汪雪敏,苗白鴿,彭艷瓊,*

(1.云南大學(xué)生態(tài)學(xué)與環(huán)境學(xué)院,昆明 650091;2.中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園,云南勐臘 666303)

有花植物的有性生殖依賴一定的媒介傳授花粉(黃雙全,2008)，除少數(shù)為風(fēng)媒、水媒外，87.5%的被子植物由動(dòng)物傳粉(Ollerton,2017)。全球傳粉動(dòng)物約有35萬種，其中昆蟲占80%～85%，是種類最多的傳粉動(dòng)物(張立微和張紅玉,2015)。昆蟲在為植物傳授花粉的同時(shí)，植物也為昆蟲提供食物和生長場所(欽俊德和王琛柱,2001)。絕大多數(shù)昆蟲都是在取食花粉、花蜜的過程中，體表、口器粘附花粉，被動(dòng)地為植物完成授粉(黃雙全和郭友好，2000)；僅有約2%的傳粉昆蟲具有主動(dòng)為植物傳粉的行為，其為植物主動(dòng)傳粉并且依賴植物繁衍后代，與植物建立高度專性的互惠共生關(guān)系，榕樹與傳粉榕小蜂就是其中經(jīng)典的案例(Cooketal.,2004;Herreetal.,2008)。

榕屬Ficus在植物界具有獨(dú)特的隱頭花序(syconium)結(jié)構(gòu)(通稱榕果)，只能依賴體長2～3 mm的專性傳粉榕小蜂從頂生苞片處鉆入甕型的果腔內(nèi)傳粉，同時(shí)榕小蜂把卵產(chǎn)于部分雌花子房中(Janzen,1979;Weiblen,2002)。這種繁殖上的互惠共生關(guān)系，至今已協(xié)同演化了7 500萬年(Cruaudetal.,2012)。已知全世界有約800種榕樹、500多種傳粉榕小蜂，其中2/3的榕-蜂種對(duì)是主動(dòng)傳粉類型，僅1/3的種對(duì)為被動(dòng)傳粉類型(Kjellbergetal.,2001;Jousselinetal.,2003;Wangetal.,2014)。主動(dòng)傳粉類型中，榕樹及榕小蜂均演化出相互適應(yīng)的傳粉結(jié)構(gòu)與行為，表現(xiàn)為榕果內(nèi)雄花數(shù)量少，花藥胚珠比小于0.16，成熟花粉囊不會(huì)自動(dòng)破裂散粉；傳粉榕小蜂前足基節(jié)上有花粉刷，中胸腹板兩側(cè)有一對(duì)發(fā)達(dá)的花粉筐，并且配合有主動(dòng)傳粉行為。而被動(dòng)傳粉的類型，榕果內(nèi)雄花較多，花藥胚珠比大于0.21，成熟花粉囊自動(dòng)破裂散粉，其傳粉榕小蜂的傳粉結(jié)構(gòu)和行為消失或退化，依靠體壁粘附花粉進(jìn)行被動(dòng)傳粉(Kjellbergetal.,2001;Wangetal.,2014)。

傳粉榕小蜂成蟲壽命通常為1～2 d(Dunnetal.,2008;Zhangetal.,2014)，主動(dòng)傳粉的榕小蜂進(jìn)入雌花期榕果內(nèi)既要傳粉、也要產(chǎn)卵。榕小蜂在有限的存活時(shí)間內(nèi)如何在傳粉和產(chǎn)卵之間進(jìn)行合理分配，是長期被關(guān)注但懸而未解的問題。Galil和Eisikowitch(1974)報(bào)道，榕小蜂的傳粉行為發(fā)生在每一次產(chǎn)卵行為末期至小蜂從雌花花柱拔出產(chǎn)卵器之前。也有學(xué)者認(rèn)為，榕小蜂進(jìn)入雌花期果腔內(nèi)首先傳粉，同時(shí)標(biāo)記適宜產(chǎn)卵的柱頭，傳粉結(jié)束后在標(biāo)記過的雌花上產(chǎn)卵(楊大榮等,2001)。這些研究都基于顯微鏡下直接的跟蹤觀察，研究條件有限。隨著技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在顯微視頻技術(shù)既能夠顯微觀察、又可以連續(xù)記錄傳粉榕小蜂在果腔內(nèi)的行為。本研究選擇雌雄同株榕樹聚果榕，采用顯微視頻設(shè)備，清晰觀察、連續(xù)記錄傳粉榕小蜂在雌花期果內(nèi)搜索、產(chǎn)卵和傳粉的行為，并進(jìn)行相關(guān)特征測量及控制性引蜂試驗(yàn)，擬回答如下問題：(1)傳粉榕小蜂產(chǎn)卵器長度與雌花花柱長度的匹配程度；(2)雌花期榕果內(nèi)傳粉榕小蜂如何在搜索、產(chǎn)卵及傳粉行為之間分配時(shí)間；(3)傳粉榕小蜂個(gè)體大小與孕卵量及攜粉量之間的關(guān)系；(4)傳粉榕小蜂不同狀態(tài)和工作時(shí)間下的產(chǎn)卵和傳粉效率及最終繁殖榕小蜂的后代和榕樹種子數(shù)量的差異。

