潘喬丹 黃元河

【摘 要】 目的：探討赤蒼藤醇提物對(duì)高尿酸血癥模型大鼠血管內(nèi)皮保護(hù)作用與機(jī)制。方法：將雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、苯溴馬隆組、赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑組，共5個(gè)組。以腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇灌胃法建立大鼠高尿酸血癥模型，正常組和模型組給予生理鹽水，其余各組分別給予赤蒼藤醇提物中、低劑量，苯溴馬隆，連續(xù)給藥28d。末次給藥后取血，檢測(cè)大鼠血清尿酸（SUA）、黃腺嘌呤氧化酶（XOD）、肌酐、血管內(nèi)皮素（ET-1）、一氧化氮（NO）含量。結(jié)果：與正常組相比較，模型組大鼠血清SUA、XOD、肌酐、ET-l 含量顯著升高（P<0.05），NO含量明顯降低（P<0.05）;與模型組比較，赤蒼藤醇提物中、低劑量組的血清UA、肌酐、XOD、ET-1含量均顯著降低（P<0.05），NO含量均顯著升高（P<0.05）。結(jié)論：赤蒼藤能夠抑制XOD的活性，降低高尿酸血癥大鼠血清尿酸含量，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血管內(nèi)皮舒縮功能有保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】 赤蒼藤;高尿酸血癥;一氧化氮;內(nèi)皮素;大鼠

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）15-0013-03

Abstract：Objective To explore the protective effect and mechanism of the ethanol extract of Erythropalum Scandens Bl.on the vascular endothelium in the rat model of hyperuricemia. Methods Male SD rats were randomly divided into five groups： normal group， modle group， benzbromarone group， the middle-dose groug and low-dose group of the ethanol extract of Erythropalum Scandens. The rat model of hyperuricemia was established by intragastric administration of adenine with ethambutol hydrochloride， the rats in control group and modle group were given with saline， the other groups were treated with benzbromarone， the medium and low dose ethanol extract of Erythropalum scandens， and continued for 28 days. After last administration， the blood sample of rats were collected to test the contest of serum uric acid（SUA）， yellow adenine oxidase （XOD）， creatinine， endothelin-1 （ET-1） and nitric oxide （NO）.Results Compared with normal group， the serum contents of SUA， XOD， creatinine and ET-1 increased significantly in model group（P<0.05）and level of NO decreased（P<0.05）. Compared with the model group， the serum contents of UA， XOD， creatinine and ET-1decreased significantly（P<0.05） and level of NO increased（P<0.05） in the middle-dose group and low-dose group. Conclusion Theethanol extract of Erythropalum scandens could inhibit XOD activity， reduce SUA， and protect vascular endothelium of rats with hyperuricemia.

Keywords：Erythropalum scandens;Hyperuricemia;Nitric Oxide;Endothelin;Rats

高尿酸血癥（Hyperuricemia，HUA）是由遺傳因素與環(huán)境因素相互作用引起，嘌呤代謝的終產(chǎn)物尿酸 （Uricacid，UA） 在體內(nèi)發(fā)生代謝障礙，出現(xiàn)血中尿酸濃度異常增高的代謝性疾病。HUA不僅是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、慢性痛風(fēng)石疾病及尿酸性腎病最重要的生化基礎(chǔ);而且還是多種血管疾病的危險(xiǎn)因素，與多種疾病如腦卒中、高血壓、糖尿病、冠心病、心力衰竭、慢性腎臟疾病等密切相關(guān)[1]。近期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血尿酸增加，多余的尿酸會(huì)介導(dǎo)氧化應(yīng)激，減少NO的產(chǎn)生， 導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂;當(dāng)尿酸濃度過(guò)大時(shí)候尿酸鹽以結(jié)晶的形式沉積于血管壁引發(fā)炎癥，最終導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能受損[2]。而血管內(nèi)皮功能受損是冠心病、高血壓、心力衰竭等疾病的重要始動(dòng)因素，在心血管疾病中起重要作用[3]。近期研究發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥是導(dǎo)致心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[4]。因此對(duì)高尿酸血癥患者，減少血尿酸的增加，就可以較好地保護(hù)血管內(nèi)皮，減少心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。赤蒼藤（Erythropalum scandens Bl.）為鐵青樹(shù)科植物，其莖入藥，化學(xué)成分主要有蘇門(mén)樹(shù)脂酸、桂皮酸松柏醇酯、酚類(lèi)及三萜類(lèi)化合物[5]，具清熱利濕、祛風(fēng)活血的功效，用于治療風(fēng)濕骨病、肝膽濕熱、尿急、尿痛、小便不利等癥[6]。本研究課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)了赤蒼藤能抑制血尿酸的增加，對(duì)小鼠高尿酸血癥模型有較好的治療作用[7]。本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上采用較為常用的腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇灌胃法建立大鼠高尿酸血癥（HUA）模型[8-10]，通過(guò)對(duì)血清尿酸 （SUA）、一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素-1 （ET-1）、肌酐、黃嘌呤氧化酶（XOD）的變化研究，探討赤蒼藤醇提物對(duì)高尿酸血癥模型大鼠血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠，體重190～230g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（桂）2014-0010。

