果，確定C18用量為25 mg。

表2 不同PSA用量對(duì)17種鄰苯二甲酸酯加標(biāo)回收率影響的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（n=3） %

表3 不同C18用量對(duì)17種鄰苯二甲酸酯加標(biāo)回收率影響的統(tǒng)計(jì)結(jié)果（n=3） %

2.3 方法的線性范圍、檢出限和定量限

分別移取 17種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.5.2）適量，以正己烷配制成濃度為0.0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、1.50、3.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，建立17種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)按3倍信噪比（S/N）和10倍信噪比（S/N）計(jì)算方法的檢出限和定量限，各鄰苯二甲酸酯的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表4。

2.4 加標(biāo)回收率和精密度

分別往花生油樣品中添加 3個(gè)濃度水平（0.5、1.0、5.0 mg/kg）的17種鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)添加濃度重復(fù)測定6次，計(jì)算添加回收率和測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。17種鄰苯二甲酸酯加標(biāo)回收率和精密度分別在76.8%～108.4%和1.10%～5.18%，結(jié)果見表5。

表4 17種鄰苯二甲酸酯回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表5 17種鄰苯二甲酸酯加標(biāo)回收率和精密度 %

續(xù)表5

2.5 市售花生油樣品測試

采用建立的方法對(duì)某市售花生油樣品進(jìn)行測試，市售花生油樣品總離子流圖見圖 4，檢測結(jié)果見表6。

圖4 市售花生油樣品總離子流色譜圖

表6 市售花生油樣品檢測結(jié)果 mg/kg

3 結(jié)論

花生油中鄰苯二甲酸酯類化合物可以以正己烷飽和乙腈提取，改進(jìn)的QuEChERS方法凈化，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測。

此方法檢測花生油中 DMP、DEP、DIBP、DBP、DMEP、BMPP、DEEP、DPP、DHXP、BBP、DBEP、DCHP、DEHP、DPhP、DNOP、DNP 和DAP17種鄰苯二甲酸酯類化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.02～3.0 mg/L濃度范圍內(nèi)各化合物相關(guān)系數(shù)（r）在0.999以上，檢出限（LOD）在0.01 ～0.02 mg/kg之間，定量限（LQD）在0.03 ～0.05 mg/kg之間。

DMP、DEP、DIBP、DBP、DMEP、BMPP、DEEP、DPP、DHXP、BBP、DBEP、DCHP、DEHP、DPhP、DNOP、DNP和 DAP17種鄰苯二甲酸酯類化合物在花生油樣品中添加水平為0.5、1.0和5.0 mg/kg時(shí)，平均加標(biāo)回收率和精密度分別在76.8%～108.4%和1.10%～5.18%范圍內(nèi)，方法回收率好、重現(xiàn)性穩(wěn)定。

本方法可快速、準(zhǔn)確測定花生油中17種鄰苯二甲酸酯類化合物。