1 材料與方法

1.1 研究地點(diǎn)

研究地點(diǎn)位于云南省西雙版納傣族自治州勐臘縣勐侖鎮(zhèn)，中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園(21°54′N，101°46′E，海拔580 m)。該地處東南亞熱帶北緣，屬于熱帶季風(fēng)型氣候。年平均氣溫21.8℃，年平均降水量1 493 mm。干濕季分明，大部分降水(84%)發(fā)生在5-10月，極少降水(16%)發(fā)生在11月至翌年4月(Caoetal.,2006)。

1.2 觀察的榕樹和榕小蜂

聚果榕Ficusracemosa隸屬于蕁麻目(Urticales)?？?Moraceae)榕屬Ficus聚果榕亞屬Sycomorus，多年生喬木，雌雄同株，榕果多聚生于老莖瘤狀短枝上。聚果榕廣泛分布于喜馬拉雅南麓至澳大利亞北部熱帶地區(qū)，近期分子證據(jù)顯示，其整個(gè)分布區(qū)共有4種傳粉榕小蜂，其中分布于西雙版納及周邊中南半島區(qū)域的是一種尚未描述的傳粉榕小蜂——一種櫛顎榕小蜂Ceratosolensp.(Bainetal.,2016)。該蜂隸屬于膜翅目(Hymenoptera)榕小蜂科(Agaonidae)櫛顎榕小蜂屬Ceratosolen，雌雄二型，雌蜂有翅，前足基節(jié)上具花粉刷，中胸腹板兩側(cè)有一對(duì)發(fā)達(dá)的花粉筐，主動(dòng)為聚果榕傳粉；雄蜂無翅，眼及觸角退化(Weiblen,2002)。

榕果內(nèi)雌雄花異熟。雌花先熟，此時(shí)稱為雌花期，傳粉榕小蜂經(jīng)苞片口進(jìn)入果腔傳粉和產(chǎn)卵。經(jīng)過一段時(shí)間的發(fā)育后，雄花成熟到達(dá)雄花期，榕小蜂后代同步發(fā)育到成蟲期，采集花粉后離開雄花期果，尋找下一株處于雌花期的榕樹，開始新的生活史循環(huán)(Gaili and Eisikowitch,1968)。

1.3 花柱長度及榕小蜂產(chǎn)卵器長度測量

選取2株處于雌花期的聚果榕，每株樹采集雌花期果15果，每果隨機(jī)取4朵雌花，共120朵，借助安裝有測微尺的體視顯微鏡(NTX-3C)測量花柱長度。此外，再選取2株處于雄花期的聚果榕，每株樹采集雄花期果30果，用120篩目的紗網(wǎng)袋單果分裝，待榕小蜂自然羽化出蜂后，每果隨機(jī)取1頭小蜂，2株樹共取60頭，在體視鏡下解剖榕小蜂，拉出并測量其產(chǎn)卵器長度。

