劉曉敏，陳 虹

(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132013；2.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆 石河子 832002)

高血壓和高脂血癥是心腦血管疾病的兩大主要危險(xiǎn)因素。高血壓隨著疾病的進(jìn)展，會對心、腎等靶器官造成損害，高脂血癥會導(dǎo)致脂質(zhì)在肝臟內(nèi)的蓄積，導(dǎo)致肝臟損傷。二者并存時(shí)相互作用，加重患者的靶器官損害[1-3]。

前期研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方苦豆子能夠降低自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥大鼠模型的體重、血壓和血脂[4]。本試驗(yàn)將在此研究基礎(chǔ)上，繼續(xù)采用該復(fù)合模型，對復(fù)方苦豆子降壓調(diào)脂的機(jī)制進(jìn)行初步研究，同時(shí)觀察復(fù)方苦豆子對肝臟、腎臟的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，雌雄各半，13～14周齡，體重170～190 g，購自中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所 (合格證號：SCXK(軍)2002-005)；同齡 Wistar大鼠，雌雄各半，購自新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動物研究中心(合格證號：醫(yī)動字第2號)。

1.2 主要儀器 DL-5 低速大容量離心機(jī)、GL-16M 臺式高速冷凍離心機(jī)(湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司)；酶標(biāo)儀(Thermo electron corporation公司)；XH- 6010Y 放射免疫計(jì)數(shù)器(陜西二六二醫(yī)療儀器廠)；PCUV- 2501 紫外分光光度計(jì)(日本島津)。

1.3 主要試劑與試劑盒 復(fù)方苦豆子流浸膏(石河子大學(xué)省部共建新疆特種植物藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制，1 mL含生藥2.50 g)；膽固醇(美國進(jìn)口)；膽酸鈉(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司)；丙基硫氧嘧啶(上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司)；卡托普利片(上海安源安徽仁濟(jì)制藥有限公司)；血脂康膠囊(北京北大維信生物科技有限公司)；膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒(溫州津瑪生物科技有限公司)；低密度脂蛋白(LDL-C)試劑盒(浙江東甌生物工程有限公司)；內(nèi)皮素(ET)放射免疫分析測定盒(北京北方生物技術(shù)研究所)；一氧化氮合成酶(NOS)測試盒(南京建成生物工程研究所)；其他試劑均為分析純。

1.4 高脂飼料配制 由基礎(chǔ)飼料 90%，膽固醇2%，膽酸鈉0.5%，豬油7.5% 配制而成，拌勻，制成塊狀烘干。

1.5 動物建模及分組給藥 見文獻(xiàn)[4]。

1.6 觀察指標(biāo) 給藥后8 周，于大鼠眶后靜脈叢取血，測定血漿中血漿腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平和ET、NOS含量。大鼠取血后處死，打開胸腹腔，分離肝臟無菌生理鹽水洗凈，濾紙吸干，稱量肝重，測肝系數(shù)(肝系數(shù)=肝重/體重)。從中摘取肝臟0.5 g，放入玻璃勻漿器中，加入4.5 mL甲醇-氯仿混合液(1∶1)，研磨制成10%的肝勻漿，振蕩，放置過夜，提取脂質(zhì)，第2天于14 520 g離心30 min，取上清液待測，采用酶法按測定試劑盒說明書測定肝臟中的脂質(zhì)(TC、TG)的含量，其余肝臟整理切除后，置于10%甲醛溶液固定，留做H.E.染色。取出腎臟，處理方法同肝臟，留做H.E.染色。

2 結(jié)果

2.1 大鼠自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥模型的建立 48只SHR高脂飼料喂飼4周后，SHR對照組與正常對照組比較，TC、TG、LDL-C略有升高，無顯著性差異(P>0.05)；造模組與SHR對照組、正常對照組比較，TC、TG、LDL-C明顯升高(P<0.01)，HDL-C顯著降低(P<0.01，P<0.05)。說明自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥模型構(gòu)建成功。結(jié)果見表1。

表1 造模試驗(yàn)4周后血脂指標(biāo)變化Table 1 Changes of blood lipid index after 4 weeks of model experiment (mmol/L)

