王志剛 鄭紅艷 林學(xué)軍

[摘要]目的 探討血漿內(nèi)皮素-1（ET-1）和血小板p-選擇素（CD62P）在慢性阻塞性肺疾?。–OPD）患者中的水平及臨床意義。方法 選取2017年6月～2018年9月我院呼吸內(nèi)科收治的68例COPD急性發(fā)作期（AECOPD）患者作為A組，另外選取同期門診復(fù)查的79例COPD穩(wěn)定期患者作為B組;選取同期體檢中心的72例健康體檢者作為健康對照C組。分別檢測和比較三組的血漿ET-1和血小板表面CD62P水平，并分析A、B兩組的血漿ET-1和血小板表面CD62P水平與動脈血氧分壓（PaO2）和動脈血二氧化碳分壓（PaCO2）的關(guān)系。結(jié)果 A組的血漿ET-1和血小板CD62P水平均高于B組和C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;B組和C組的血漿ET-1和血小板CD62P水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。A組與B組的PaO2、PaCO2比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。血漿ET-1、血小板CD62P水平與PaO2成負相關(guān)（r=-0.41、-0.43，P<0.05），與PaCO2成正相關(guān)（r=0.56、0.58，P<0.05）。結(jié)論 檢測COPD患者體內(nèi)的ET-1和CD62P含量，有助于COPD患者可能存在血栓前狀態(tài)（PTS）的早期發(fā)現(xiàn)和臨床干預(yù)治療。

[關(guān)鍵詞]慢性阻塞性肺疾病;內(nèi)皮素-1;p-選擇素;血栓前狀態(tài)

[中圖分類號] R563.5? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2020）8（a）-0004-04

Detection and clinical significance of plasma endothelin-1 and platelet p-selectin in chronic obstructive pulmonary disease

WANG Zhi-gang? ?ZHENG Hong-yan▲? ?LIN Xue-jun

Department of Respiratory Medicine， People′s Hospital Affiliated to Quanzhou Medical College， Fujian Province， Quanzhou? ?362000， China

[Abstract] Objective To investigate the level and clinical significance of plasma endothelin-1 （ET-1） and platelet p-selectin （CD62P） in patients with chronic obstructive pulmonary disease （COPD）. Methods A total of 68 patients with acute exacerbation of COPD （AECOPD） in our hospital from June 2017 to September 2018 were selected as group A， 79 patients with stable COPD who were reviewed in the same clinic were selected as the group B， and a total of 72 healthy examinees served as the healthy control group C. The plasma ET-1 and platelet surface CD62P levels of the three groups were detected and compared， and the relationship between the plasma ET-1， platelet surface CD62P levels and arterial blood oxygen partial pressure （PaO2）， arterial blood carbon dioxide partial pressure （PaCO2） was analyzed in group A and B. Results The plasma ET-1 and platelet CD62P levels in group A were higher than those in group B and C， and the differences were statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in the levels of plasma ET-1 and platelet CD62P between group B and group C （P>0.05）. There were no significant differences in PaO2 and PaCO2 between group A and group B （P>0.05）. Plasma ET-1 and platelet CD62P levels were negatively correlated with PaO2 （r=-0.41， -0.43， P<0.05）， and positively correlated with PaCO2 （r=0.56， 0.58， P<0.05）. Conclusion The detection of ET-1 and CD62P in COPD patients is helpful for the early detection and clinical intervention of prethrombotic state （PTS） in COPD patients.

[Key words] Chronic obstructive pulmonary disease; endothelin-1; p-selectin; Prethrombotic state