1.4 榕小蜂搜索、產(chǎn)卵及傳粉行為觀察

選取2株剛結(jié)果的聚果榕，用紗網(wǎng)袋對(duì)榕果進(jìn)行套袋隔離，排除非傳粉小蜂的干擾。當(dāng)榕果發(fā)育至雌花期，打開紗網(wǎng)袋，為避免蜂夾死于苞片到達(dá)不了果腔，每個(gè)果引入2頭榕小蜂，進(jìn)果30 min后，及時(shí)采摘進(jìn)蜂果，帶回實(shí)驗(yàn)室，借助可連接電腦錄像的Digital Microscope(AM4115T-CFVW)，觀察榕小蜂在果腔內(nèi)的搜索、產(chǎn)卵和傳粉行為，同時(shí)錄制視頻，記錄并定量每頭小蜂的任意3次各行為所持續(xù)時(shí)間。每株樹觀察10個(gè)進(jìn)蜂果，2株樹共觀察20個(gè)果，共計(jì)20頭蜂。

1.5 榕小蜂個(gè)體大小、孕卵量及攜粉量測定

當(dāng)榕果發(fā)育至雄花期時(shí)，每株樹采集30果，用紗網(wǎng)袋單果分裝，待榕小蜂自然羽化后，每果隨機(jī)取1頭小蜂，2株樹共取60頭蜂，在體視鏡下解剖，測量其頭寬，用于代表小蜂個(gè)體大小(Liuetal.,2011)；解剖腹部卵巢，計(jì)數(shù)雙側(cè)卵巢中的孕卵量(Dunnetal.,2011;徐睿等,2016)；用解剖針移除胸部的雙翅及3對(duì)足，保留花粉筐位置，用超聲波儀振破花粉筐，散落出花粉，然后用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(Multisizer 3)計(jì)數(shù)花粉量(劉明新等,2017)。

1.6 榕小蜂不同狀態(tài)及工作時(shí)間下卵巢中剩余卵量及花粉筐中剩余花粉量統(tǒng)計(jì)

當(dāng)榕果發(fā)育到雌花期，每果控制引入1頭榕小蜂，待榕小蜂完全進(jìn)入苞片后套袋隔離以防其他小蜂進(jìn)入，并掛上記錄進(jìn)蜂時(shí)間的標(biāo)簽，共計(jì)引入蜂120果。榕小蜂進(jìn)入榕果后6 h，先采集30個(gè)進(jìn)蜂果，帶回實(shí)驗(yàn)室，取出果腔中的榕小蜂，借助體視顯微鏡解剖、計(jì)數(shù)其卵巢中剩余卵量，并參照1.5節(jié)的方法同步計(jì)數(shù)花粉筐中剩余花粉量。此外，榕小蜂進(jìn)果后24 h，再分別采集30個(gè)進(jìn)蜂果，同樣的方法計(jì)數(shù)榕小蜂卵巢中剩余卵量和花粉筐中剩余花粉量。

1.7 雄花期傳粉榕小蜂后代及種子數(shù)量統(tǒng)計(jì)

1.6節(jié)中單果控制引蜂試驗(yàn)剩余的60個(gè)進(jìn)蜂果，其中30果在傳粉榕小蜂進(jìn)入榕果6 h后，用注射器從苞片口往果腔中注入0.1 mL濃度為0.05%的噻蟲·高氯氟殺蟲劑，預(yù)試驗(yàn)該濃度的殺蟲劑能及時(shí)殺死榕小蜂但不影響榕果正常發(fā)育(Rajaetal.,2008);另外30果作為榕小蜂進(jìn)果產(chǎn)卵、傳粉24 h的樣本，榕小蜂進(jìn)入榕果后24 h基本奄奄一息快死亡，榕小蜂進(jìn)果后套上紗網(wǎng)袋，讓其自然發(fā)育。當(dāng)試驗(yàn)榕果進(jìn)入雄花期時(shí)，及時(shí)采摘，單果分裝于紗網(wǎng)袋中。待榕小蜂自然羽化出蜂后，統(tǒng)計(jì)每個(gè)榕果內(nèi)榕小蜂后代數(shù)量和榕果種子數(shù)量。6 h及24 h的試驗(yàn)果最終分別獲得7個(gè)和18個(gè)果的樣本量。