1.2 試劑與藥物 腺嘌呤（Aladdin公司，批號(hào)：20170724）;苯溴馬隆片（常州康普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1011013）;鹽酸乙胺丁醇片（廣東臺(tái)城制藥股份有限公司，批號(hào)：20170201）;尿酸測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20170609）;黃嘌呤氧化酶（XOD）測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20170725）;肌酐測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20170717）;一氧化氮（NO）測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20170821）;內(nèi)皮素-1 （ET-1）測(cè)試盒（上海容創(chuàng)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20170504）;赤蒼藤（Erythropalum scandens Bl.）莖粉末（廣西赤蒼藤生物科技有限責(zé)任公司）。

1.3 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）;酶標(biāo)儀（Thermo公司）;T6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.4 藥物溶液配制 赤蒼藤醇提物：稱(chēng)取赤蒼藤粉末100g，用75%乙醇加熱回流提取，抽濾共3次，將所得濾液混合后，濃縮干燥得浸膏。使用浸膏配制赤蒼藤醇提物中劑量和低劑量組，按照生藥量計(jì)算，濃度分別為200mg/mL和100mg/mL;腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇混懸液：稱(chēng)取腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇適量，加蒸餾水定容，配置為腺嘌呤20mg/mL+鹽酸乙胺丁醇50mg/mL的混合溶液;苯溴馬隆溶液：稱(chēng)取苯溴馬隆適量，加生理鹽水定容配置為2mg/mL苯溴馬隆溶液。

1.5 動(dòng)物造模及給藥 SD雄性大鼠HUA模型參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-10]的方法，隨機(jī)抽取SD大鼠50只，分為5組，每組10只，分別為正常組、模型組、苯溴馬隆組、赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組。除正常組外，大鼠用腺嘌呤和鹽酸乙胺丁醇混懸液灌胃法造模，每只大鼠按腺嘌呤100mg/kg+鹽酸乙胺丁醇250mg/kg灌胃;正常組和模型組大鼠分別給予3mL 0.9%氯化鈉溶液;苯溴馬隆組，每只大鼠按10mg/kg的苯溴馬隆溶液灌胃。赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組，每只大鼠按1000mg/kg和500mg/kg的赤蒼藤醇提物溶液灌胃;連續(xù)給藥28d。每周稱(chēng)體重2次，根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量。

1.6 生化指標(biāo)檢測(cè) 末次給藥2h后，大鼠尾靜脈采集血液，取血清，采用放射免疫法測(cè)定血清ET-l的含量，采用紫外分析法測(cè)定血清尿酸 （SUA）、黃嘌呤氧化酶（XOD）、NO、肌酐的含量，均按試劑盒說(shuō)明檢測(cè)。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)高尿酸血癥模型大鼠SUA、XOD和血清肌酐的影響 與正常組比較，模型組SUA、XOD、肌酐水平顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組大鼠血清SUA含量、XOD活力和肌酐含量均明顯降低（P<0.05），苯溴馬隆組SUA含量明顯降低（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)高尿酸血癥模型大鼠ET-1、NO含量的影響 與正常組比較，模型組ET-l 含量顯著升高（P<0.05），NO含量明顯降低（P<0.05）。與模型組相比，赤蒼藤醇提物中劑量組和低劑量組大鼠血清ET-1含量均明顯降低（P<0.05，P<0.05），血清NO含量均顯著升高（P<0.05），苯溴馬隆組大鼠血清ET-1含量明顯降低（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

在正常生理活動(dòng)時(shí)，血管內(nèi)皮具有血管屏障、內(nèi)分泌功能、抗血栓、調(diào)節(jié)血管張力等多種生理功能。血管的張力是由血管擴(kuò)張物質(zhì)和血管收縮物質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)。NO是血管內(nèi)皮釋放的重要血管舒張因子，ET-1是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管收縮因子[11]。當(dāng)NO和ET-1處于不平衡狀態(tài)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，引發(fā)心血管疾病和動(dòng)脈粥樣硬化[12]。尿酸濃度增高時(shí)，部分尿酸鹽形成結(jié)晶沉積于管壁，造成血管內(nèi)皮的損傷，還能介導(dǎo)血管炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，致使NO和ET-1不平衡，導(dǎo)致血管收縮功能亢進(jìn)[13];尿酸和尿酸鹽結(jié)晶還會(huì)在腎臟沉積，引起氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)等，導(dǎo)致腎臟功能受損[14]。

本實(shí)驗(yàn)選擇NO、ET-1作為評(píng)價(jià)血管內(nèi)皮功能的指標(biāo)，選擇肌酐作為評(píng)價(jià)腎臟功能的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組相比，苯溴馬隆能顯著降低SUA的含量（P<0.05），但是對(duì)高尿酸血癥導(dǎo)致的血清肌酐含量升高和NO水平減低的抑制作用不顯著，說(shuō)明苯溴馬隆可以較好地降低血尿酸，但對(duì)血管內(nèi)皮的損傷和腎損傷保護(hù)作用不顯著;與模型組相比，赤蒼藤醇提物能夠顯著抑制XOD黃嘌呤氧化酶的活性（P<0.05），降低SUA的含量（P<0.05），顯著抑制高尿酸血癥導(dǎo)致肌酐和ET-l 含量升高以及NO水平降低，說(shuō)明赤蒼藤醇提物對(duì)高尿酸血癥導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷和腎損傷具有較好的保護(hù)作用。

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