蔡恩興

漳州市農(nóng)業(yè)檢驗監(jiān)測中心，福建 漳州 363000

吡唑醚菌酯是一種新型甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑(由曉和井樂剛，2015)，因其殺菌譜廣、殺菌活性高、內(nèi)吸性強(張梅鳳和呂秀亭，2012)，對植物病害有較好的防治效果(楊麗娟和柏亞羅，2012)?，g溪蜜柚Citrusmaxima(Burm.) Merr. cv. Guanxiyou是福建平和的主要經(jīng)濟作物，經(jīng)濟效益較高。近年來，隨著蜜柚種植規(guī)模的不斷擴大及單一化種植，蜜柚上的病害發(fā)生也日益突出，影響到蜜柚的品質(zhì)和產(chǎn)量。吡唑醚菌酯作為蜜柚病害防治的主要農(nóng)藥品種之一，被當(dāng)?shù)毓r(nóng)廣泛使用。

目前對吡唑醚菌酯的檢測方法和殘留代謝的研究主要集中在葡萄(李瑞娟等，2010)、杧果(劉艷萍等，2016)、蘋果(蘭豐等，2018)、辣椒(高志文等，2011)、鐵皮石斛(許振嵐等，2018)、花生(Zhangetal.，2012)、草莓(楊霄鴻等，2018)、香蕉(趙方方等，2015)等作物上，對蜜柚等柑橘類水果的研究報道較少。劉軍等(2014)、李福琴等(2017)分別建立了檢測柑橘中吡唑醚菌酯殘留量的方法，Lesueuretal.(2008)采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(high performance liquid chromatography-mass spectrometry, HPLC-MS)方法測定檸檬中吡唑醚菌酯等多種農(nóng)藥殘留，但是當(dāng)前尚沒有吡唑醚菌酯在蜜柚上的殘留檢測方法及殘留動態(tài)相關(guān)研究的報道。

水果套袋因具有減少病蟲害(王建武等，2003)、提高果實品質(zhì)(劉建海等，2003；藺經(jīng)等，2009)、降低農(nóng)藥殘留(陳合等，2006；劉蕾慶等，2011)等優(yōu)點而被廣泛推行。然而套袋對吡唑醚菌酯在蜜柚中的殘留影響并未見相關(guān)報道。因此，本研究通過試驗，確立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)快速檢測方法，對吡唑醚菌酯在蜜柚上的殘留動態(tài)進行分析，同時研究套袋和無套袋2種處理對蜜柚中吡唑醚菌酯殘留量的影響，旨在明晰吡唑醚菌酯使用的安全性及套袋對農(nóng)藥殘留及其消解規(guī)律的影響，為果農(nóng)合理使用農(nóng)藥及蜜柚產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器設(shè)備

供試作物：琯溪蜜柚。

試驗材料：250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油；吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度 99.4%，沈陽化工研究院)；乙腈、甲醇、甲酸(均為色譜純)；無水MgSO4、NaCl(均為分析純)；N-丙基乙二胺(PSA，德國CNW)。

儀器設(shè)備：T-18 basic ULTRA TURRAX 高速勻漿機(IKA，德國)；3-18K高速離心機(Sigma，德國)；DIONEX Ultimate 3000-Thermo TSQ Quantum Ultra EMR高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(ThermoFisher，美國)。

1.2 試驗設(shè)計

田間試驗于漳州市平和縣小溪鎮(zhèn)厝丘村蜜柚園中進行。參照NY/T 788—2004(中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，2004)設(shè)計田間試驗，試驗共設(shè)4個處理：2種施藥劑量(表1)，施藥后設(shè)套袋和無套袋2種處理。每處理重復(fù)3次，每個處理選取6株蜜柚；設(shè)清水噴霧的無套袋處理為空白對照(CK)。

表1 吡唑醚菌酯在蜜柚上的施藥及套袋處理Table 1 Spraying and bagging treatments of pyraclostrobin in C. maxima 'Guanxi miyou'