1.8 數(shù)據(jù)分析

運(yùn)用Excel計(jì)算聚果榕雌花花柱長度，其傳粉榕小蜂產(chǎn)卵器長度、頭寬、孕卵量、攜粉量，以及單果內(nèi)榕小蜂后代及種子數(shù)量(mean±SE)。由于數(shù)據(jù)不呈正態(tài)分布，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)比較聚果榕雌花花柱長度與榕小蜂產(chǎn)卵器長度的差異。采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)比較榕小蜂搜索、產(chǎn)卵及傳粉各行為之間的差異，并比較榕小蜂在不同狀態(tài)及工作時(shí)間后剩余卵量和花粉量，如存在顯著差異則用Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。采用Pearson相關(guān)分析比較榕小蜂個(gè)體大小與孕卵量、攜粉量的相關(guān)性。采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)比較榕小蜂進(jìn)果后6 h與24 h最終繁殖的榕小蜂子代數(shù)量差異，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(正態(tài)分布)比較樹間雌花花柱長度差異，以及相同條件下榕果最終繁殖的種子數(shù)量差異。所有的數(shù)據(jù)分析采用R 3.6.1統(tǒng)計(jì)軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 聚果榕傳粉榕小蜂產(chǎn)卵器長度與花柱長度的匹配程度

聚果榕的雌花花柱長度范圍為0.70～2.45 mm，呈單峰分布，樹間存在顯著差異(t檢驗(yàn)：t=-9.50,df=118,P<0.01)。相比較，其傳粉榕小蜂的產(chǎn)卵器長度范圍在1.56～2.02 mm之間，結(jié)果顯示花柱長度與榕小蜂產(chǎn)卵器長度有顯著差異(Mann-WhitneyU:P<0.01)(圖1)。從兩者的匹配程度看，榕小蜂產(chǎn)卵器長1.83±0.014 mm(N=60)，長于雌花花柱長度(1.47±0.036 mm)(N=120)，榕小蜂平均可以利用90.83%雌花產(chǎn)卵。此外，雌花花柱長度的變異(CV=0.27)比榕小蜂產(chǎn)卵器長度的變異(CV=0.06)大，表明部分長花柱的雌花不能被榕小蜂產(chǎn)卵。

圖1 聚果榕雌花花柱長度和榕小蜂(Ceratosolen sp.)產(chǎn)卵器長度的頻次分布Fig.1 Frequency distribution of style length of female flowers and ovipositor length of fig wasps (Ceratosolen sp.) in Ficus racemosaA:樣樹1 Tree 1;B:樣樹2 Tree 2.

2.2 聚果榕雌花期榕小蜂搜索、產(chǎn)卵及傳粉行為

在聚果榕的雌花期，榕小蜂進(jìn)入榕果后，其產(chǎn)卵器從雌花柱頭凹陷處沿花柱插入子房，搜索產(chǎn)卵位點(diǎn)。找到合適的產(chǎn)卵位點(diǎn)后，榕小蜂腹部下沉，產(chǎn)卵于雌花子房的珠被與珠心之間，產(chǎn)卵后拔出產(chǎn)卵器，再搜索下一個(gè)產(chǎn)卵位點(diǎn)。當(dāng)卵巢中孕育的卵基本產(chǎn)完，榕小蜂才開始為聚果榕傳粉。傳粉行為表現(xiàn)為：前足積極運(yùn)動(dòng)，基節(jié)上的花粉刷從中胸腹板兩側(cè)的花粉筐中刷出花粉。傳粉行為與搜索行為交替進(jìn)行，或連續(xù)多次傳粉，直至榕小蜂死亡。

榕小蜂在聚果榕雌花期果內(nèi)的搜索時(shí)間平均為26.57±1.74 s(N=120)，產(chǎn)卵用時(shí)46.07±1.35 s(N=120)，傳粉用時(shí)1.98±0.09 s(N=120)；三者之間時(shí)間分配存在極顯著差異(H=270.51,P<0.01)(圖2)。雖然兩株樹的觀察結(jié)果存在一定差異，但總體規(guī)律一致，說明榕小蜂在雌花期榕果內(nèi)的搜索、產(chǎn)卵及傳粉行為有較穩(wěn)定的模式。

圖2 聚果榕雌花期榕小蜂(Ceratosolen sp.)在隱頭花序內(nèi)搜索(A,D)、產(chǎn)卵(B,E)及傳粉(C,F)行為的時(shí)間分配Fig.2 Time allocation of searching (A,D),oviposition (B,E) and pollination (C,F) behaviors of fig wasps (Ceratosolen sp.) in the receptive female figs of Ficus racemosaA,B,C:樣樹1 Tree 1;D,E,F:樣樹2 Tree 2.

