周蓉(南京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，江蘇 南京 210000)

0 引言

噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑是一種氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑，具有觸殺和胃毒作用，能夠高效殺蟲(chóng)，并且殘留率低[1-2]，是一種衛(wèi)生和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)兩用的廣譜殺蟲(chóng)劑。但由于噁蟲(chóng)威在堿性介質(zhì)中易分解、難溶于水且具有中等危害毒性[3]，因此可以將噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑進(jìn)行微膠囊化從而降低毒性，延長(zhǎng)其有效期。殺蟲(chóng)劑分析方法報(bào)道的有分光光度法、液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。目前，對(duì)于噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑及其微膠囊有效含量的測(cè)定方法的研究相對(duì)較少。本研究采用反相高效液相色譜法，對(duì)噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑及其微膠囊的有效含量進(jìn)行分析研究，并對(duì)此方法的有效性進(jìn)行評(píng)估。高效液相色譜技術(shù)簡(jiǎn)稱(chēng)HPLC技術(shù)是一種利用高壓泵將極性溶劑泵入裝有填充劑的色譜柱中，經(jīng)進(jìn)樣閥注入的樣品被流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測(cè)器，由記錄儀記錄色譜信號(hào)并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理得到分析結(jié)果的一種新型技術(shù)[4-5]。由于HPLC技術(shù)具有響應(yīng)快速、反應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確度好、精密度高的優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛使用于農(nóng)藥、氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、金屬有機(jī)物等物質(zhì)的分析[6]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

儀器：920-LC高效液相色譜儀(美國(guó)Varian公司)；Millipore Q超純水器(美國(guó)Millipore公司)；Inertsil ODS-2色譜柱(島津(上海)實(shí)驗(yàn)器材有限公司)；超聲波清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；FA1604N分析天平(上海菁海儀器有限公司)；0.22μm有機(jī)相濾膜。試劑：噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑標(biāo)樣(上海谷研有限公司)；噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑原藥(某公司)；噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑微膠囊(自制)；乙腈：色譜純(西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 高效液相色譜檢測(cè)條件

①色譜柱：Inertsil ODS-2(4.6×250mm，5μm)；②流動(dòng)相：乙腈：水=6:4(V:V)；③流速：1.0mL/min；④柱溫：35℃；⑤進(jìn)樣量：20μL；⑥檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

確稱(chēng)取噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑標(biāo)樣0.0500g(精確到0.0001g)置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，搖勻，配制500ppm的噁蟲(chóng)威標(biāo)樣儲(chǔ)備液。分別移取噁蟲(chóng)威儲(chǔ)備液1、2、5、10、2、50mL 置于100mL容量瓶中，用乙腈定容，搖勻。測(cè)試前用0.22μm的有機(jī)相濾膜過(guò)濾。在上述高效液相色譜條件下進(jìn)行測(cè)試，以噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后利用精密度、檢出限和加標(biāo)回收率來(lái)對(duì)本測(cè)試方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.2.3 噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑微膠囊有效成分提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1000g噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑微膠囊樣品于樣品瓶中，加入10mL乙腈，室溫下超聲萃取60min，取上清液用0.22μm的有機(jī)相濾膜過(guò)濾，待檢。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

在190～400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，掃描了噁蟲(chóng)威的吸收光譜。結(jié)果顯示，噁蟲(chóng)威在254nm處有最大吸收波長(zhǎng)，因此選擇254nm作為試驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。根據(jù)噁蟲(chóng)威的性質(zhì)，選擇乙腈作為有機(jī)溶劑，研究發(fā)現(xiàn)乙腈-水體系不僅溶解度高，且柱壓低，因此選擇乙腈-水作為流動(dòng)相。經(jīng)測(cè)定，選用乙腈：水=6:4作為流動(dòng)相。當(dāng)流速分別為0.8、1.0、1.5、2.0mL/min，考察不同流速對(duì)分離效果的影響。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)流速達(dá)到1.0mL/min時(shí)，有效成分噁蟲(chóng)威和其他雜質(zhì)能夠很好的分離且峰形對(duì)稱(chēng)完整；柱壓隨著流速的增大而不斷增加。綜合考慮分離效果、峰形、柱壓等因素，選擇流速為1.0mL/min。在上述高效液相色譜條件下對(duì)噁蟲(chóng)威標(biāo)樣和原藥進(jìn)行測(cè)定，分別在2.34、2.33min時(shí)出峰，保留時(shí)間一致。圖1、2中噁蟲(chóng)威有效成分和雜質(zhì)均能夠有效分離，且峰形對(duì)稱(chēng)完整，基線穩(wěn)定，出峰時(shí)間短，能夠準(zhǔn)確高效地進(jìn)行檢測(cè)。

圖1 噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑原藥高效液相色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

定量分析主成分時(shí)，要求標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)高于0.999。在上述高效液相色譜檢測(cè)條件下，噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑濃度與峰面積響應(yīng)值線性關(guān)系如圖3所示。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程為y=2730.7x+13103.3，線性相關(guān)系數(shù)為0.99925，滿足定量分析要求。

圖3 噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑濃度與峰面積響應(yīng)值線性關(guān)系圖

由于本方法將用于噁蟲(chóng)威原藥及其微膠囊樣品的定量分析，因此需要通過(guò)精密度、檢出限、加標(biāo)回收率來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.3 精密度測(cè)試

選擇濃度為50ppm的噁蟲(chóng)威溶液樣品，在上述高效液相色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣7次進(jìn)行相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)計(jì)算，用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)表征該方法的精密度。如表1。

對(duì)主成分進(jìn)行定量分析時(shí)，要求此方法的RSD在0～3%之間。計(jì)算得RSD為0.64%，可以達(dá)到定量分析的要求。

2.4 加標(biāo)回收率測(cè)試

取濃度為100ppm的噁蟲(chóng)威溶液樣品0.8mL，加入濃度為100ppm的噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑/甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2mL中，形成加標(biāo)樣進(jìn)行測(cè)定。

表1 精密度分析結(jié)果

計(jì)算得到加標(biāo)回收率R=104.1%，符合95%～105%的要求。如表2。

表2 加標(biāo)回收率分析結(jié)果

2.5 噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑微膠囊有效成分測(cè)定

在上述液相色譜條件下，測(cè)定噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑微膠囊有效成分的萃取液，保留時(shí)間為2.32min。在相同的高效液相色譜條件下，噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑標(biāo)樣、原藥與噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑微膠囊有效成分萃取液二者保留時(shí)間一致。

3 結(jié)語(yǔ)

文章建立了一種測(cè)定噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑及其微膠囊有效含量的高效液相色譜方法，采用C18反向色譜柱，以乙腈：水=6:4作為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，柱溫為35℃，實(shí)現(xiàn)了噁蟲(chóng)威有效成分和其他雜質(zhì)的有效分離。該液相色譜條件有良好的精密度和回收率，能夠高效、準(zhǔn)確地對(duì)噁蟲(chóng)威殺蟲(chóng)劑及其微膠囊有效成分進(jìn)行定量分析。