2.2 復(fù)方苦豆子制劑對自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥大鼠PRA、AngII水平的影響 用藥8周，SHR對照組PRA明顯高于正常對照組(P<0.01)；SHR對照組與模型組PRA比較接近(P>0.05)；與模型組比較，高劑量組、中劑量組PRA水平下降明顯(P<0.01)。SHR對照組、模型組血漿AngII水平明顯高于正常對照組(P<0.01)；模型組血漿AngII水平明顯高于SHR對照組(P<0.01)。與模型組比較，高劑量組、中劑量組AngII水平下降明顯(P<0.01)。結(jié)果見表2。

表2 用藥8周復(fù)方苦豆子制劑對復(fù)合模型大鼠PRA、AngII水平的影響Table 2 Effects of compound Kudouzi on PRA and AngII levels of combined model rats

2.3 復(fù)方苦豆子制劑對自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥大鼠血漿ET、總一氧化氮合成酶(T-NOS)和內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的影響 用藥8周，模型組血漿ET含量與SHR對照組比較，明顯升高(P<0.01)，SHR對照組ET含量與正常對照組比較明顯升高(P<0.01)。與模型組比較，中劑量和高劑量組血漿ET含量明顯降低(P<0.01，P<0.05)。

模型組血漿T-NOS含量與SHR對照組比較，明顯降低(P<0.05)，SHR對照組T-NOS含量與正常對照組比較明顯降低(P<0.01)。與模型組比較，各給藥組血漿T-NOS含量都明顯升高(P<0.01)。

模型組血漿eNOS含量與SHR對照組比較，明顯降低(P<0.05)，SHR對照組eNOS含量與正常對照組比較也明顯降低(P<0.05)。與模型組比較，中劑量組eNOS含量明顯升高(P<0.01)，高劑量、低劑量組也升高顯著(P<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 用藥8周復(fù)方苦豆子制劑對復(fù)合模型大鼠血漿ET、T-NOS、eNOS水平的影響Table 3 Effects of compound Kudouzi on plasma ET,T-NOS,eNOS levels of combined model rats

2.4 復(fù)方苦豆子制劑對自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥大鼠肝臟脂質(zhì)(TC、TG)含量、肝系數(shù)的影響 用藥8周，模型組肝臟TC、TG含量與SHR對照組相比明顯升高(P<0.01)。SHR對照組TC、TG含量與正常對照組比較無明顯差異(P>0.01)。與模型組比較，各給藥組肝臟TC含量明顯降低(P<0.01)，高、中劑量組肝臟TG含量明顯降低(P<0.01)。

用藥8周，模型組肝系數(shù)與SHR對照組相比明顯升高(P<0.01)。SHR對照組肝系數(shù)與正常對照組比較明顯升高(P<0.01)。與模型組比較，各給藥組肝系數(shù)明顯降低(P<0.01)，其中以中劑量組最為顯著。結(jié)果見表4。

表4 用藥8周復(fù)方苦豆子制劑對復(fù)合模型大鼠肝臟TC、TG水平的影響Table 4 Effects of compound Kudouzi on TC and TG levels of combined model rats liver