2.3 聚果榕傳粉榕小蜂個(gè)體大小與孕卵量、攜粉量的關(guān)系

聚果榕傳粉榕小蜂個(gè)體大小(頭寬)平均為0.44±0.003 mm(N=56)，剛離開雄花期果的雌蜂卵巢中孕卵量為289±4.74粒(N=56)，花粉筐中攜帶的花粉量為1 887±122.72粒(N=56)。分析結(jié)果顯示，榕小蜂個(gè)體大小與孕卵量之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.60,P<0.01)(圖3:A)，即個(gè)體大的榕小蜂孕卵量更多。相比之下，榕小蜂個(gè)體大小與攜粉量相關(guān)性不顯著(r=0.33,P=0.06)(圖3:B)。同時(shí)，榕小蜂孕卵量與攜粉量之間也沒有顯著相關(guān)性(r=0.32,P=0.06)，兩株樹間的測量結(jié)果支持一致性的結(jié)論。

圖3 聚果榕傳粉榕小蜂(Ceratosolen sp.)個(gè)體大小與其孕卵量(A)及攜粉量(B)的關(guān)系Fig.3 Relationship between the body size of fig wasps (Ceratosolen sp.) and the number of eggs (A) and the number of pollen grains (B) in Ficus racemosa

2.4 聚果榕傳粉榕小蜂在不同狀態(tài)及雌花期不同工作時(shí)間下產(chǎn)卵和傳粉差異

傳粉榕小蜂雌蜂剛離開雄花期果時(shí)，卵巢中孕卵量為230±6.62粒(N=23)(圖4:A)，花粉筐中攜粉量為2 190±185.69粒(N=23)(圖4:B)。當(dāng)進(jìn)入雌花期榕果后6 h，其卵巢中剩余卵量為11±2.53粒(N=22)，與剛離開雄花期果的雌蜂相比，卵量顯著減少(P<0.01)(圖4:A)；其花粉筐中花粉量為1 783±158.04粒(N=22)，變化不顯著(P=0.14)(圖4:B)。結(jié)果表明聚果榕傳粉榕小蜂在進(jìn)果6 h內(nèi)主要執(zhí)行產(chǎn)卵，可產(chǎn)下孕卵量的95.22%。至進(jìn)果后24 h，榕小蜂卵巢中的卵僅剩8±5.18粒(N=15)(圖4:A)，與進(jìn)果6 h的雌蜂相比，剩余卵量無顯著變化(P=0.56)；花粉筐中花粉量則顯著減少至422±60.18粒(N=15)(P<0.01)(圖4:B)，說明聚果榕傳粉榕小蜂在進(jìn)果后的第6-24小時(shí)里主要執(zhí)行傳粉，在此期間產(chǎn)卵較少。與剛羽化的榕小蜂相比，在雌花期果內(nèi)工作24 h后，榕小蜂卵巢中剩余卵量和攜粉量均顯著減少(卵量：P<0.01；攜粉量：P<0.01)，最終可產(chǎn)完孕卵量的96.52%，傳完攜粉量的80.73%，總體顯示聚果榕傳粉榕小蜂在雌花期榕果內(nèi)的產(chǎn)卵及傳粉行為主動(dòng)、完成高效。

圖4 聚果榕傳粉榕小蜂進(jìn)果不同時(shí)間后卵巢中卵量(A)及花粉筐中花粉量(B)Fig.4 Numbers of eggs in the ovaries (A) and pollen grains in the pollen pockets (B) of fig wasps (Ceratosolen sp.) entered the receptive figs of Ficus racemosa for different time圖中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。柱上不同小寫字母示差異顯著(P<0.05,Kruskal-Wallis檢驗(yàn))。Data in the figure are mean±SE.Different small letters above bars indicate significant difference (P<0.05,Kruskal-Wallis test).