2018年7月8日，按常規(guī)方法對蜜柚整株進行均勻噴施農(nóng)藥(此時蜜柚已謝花約90 d)，采用1次施藥多次采樣的方法，施藥后2 d內(nèi)無降雨過程。施藥后待蜜柚果實表面的藥液完全干燥才進行套袋處理。采樣時間分別為施藥后約2 h(0 d，此時果實表面藥液已干)，1、3、7、15和30 d；取距地面約1.4 m處樹體中部位置，隨機對稱各采摘一個果實。采摘的蜜柚封裝于塑料袋中，及時帶回實驗室用勻漿機勻漿后分裝入潔凈容器中冷凍保存，并進行檢測。

1.3 分析方法

1.3.1 提取與凈化 參考蔡恩興(2017)建立的QuEChERS方法：稱取攪碎均勻的蜜柚全果樣品10 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入20.0 mL乙腈、4.0 g無水MgSO4和1.0 g NaCl，用高速勻漿機勻漿2 min，4500 r·min-1離心5 min，取上清液2.0 mL轉(zhuǎn)移至裝有0.10 g PSA和0.30 g無水MgSO4離心管中，渦旋1 min，過0.22 μm有機濾膜供HPLC-MS/MS檢測。

1.3.2 檢測條件 色譜柱：Atlantis T3 Column(100 mm×2.1 mm×3 μm)；流動相A為0.1 %甲酸水溶液，流動相B為甲醇；流速0.25 mL·min-1；進樣量為2 μL；保留時間為6.55 min；流動相采用梯度洗脫，具體見表2。

質(zhì)譜條件：電噴霧正離子源(ESI+)；離子噴霧電壓4000 V；霧化溫度270 ℃；鞘氣(N2)流速為3.62 L·min-1，輔助氣(N2)流速為5.38 L·min-1，碰撞氣(Ar)0.2 Pa。

表2 梯度洗脫條件Table 2 Gradient elution conditions

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

選擇電離(ESI+)模式，通過定量環(huán)進樣對吡唑醚菌酯質(zhì)譜檢測參數(shù)進行優(yōu)化。通過全掃描確定388 m·z-1為其母離子，選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM模式)進行二級質(zhì)譜自動優(yōu)化，分析其質(zhì)譜圖及碰撞能量，最終確定吡唑醚菌酯的質(zhì)譜檢測參數(shù)(表3)。

表3 質(zhì)譜檢測參數(shù)Table 3 Parameters of mass spectrometry

2.2 線性關(guān)系和檢出限

前處理采用QuEChERS方法，用提取凈化得到的空白蜜柚基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液并進樣分析，以吡唑醚菌酯色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)、對應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吡唑醚菌酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=60533x+148670，相關(guān)系數(shù)(r2)為0.9993，表明在1～500 μg·L-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以3和10倍信噪比計算檢出限和定量限，吡唑醚菌酯的檢出限和定量限分別為0.7和2 μg·kg-1。圖1為蜜柚中吡唑醚菌酯的SRM色譜圖。

圖1 蜜柚中吡唑醚菌酯的SRM色譜圖Fig.1 SRM chromatogram of pyraclostrobin in C. maxima 'Guanxi miyou'

2.3 添加回收試驗

稱取蜜柚空白樣品進行添加回收試驗，分別加入3個水平(2、50和1000 μg·kg-1)的吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，每個水平重復(fù)5次。按上述方法進行前處理和上機測定，試驗平均回收率為83.8%～105.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%～9.1%，由此表明，該方法測定吡唑醚菌酯殘留準(zhǔn)確度和精密度均較好，符合農(nóng)藥殘留分析的要求(中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，2004)。

2.4 殘留動態(tài)及消解規(guī)律

2.4.1 殘留動態(tài) 對吡唑醚菌酯在蜜柚中的殘留動態(tài)進行分析測定(表4)，2種施藥劑量處理的原始沉積量存在一定差異，推薦劑量(2000倍液)處理在蜜柚上的原始沉積量為0.5619～0.5952 mg·kg-1，而加倍劑量(1000倍液)處理為1.0732～1.1586 mg·kg-1。