2.5 復(fù)方苦豆子制劑對自發(fā)性高血壓復(fù)合高脂血癥大鼠肝臟、腎臟組織的影響

2.5.1 觀察各組大鼠肝臟切片的病理學(xué)改變 (1)正常對照組、SHR對照組大致正常，可見肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞呈條索狀排列，核圓規(guī)整，肝細(xì)胞內(nèi)偶見脂肪空泡，腺泡內(nèi)壞死不明顯，匯管區(qū)未見明顯炎性細(xì)胞浸潤、壞死等改變，無其他異常變化；(2)模型組可見脂肪變性嚴(yán)重，肝細(xì)胞索排列紊亂，條梭狀消失。幾乎全部肝細(xì)胞內(nèi)充滿大泡狀脂滴空泡，空泡大者將胞核推向一側(cè)，部分肝細(xì)胞破裂而出現(xiàn)脂肪融合，肝細(xì)胞正常形態(tài)消失，腫大明顯，邊界模糊，胞核形狀不規(guī)則，肝竇變窄或消失，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤，嚴(yán)重者壞死融合成片；(3)中劑量組、陽性對照組可見部分肝細(xì)胞有脂肪變性或肝細(xì)胞內(nèi)充滿小的脂滴，腺泡內(nèi)點(diǎn)灶狀壞死不明顯；(4)高 劑量組可見部分肝細(xì)胞有脂肪變性或肝細(xì)胞內(nèi)充滿小的脂滴，腺泡內(nèi)可見散在的點(diǎn)灶狀壞死，匯管區(qū)偶見炎性細(xì)胞浸潤；(5)低劑量組肝組織病理改變與模型組類似，但改變比模型組輕微。結(jié)果見中插彩版圖1。

2.5.2 觀察各組大鼠腎臟切片的病理學(xué)改變 (1)正常對照組、SHR對照組組腎小球前血管較薄，腎小球動脈硬化不明顯，腎單位結(jié)構(gòu)清晰；(2)模型組腎小球前血管肥厚，可見腎小球動脈硬化，腎小球入球小動脈管壁增厚，管腔狹窄腎小管內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列紊亂；(3)中劑量組、陽性對照組腎小球前血管輕度水腫，腎小球前血管壁肥厚，腎小球入球小動脈管壁增厚，管腔狹窄，輕于高劑量組、低劑量組；(4)高劑量組、低劑量組腎小球前血管肥厚，可見腎小球動脈硬化，腎小球入球小動脈管壁增厚，管腔狹窄，低劑量組較高劑量組明顯。結(jié)果見中插彩版圖2。

3 討論

利定建等[5]通過觀察高血壓合并高脂血癥患者炎性反應(yīng)及血管內(nèi)皮功能等指標(biāo)的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)高血壓合并高脂血癥患者比單純高血壓及單純高脂血癥患者炎性反應(yīng)更嚴(yán)重，血管內(nèi)皮功能更差，動脈僵硬度更加明顯，發(fā)生心腦血管事件的風(fēng)險(xiǎn)更大。一氧化氮(NO)和ET是評估血管內(nèi)皮功能狀態(tài)的2個重要指標(biāo)，二者含量含高低反應(yīng)血管舒張、收縮程度，正常情況下應(yīng)保持動態(tài)平衡，因此對二者的監(jiān)測非常重要。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)復(fù)方苦豆子能夠降低模型大鼠血漿ET的含量，同時(shí)升高血漿eNOS含量，血漿eNOS含量升高意味著NO生成增加。表明復(fù)方苦豆子可以通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮收縮和舒張系統(tǒng)起到降壓調(diào)脂的作用。

腎素血管緊張素系統(tǒng)在高血壓的發(fā)病機(jī)制中起著很重要的作用，與靶器官的損傷密切相關(guān)[6-7]。腎素為腎素血管緊張素系統(tǒng)級聯(lián)反應(yīng)的初始和限速步驟，因此PRA水平可反映腎素血管緊張素系統(tǒng)活化程度[8-9]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，復(fù)方苦豆子能夠降低PRA和AngII水平，表明復(fù)方苦豆子可影響腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)起到降壓調(diào)脂的作用。

肝臟脂質(zhì)(TC、TG)和肝系數(shù)指標(biāo)可以反映肝臟的受損程度，復(fù)方苦豆子各劑量組都明顯降低了TC、TG和肝系數(shù)，表明復(fù)方苦豆子能改善肝臟受損，同時(shí)通過肝臟形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)肝臟的脂肪變性、肝細(xì)胞、匯管區(qū)、腺泡都明顯好轉(zhuǎn)，表明復(fù)方苦豆子對肝臟具有保護(hù)作用。通過腎臟形態(tài)學(xué)觀察，復(fù)方苦豆子能明顯改善腎小球血管壁肥厚和腎小球入球小動脈管壁增厚，管腔狹窄等情況，表明復(fù)方苦豆子對腎臟具有保護(hù)作用。