2.5 聚果榕雄花期傳粉榕小蜂子代數(shù)量及種子繁殖差異

傳粉榕小蜂進(jìn)入雌花期榕果內(nèi)工作6 h后，雄花期最終繁殖小蜂后代221±11.56頭(N=7)，榕樹種子23±6.40粒(N=7)，榕小蜂后代數(shù)量顯著多于榕樹種子數(shù)量。相比之下，榕小蜂在雌花期榕果內(nèi)工作24 h后，雄花期最終繁殖小蜂后代195±17.34頭(N=18)，榕樹種子983±118.87粒(N=18)，繁殖的榕樹種子數(shù)量顯著多于榕小蜂后代數(shù)量(圖5)。榕小蜂產(chǎn)卵6 h與24 h相比，最終繁殖的后代數(shù)量之間沒有顯著差異(Mann-WhitneyU:P=0.88)；但榕小蜂傳粉24 h的榕果所繁殖的種子數(shù)量比傳粉6 h的榕果所繁殖的種子數(shù)量顯著多(t檢驗(yàn):t=-8.07,df=17.10,P<0.01)。引蜂試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)聚果榕傳粉榕小蜂在進(jìn)入榕果的前6 h基本完成產(chǎn)卵工作，之后的6-24 h則主動(dòng)為榕樹傳粉以繁殖種子。

圖5 聚果榕傳粉榕小蜂進(jìn)果后不同時(shí)間段繁殖的榕小蜂子代數(shù)量(A)及榕樹種子數(shù)量(B)Fig.5 Numbers of wasp offspring (A) and fig seeds (B) produced by fig wasps (Ceratosolen sp.) entered the receptive figs of Ficus racemosa for different time圖中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。柱上不同小寫字母示差異顯著(P<0.05)(榕小蜂子代數(shù)量:Mann-Whitney U檢驗(yàn);榕樹種子數(shù)量:獨(dú)立樣本t檢驗(yàn))。Data in the figure are mean±SE.Different small letters above bars indicate significant difference in the number of wasp offspring by Mann-Whitney U test and the number of fig seeds by independent samples t-test (P<0.05).

3 討論

榕樹和榕小蜂都必須利用榕果內(nèi)的雌花資源來完成繁殖，從這個(gè)角度來說，它們二者之間存在繁殖利益沖突，榕樹和榕小蜂之間權(quán)衡繁殖利益是維持該互惠共生體系穩(wěn)定的關(guān)鍵。短產(chǎn)卵器假說(short-ovipositor-length hypothesis)認(rèn)為，榕果內(nèi)的雌花有短花柱和長花柱之分，由于短花柱雌花的花柱長度與傳粉榕小蜂的產(chǎn)卵器長度相匹配，所以傳粉榕小蜂將卵產(chǎn)于短花柱雌花的子房中以繁殖自身后代，而長花柱雌花則被傳粉受精發(fā)育成為種子(Ganeshaiahetal.,1995)。但是相關(guān)的研究顯示，不同的榕樹及其傳粉榕小蜂系統(tǒng)存在差異，部分榕-蜂系統(tǒng)中榕小蜂產(chǎn)卵器長度足以到達(dá)大多數(shù)雌花子房產(chǎn)卵(Nefdt and Compton,1996)。本研究中聚果榕傳粉榕小蜂的產(chǎn)卵器比90%的雌花花柱長，與雌雄同株鈍葉榕、高榕及它們的傳粉榕小蜂共生體系相似，傳粉榕小蜂能產(chǎn)卵于絕大多數(shù)雌花子房中(張媛等,2010;Chenetal.,2013)。此外，聚果榕雌花期，雌花柱頭間緊密粘連，具有聯(lián)合柱頭平臺(tái)(synstigma)，這有利于花粉管側(cè)向生長，提高傳粉和受精效率(Jousselin and Kjellberg,2001;Jousselinetal.,2003;Teixeiraetal.,2018)。本研究發(fā)現(xiàn)傳粉榕小蜂進(jìn)入榕果后，搜索雌花，優(yōu)先產(chǎn)卵，每次平均產(chǎn)卵用時(shí)46 s，前6 h小蜂主要執(zhí)行產(chǎn)卵工作，之后集中傳粉，其行為主動(dòng)，連貫高效，單次傳粉僅用時(shí)2 s。這一結(jié)果主要得益于先進(jìn)顯微視頻設(shè)備的運(yùn)用，第一次展示了雌雄同株榕樹雌花期果內(nèi)榕小蜂傳粉、產(chǎn)卵的行為及時(shí)間分配，為我們理解榕-蜂如何分配繁殖雌花資源，穩(wěn)定繁殖共存提供了直接證據(jù)。