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種常見的、以持續(xù)存在的氣流受限不完全可逆為特征的疾病，其高發(fā)病率和致死率已是當前一個嚴重的公共問題，目前發(fā)病機制尚未完全明確，多數(shù)認為與機體對有害氣體異常的炎性反應(yīng)有關(guān)[1]。Polatli等[2]報道COPD患者的凝血和抗凝失衡容易誘發(fā)血栓前狀態(tài)（prethrombotic state，PTS），導(dǎo)致肺血管微血栓栓塞的形成，引起肺動脈高壓及右心損害，導(dǎo)致COPD急性發(fā)作（acute exacerbation of COPD，AECOPD）的發(fā)生。目前，AECOPD的研究熱點是如何利用一些生物標志物，如血漿內(nèi)皮素（endothelin-1，ET-1）、p-選擇素（p-selectin，CD62P）纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、血清降鈣素原（procalcitonin，PCT）等對其加重程度和病原學(xué)進行預(yù)測，指導(dǎo)臨床診療。對于這些指標的預(yù)測價值，目前尚無統(tǒng)一認識。本研究檢測了血清ET-1和血小板CD62P在COPD急性發(fā)作期和緩解期的水平及其與缺氧、高碳酸血癥的關(guān)系，以初步探討AECOPD發(fā)生PTS的可能機制，為今后的干預(yù)治療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年6月～2018年9月于我院就診的147例COPD患者作為研究對象，其中呼吸內(nèi)科收治的AECOPD住院患者68例作為A組，男32例，女36例;平均年齡（65.8±6.5）歲。同期門診的COPD穩(wěn)定期患者79例作為B組，男43例，女36例;平均年齡（66.2±7.8）歲。納入標準：所有AECOPD患者的診斷均符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013年修訂版）》[3]，即COPD短期內(nèi)因咳、痰、喘加重的住院患者。排除標準：近期應(yīng)用抗凝或抗血小板聚集藥物（如阿司匹林、肝素等）者;未能有效控制的高血壓患者;近期有手術(shù)史或其他出凝血性疾病史患者;嚴重的肝腎功能障礙者;精神疾病無法配合的患者;妊娠和（或）哺乳期婦女。另選取同期體檢中心的健康體檢者72例作為健康對照C組，其中男42例，女30例;平均年齡（67.5±5.7）歲。以上入組對象均無高血壓、糖尿病史及心、肝、腎和血液系統(tǒng)疾病。三組的性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有參與的研究對象均簽署知情同意書。

1.2檢測方法

ET-1：運用全自動酶標儀（意大利SEAC公司，ALISEI.Q.S），選用ET-1試劑盒（CUSABIO生物有限公司，X21033233）測定血漿E-T1含量，單位為ng/L。

CD62P：運用流式細胞儀（美國Coulter公司的Beck-man-Coulter，貝克曼庫爾特型），選用免疫熒光單克隆抗體CD62P-PE試劑盒（美國Becton-dickion公司，348107）測定CD62P含量。

動脈血氧分壓（arterial blood oxygen partial pressure，PaO2）和動脈二氧化碳分壓（arterial blood carbon dioxide partial pressure，PaCO2）：運用血氣分析儀（美國，Nova Biomedical）測定PaO2和PaCO2，測定前停吸氧半小時。

1.3觀察指標

觀察比較COPD急性發(fā)作期、穩(wěn)定期復(fù)查患者和同期健康體檢者的血栓前狀態(tài)和血氣分析指標。血栓前狀態(tài)指標包括：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血漿ET-1水平，采用雙色直接免疫熒光法測定CD62P含量;血氣分析指標包括：采用干式電化學(xué)法測定動脈血PaO2、PaCO2。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，三組間比較采用單因素方差分析，不符合正態(tài)分布者轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布后行統(tǒng)計學(xué)分析;計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗;血氣分析（PaO2、PaCO2）與血清ET-1和血小板CD62P的關(guān)系采用單因素直線相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組血漿ET-1、血小板CD62P水平及PaO2、PaCO2的比較

A組的血漿ET-1和血小板CD62P水平均高于B組和C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;B組和C組的血漿ET-1和血小板CD62P水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。A組與B組的PaO2、PaCO2比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2血漿ET-1、血小板CD62P水平與血漿PaO2、PaCO2的關(guān)系

血漿ET-1、血小板CD62P水平與PaO2成負相關(guān)（r=-0.41、-0.43，P<0.05），與PaCO2成正相關(guān)（r=0.56、0.58，P<0.05）。

3討論

AECOPD是COPD自然進程中經(jīng)常出現(xiàn)的急性事件，指穩(wěn)定期患者短期內(nèi)咳嗽、咳痰、氣促等呼吸道癥狀突然加重超出日常變異，且需要改變原來的治療方案。PTS系指對于某些與血栓形成有關(guān)的疾病而言，在血栓形成之前，由于血管內(nèi)皮、血小板和血液流變學(xué)發(fā)生變化，使機體促凝-抗凝機制失衡所引起的有利于血栓形成的病理狀態(tài)[4]。在此狀態(tài)下，循環(huán)血液發(fā)生血栓形成的可能性大為增加。Leuppi等[5]報道COPD的主要死因是肺血栓栓塞癥（pulmonary thromboembolism，PTE）。因此，AECOPD患者的PTS可嚴重影響病情進展及預(yù)后，對其進行指標監(jiān)測和及時干預(yù)具有重要的臨床意義。