在施藥后1、3、7、15和30 d分別進行采樣檢測，套袋處理的消解率分別為27.1%～27.3%、45.3%～50.8%、71.8%、90.1%～91.9%和98.3%～98.4%，而無套袋處理的消解率分別為14.4%～16.9%、47.0%～54.1%、73.5%～80.0%、91.2%～93.6%和98.8%～99.0%。在同樣的施藥劑量和采摘時間下，套袋處理的消解率略低于無套袋處理(1 d的結(jié)果反過來)，但在施藥后30 d，4種處理的消解率均大于98%，最終趨于一致。

表4 吡唑醚菌酯在蜜柚中的殘留消解動態(tài)Table 4 Residual degradation dynamics of pyraclostrobin in C. maxima 'Guanxi miyou'

2.4.2 消解動態(tài)及最終殘留 經(jīng)過回歸分析，吡唑醚菌酯的殘留消解動態(tài)(表5)符合一級動力學(xué)方程。套袋處理的半衰期(T1/2)為5.10～5.26 d，消解99%所需要的時間(T0.99)為33.8～34.9 d；無套袋處理的T1/2為4.48～4.79 d，T0.99為29.7～31.8 d。相同施藥劑量，套袋處理的半衰期略長于無套袋的半衰期。吡唑醚菌酯在蜜柚中的4種處理，相關(guān)系數(shù)(r)在0.9918～0.9957之間，消解系數(shù)(k)在0.1317～0.1546之間，說明吡唑醚菌酯在蜜柚上半衰期相對較短。施藥后65 d(此時蜜柚已成熟)測定吡唑醚菌酯的最終殘留量，結(jié)果(表5)顯示4種不同處理均未檢出吡唑醚菌酯殘留。

表5 吡唑醚菌酯在蜜柚中的消解動態(tài)方程Table 5 Degradation dynamics equation of pyraclostrobin in C. maxima 'Guanxi miyou'

3 討論

本試驗建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定蜜柚中吡唑醚菌酯殘留量分析方法，其中樣品前處理采用QuEChERS方法，同時優(yōu)化了HPLC-MS/MS的相關(guān)參數(shù)。該分析方法操作簡單，靈敏度較高，檢出限為0.7 μg·kg-1，定量限為2 μg·kg-1，添加回收率為83.8%～105.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%～9.1%，適用于蜜柚中吡唑醚菌酯的殘留測定。

吡唑醚菌酯在蜜柚中的殘留消解動態(tài)符合一級動力學(xué)方程，套袋處理的消解半衰期為5.10～5.26 d，無套袋處理的消解半衰期為4.48～4.79 d；相同施藥劑量下，套袋處理的半衰期略長于無套袋的半衰期，這可能與套袋后可以減少果實受外界環(huán)境影響有關(guān)，如光照、雨淋等(王建武等，2003)，減緩農(nóng)藥的殘留消解。吡唑醚菌酯在葡萄(李瑞娟等，2010)、辣椒(高志文等，2011)、草莓(楊霄鴻等，2018)和杧果(劉艷萍等，2016)植株中的殘留消解半衰期分別為2.9～4.7、3.7～3.8、5.2～10.8和8.0～11.0 d，而在蘋果(蘭豐等，2018)、香蕉(趙方方等，2015)和鐵皮石斛(許振嵐等，2018)中的消解半衰期則較長，分別為13.5～23.6、16.7～17.2和38.1 d，這說明在不同植株間吡唑醚菌酯殘留消解存在差異，上述植株除鐵皮石斛外，其他消解半衰期均小于30 d。

GB 2763—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》(中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會等，2019)規(guī)定吡唑醚菌酯在蜜柚上的最大殘留限量(maximum residue limit, MRL)為2 mg·kg-1，按照這個MRL計算，吡唑醚菌酯在蜜柚上的使用無安全間隔期問題。本研究的套袋方式與其他研究有所不同，已有的研究(陳合等，2006； 劉建海等，2003; 劉蕾慶等，2012)采用先套袋再多次施藥，本研究結(jié)合當(dāng)?shù)孛坭植∠x害防治方式，采用1次施藥多次采樣檢測的方法。先充分施藥再進行套袋，不僅可以加快蜜柚果實轉(zhuǎn)色上市，還可以減少農(nóng)藥的使用，確保吡唑醚菌酯在蜜柚上使用具有安全性。