先前的研究由于難于清楚、長時(shí)間觀察傳粉榕小蜂在雌花期榕果內(nèi)的活動(dòng)行為，往往只統(tǒng)計(jì)榕小蜂剩余卵量和花粉量，以及最終成功繁殖的小蜂后代及種子數(shù)量來倒推榕小蜂可能的傳粉、產(chǎn)卵行為(Herreetal.,2008;徐睿等,2016)。本研究直接對(duì)傳粉榕小蜂行為進(jìn)行觀察，并統(tǒng)計(jì)榕小蜂在不同傳粉狀態(tài)及工作不同時(shí)間段的產(chǎn)卵及傳粉情況(圖2和4)，結(jié)果一致性地支持：進(jìn)入榕果內(nèi)前6 h，榕小蜂主要執(zhí)行產(chǎn)卵行為，能夠產(chǎn)完孕卵量的95%，優(yōu)先保證自身的繁殖；之后的6-24 h，小蜂主要執(zhí)行傳粉行為，可傳完攜粉量的80%。單果控制性引蜂試驗(yàn)也證實(shí)了雌花期傳粉榕小蜂產(chǎn)卵及傳粉效率，以及雄花期最終成功繁殖的小蜂后代及種子數(shù)量之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系(圖5)。結(jié)果很好地支持：執(zhí)行產(chǎn)卵的前6 h，繁殖顯著多的榕小蜂后代；而后的6-24 h，則繁殖顯著多的榕樹種子。雌雄同株不同屬傳粉榕小蜂以及雌雄異株雌雄果內(nèi)榕小蜂的繁殖行為值得進(jìn)一步對(duì)比研究。

在自然界中，主動(dòng)的傳粉模式很少見，多發(fā)生于互惠共生系統(tǒng)中，通常花及傳粉昆蟲之間有特化的傳粉結(jié)構(gòu)和行為(Kjellbergetal.,2001;Cooketal.,2004;Wangetal.,2014)。聚果榕傳粉榕小蜂除了具有主動(dòng)傳粉的行為外，還有專門用于傳粉的花粉刷與花粉筐，其通常將花粉裝于胸部腹面兩側(cè)的囊狀花粉筐中進(jìn)行攜帶。本研究表明聚果榕傳粉榕小蜂的個(gè)體大小與孕卵量呈顯著正相關(guān)關(guān)系(圖3)，這與高榕傳粉榕小蜂的研究結(jié)果(徐睿等,2016)一致。然而，本研究還發(fā)現(xiàn)聚果榕傳粉榕小蜂個(gè)體大小與攜粉量相關(guān)性不顯著，孕卵量和攜粉量之間沒有相關(guān)性(圖3)，探明了傳粉榕小蜂個(gè)體大小與其孕卵量及攜粉量之間的關(guān)系。

在對(duì)傳粉者有利的情況下，主動(dòng)傳粉行為才可能被保留并得到進(jìn)化(Jousselinetal.,2003)。有研究報(bào)道榕小蜂幼蟲以傳粉后形成的胚乳組織為食，因此，傳粉受精可確保其幼蟲發(fā)育過程中有充足的食物(Verkerke,1989;Jousselinetal.,2003;Tarachaietal.,2008)。對(duì)分布在西雙版納的垂葉榕及分布于中美洲的幾種榕樹上，控制性引蜂試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)榕樹存在寄主懲罰(host sanctions)，沒有授粉的榕果會(huì)提前脫落，推測榕小蜂進(jìn)入榕果后首先進(jìn)行傳粉，以保證榕果的正常發(fā)育(管俊明等,2007;Jander and Herre,2010)。Jansen-González等(2012)對(duì)F.citrifolia的傳粉榕小蜂Pegoscapussp.發(fā)育過程進(jìn)行了一系列研究，認(rèn)為其幼蟲的取食策略隨生長發(fā)育而改變，首先取食植物珠心組織，進(jìn)入3齡幼蟲期后取食植物胚乳；當(dāng)榕果缺乏授粉時(shí)，其3齡幼蟲期將取食榕果內(nèi)其他資源，但死亡率顯著升高?？傊?，主動(dòng)傳粉有利于榕小蜂后代的正常發(fā)育。本研究揭示了聚果榕傳粉榕小蜂進(jìn)入雌花期榕果后優(yōu)先產(chǎn)卵、之后傳粉的生物學(xué)現(xiàn)象，這一策略保證了榕-蜂雙方的成功繁殖。本研究的結(jié)果為深入探究榕-蜂共生體系的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。