ET-1系1988年由日本學(xué)者Yanagisawa等從豬主動脈內(nèi)皮細胞上清液中提取得到，其是一種生物活性肽，由21個氨基酸殘基組成，有三種異構(gòu)體分別為ET-1、ET-2、ET-3。其中，以ET-1最早發(fā)現(xiàn)，且活性最強，作用持久，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強縮血管物質(zhì)[6]。主要由肺組織合成，分布在肺、心、腎等組織器官中，主要表達在血管內(nèi)皮，具有強烈的收縮血管、支氣管及促進有絲分裂的生物活性。它在維系血管張力和心血管系統(tǒng)平衡中發(fā)揮重要作用，其表達可受到如血栓素、血管緊張素Ⅱ、缺氧、機械張力等諸多因素的影響[7]。

本研究結(jié)果顯示，AECOPD患者的ET-1含量較穩(wěn)定期、健康對照組均顯著升高（P<0.05），其原因分析如下：①AECOPD的長期慢性低氧可導(dǎo)致血管內(nèi)皮下膠原組織暴露，血液中原本存在的極低濃度ET-1受到刺激后急劇升高，激活凝血反應(yīng)鏈[8]。②AECOPD時的肝臟細胞在白介素-6（interleukin 6，IL-6）刺激下產(chǎn)生急性期CRP，后者釋放到循環(huán)中可上調(diào)其他炎癥細胞因子、激活補體、促進巨噬細胞攝取低密度脂蛋白，還可以刺激血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生ET-1[9]。③發(fā)病期的肺組織因為功能狀態(tài)的失常而減少了對ET-1的降解，二者平衡破壞導(dǎo)致ET-1含量急劇上升[10]。

相關(guān)研究表明[11]，AECOPD患者體內(nèi)明顯升高的ET-1與血管平滑肌中ET受體相結(jié)合，使Ca2+流入細胞內(nèi)，從而引發(fā)縮血管反應(yīng)、血管平滑肌細胞增殖、肺血管的重塑，導(dǎo)致PTS發(fā)生和肺動脈高壓形成，而后者進一步加重缺氧缺血和血管栓塞，從而形成惡性循環(huán)[12]。有動物實驗表明[13]，加用ET受體拮抗劑可有效降低PTE后的肺動脈高壓，并減少栓塞后血栓烷A2的釋放。

血小板CD62P是一種分子量為140 kD的膜糖蛋白，定位于血小板的a顆粒及內(nèi)皮細胞棒管狀（Weibel-Palade）小體[14]。它在人體諸多組織如肝、肺、結(jié)腸、胃及腎上腺的血管內(nèi)皮細胞均有很低含量的表達，且主要分布于中等以上血管。它在介導(dǎo)粒細胞和單核細胞在內(nèi)皮細胞表面的滾動，促進粒細胞和單核細胞與血小板的黏附上發(fā)揮重要作用，是目前最具特征性的血小板活化的分子標志物[15]。

本研究結(jié)果顯示，AECOPD患者的CD62P水平較穩(wěn)定期、健康對照組均顯著升高（P<0.05），與Ferroni等[16]報道COPD患者可溶性CD62P水平較健康人高的結(jié)果相仿。原因分析如下：①COPD患者由于代償性增多的紅細胞引發(fā)血液黏稠度增加，而其病程中常見的感染、酸中毒等因素可導(dǎo)致內(nèi)皮損傷和膠原暴露，刺激血小板附著和聚集，引起CD62P高表達[17]。②AECOPD時的炎癥反應(yīng)通過上調(diào)血管內(nèi)皮細胞組織因子的基因表達，增加凝血因子的活性，刺激CD62P高表達，促進血液凝固[18]。反之，凝血可以放大炎癥反應(yīng)，二者互為因果。

關(guān)于COPD患者細胞表面受體表達的研究顯示，白細胞表面的CD62P糖蛋白配體-1水平較健康人明顯升高[19]，CD62P糖蛋白配體-1促使CD62P與激活的血小板結(jié)合，形成血小板-單核細胞聚合物，后者是檢測血小板活性的高敏感性和特異性指標。

COPD患者血漿ET-1、血小板CD62P與動脈血氣分析指標之間可能存在相互影響，本研究結(jié)果顯示，COPD急性加重期和穩(wěn)定期患者的血漿ET-1、血小板CD62P均與PaO2成負相關(guān)，與PaCO2成正相關(guān)（P<0.05）。有研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林有益于改善AECOPD患者的生存率[20]，建議AECOPD發(fā)生后常規(guī)應(yīng)用低劑量阿司匹林[21]。鑒于大多數(shù)嚴重AECOPD住院患者易發(fā)生PTS，慢性阻塞性肺疾病全球倡議（The Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease，GOLD）指南建議這些患者常規(guī)進行PTS預(yù)防治療。

綜上所述，聯(lián)合檢測AECOPD血清ET-1和血小板CD62P水平，可對AECOPD的PTS起到良好的預(yù)測作用，在確定PTS后，是否需要積極進行抗血小板治療，抗血小板治療是否會影響血小板CD62P表達的報道罕見，對于AECOPD患者給予血漿ET-1受體拮抗劑是否會延緩PTS的發(fā)生亦無統(tǒng)一認識，上述問題尚需要大規(guī)模、多中心的前瞻性試驗來進行進一步研究。

[參考文獻]

[1]Grouse L，Nonikov D.The global battle to improve patients′ health outcomes：COPD awareness，activities，and progress[J].J Thorac Dis，2014，6（2）：161-168.

[2]Polatli M，Ben Kheder A，Wali S，et al.Chronic obstructive pulmonary disease and associated healthcare resource consumption in the Middle East and North Africa：the BREATHE study[J].Respir Med，2013，106 Suppl 2：S75-S85.

[3]中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南（2013年修訂版）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2013，36（4）：255-264.

[4]Takahashi T.Annual FEV1 changes and numbers of circulating endothelial microparticles in patients with COPD：a prospective study[J].BMJ Open，2014，4（3）：4571-4572.

[5]Leuppi JD，Schuetz P，Bingisser R，et al.Short-term vs conventional glucocorticoid therapy in acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease：the REDUCE randomized clinical trial[J].JAMA，2013，309（21）：2223-2231.

[6]張斗霞，張凌，白明.急性肺血栓栓塞癥兔溶栓或抗炎治療時內(nèi)皮素1和核因子-κB的表達水平[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2005，28（9）：32-35.

[7]Demeyer H.Standardizing the analysis of physical activity in patients with COPD following a pulmonary rehabilitation program[J].Chest，2014，6（10）：1965-1968.

[8]薛建峰，趙成軍，賈如意.血管內(nèi)皮損傷標志物[J].醫(yī)學(xué)綜述，2006，12（8）：461-463.

[9]Clark NP，Delate T，Riggs CS，et al.Warfarin Interactions With Antibiotics in the Ambulatory Care Setting[J].JAMA Intern Med，2014，174（3）：409-416.

[10]Niewiada M，Czlonkowka A.Prevention of ischemic stroke in clinical practice：a role of internists and general practitioners[J].Pol Arch Med Wewn，2014，124（10）：540-548.

[11]Lee JH，Chun YG，Lee IC，et al.Pathogenic role of endothelin 1 in hemodynamic dysfunction in experimental acute pulmonary thromboembolism[J].Am J Respir Crit Care Med，2001，164（7）：1282-1287.

[12]Raskob G，Wendelboe AM.Global public awareness of venous thromboembolism：reply[J].J Thromb Haemost，2016，14（5）：1111-1112.

[13]Tanus-Santos JE，Gordo WM，Udelsmann A，et al.Nonselective endothelin-receptor antagonism attenuates hemodynamic changes after massive pulmonary air embolism in dogs[J].Chest，2000，118（1）：175-179.

[14]Rios L，F(xiàn)uentes HE，Oramas DM，et al.Validation of a Patient-Completed Caprini Risk Assessment Tool for Spanish，Arabic，and Polish Speakers[J].Clin Appl Thromb Haemost，2018，24（3）：502-512.

[15]Saraiva C，Abreu T，Neves D，et al.Mortality predictive factors in subjects with COPD after a pulmonary rehabilitation program：a 3-year study[J].Respir Care，2016，61（9）：1179-1185.

[16]Ferroni P，Basili S，Martini F，et al.Soluble P-selectin as a marker of platelet hyperactivity in patients with chronic obstructive pulmonary disease[J].J Investig Med，2000，48（1）：21-27.

[17]Khare P，Talwar A，Chandran D，et al.Impaired systemic vascular reactivity & raised high-sensitivity C reactive protein levels in chronic obstructive pulmonary disease[J].Indian J Med Res，2016，143（2）：205-212.

[18]Heit JA.Epidemiology of venous thromboembolism[J].Nat Rev Cardiol，2015，12（8）：464-474.

[19]Schumacher A，Liebers U，John M，et al.P-selectin glycoprotein ligand-1（PSGL-1）is up-regulated on leucocytes from patients with chronic obstructive pulmonary disease[J].Clin Exp Immunol，2005，142（2）：370-376.

[20]Harrison MT，Short P，Williamson PA，et al.Thrombocytosis is associated with increased short and long term mortality after exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease：a role for antiplatelet therapy[J].Thorax，2014，69（7）：609-615.

[21]Sin DD.The devastating power of platelets in COPD exacerbations：can aspirin save lives in COPD[J].Thorax，2014，69（7）：603-604.

（收稿日期：2019-09-04）