陶曉麗

(河南省臨潁縣畜牧局，河南 臨潁 462600)

奶牛乳房炎是一種由于自身或外界因素刺激奶牛乳腺而引起的炎癥反應(yīng)。發(fā)生該病原因較多，其中，病原菌感染，尤其是葡萄球菌、鏈球菌和腸道菌感染是其最主要的病因[1]。目前，我國奶牛乳房炎的治療主要依賴于大量使用抗生素，雖然抗生素對乳房炎起到了滿意的防治效果，但是抗生素的濫用和不合理使用會導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生，給臨床上乳房炎的準(zhǔn)確用藥帶來很大的困難，同時，抗生素藥物殘留超標(biāo)問題也使得乳制品質(zhì)量下降和危害消費(fèi)者身體健康。本次試驗(yàn)采集臨潁縣部分地區(qū)患有乳房炎的奶牛乳汁樣品，對其主要致病菌進(jìn)行細(xì)菌分離與鑒定，同時通過藥敏試驗(yàn)分析細(xì)菌對抗生素的耐藥情況，為該地區(qū)奶牛乳房炎的防控提供指導(dǎo)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 2019年7-10月采集臨潁縣部分地區(qū)6個奶牛場臨床表現(xiàn)為乳房炎的奶牛乳汁樣品73份，采樣前對奶牛乳區(qū)進(jìn)行清洗和消毒處理，棄掉前3把奶，其后采集約5 mL新鮮奶樣置于無菌奶樣管，保存于4 ℃，待檢。

1.2 奶牛乳房炎判斷標(biāo)準(zhǔn) 對牛乳體細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)算，按照國際乳業(yè)聯(lián)合會的相關(guān)規(guī)定，根據(jù)體細(xì)胞數(shù)對被檢奶牛進(jìn)行結(jié)果判定[2]。以每毫升牛奶中含20萬個細(xì)胞為亞臨床乳房炎的臨界值；超過該值為陽性，低于該值則正常。

1.3 細(xì)菌分離與鑒定 取滅菌棉拭子蘸取少量乳樣，均勻涂抹于鮮血培養(yǎng)基表面，將其放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20 h，挑取單一菌落進(jìn)行革蘭染色，對分離的菌株進(jìn)行生化鑒定。根據(jù)菌落形態(tài)和鏡檢結(jié)果，將桿菌接種至肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，分別進(jìn)行硫化氫、V-P、吲哚、M.R.、枸櫞酸鹽、糖發(fā)酵、過氧化氫酶等鑒定試驗(yàn)[3]。

1.4 細(xì)菌藥敏試驗(yàn) 將分離的菌株進(jìn)行適度稀釋，均勻涂布于固體培養(yǎng)基表面，待菌液干燥，在培養(yǎng)基表面分別貼4種藥敏紙片，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～24 h，測量抑菌圈，按照藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對測量結(jié)果進(jìn)行分析[4]。

2 結(jié)果

2.1 被檢樣品中細(xì)菌分離情況 對臨潁縣73份患有乳房炎奶牛乳樣中病原菌進(jìn)行分離與鑒定，其結(jié)果顯示：73份被檢樣品中有51份檢測為細(xì)菌感染，感染率為69.86%(51/73)；共分離得到96株菌，其中金黃色葡萄球菌、乳房鏈球菌、棒狀桿菌和大腸桿菌菌株分別為37株、29株、17株和13株，所占比例分別為38.54%、31.21%、17.71%和13.54%。由此可見，細(xì)菌病是導(dǎo)致該地區(qū)奶牛乳房炎的主要致病因素，其中金黃色葡萄球菌和乳房鏈球菌為優(yōu)勢菌株。

2.2 病原菌感染情況 在被檢樣品中，病原菌單獨(dú)感染份數(shù)為23份，所占比例為45.10%(23/51)，其中金黃色葡萄球菌、乳房鏈球菌、棒狀桿菌和大腸桿菌單獨(dú)感染所占比例分別為19.61%(10/51)、15.69%(8/51)、5.88%(3/51)和3.92%(2/51)；病原菌多重感染所占比例較高，為54.90%(28/51)，其中2重感染、3重感染和4重感染所占比例分別為31.37%、13.73%和9.80%，見表1。

表1 病原菌感染情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 本次僅對金黃色葡萄球菌和乳房鏈球菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，分別隨機(jī)挑選18株金黃色葡萄球菌和15株乳房鏈球菌進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)抑菌圈大小判定病原菌對藥物的耐藥程度。結(jié)果如表2，2種細(xì)菌對環(huán)丙沙星和恩諾沙星高度敏感，對青霉素和氨芐西林高度耐藥，對其他抗生素存在不同程度的耐藥。

表2 2種主要病原菌藥敏試驗(yàn)檢測結(jié)果 (株)

3 討論

河南省臨潁縣奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)，但奶牛乳房炎一直是困擾當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的障礙之一。引起奶牛乳房炎的病原微生物種類繁多，有真菌、細(xì)菌、病毒等，但95%以上都是由細(xì)菌引起的[2]。本試驗(yàn)旨在了解臨潁縣奶牛乳房炎致病菌種類和感染情況，共檢測患有乳房炎奶牛乳樣73份，其中有51份檢測含有致病菌，檢出率為69.86%，共分離出96株菌，其中金黃色葡萄球菌和乳房鏈球菌所占比例較高，與湖南、吉林、鄭州等地區(qū)試驗(yàn)結(jié)果一致[2,5-6]。多數(shù)樣品同時感染2種或以上致病菌，說明其混合感染情況十分嚴(yán)重，提高養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理水平是降低奶牛乳房炎流行情況重要舉措之一。奶牛乳房炎的致病菌感染因素主要是在飼養(yǎng)管理過程中，乳房鏈球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等病原菌通過泥土、糞便等環(huán)境介質(zhì)傳播感染牛群，此外，在擠奶過程中消毒衛(wèi)生不嚴(yán)格引起感染。因此，保持奶牛圈舍內(nèi)、外環(huán)境衛(wèi)生，經(jīng)常消毒，及時清理糞污，保持牛體的衛(wèi)生是預(yù)防奶牛乳房炎的重要措施。

進(jìn)一步藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明，從該地區(qū)奶牛場分離的金黃色葡萄球菌和乳房鏈球菌對不同藥物存在一定的耐藥性，其中金黃色葡萄球菌對環(huán)丙沙星、恩諾沙星敏感，而對青霉素和氨芐西林耐藥。乳房鏈球菌對環(huán)丙沙星和恩諾沙星敏感，而對青霉素和氨芐西林耐藥。與王慧等[7]對湖南部分地區(qū)奶牛乳房炎耐藥性的報道一致。這與當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶大量濫用或不合理使用此類抗生素有關(guān)。對環(huán)丙沙星和恩諾沙星高度敏感，提示今后奶牛乳房炎的治療可以選擇此類抗生素進(jìn)行治療，但也可以選擇一些微生態(tài)制劑或中草藥進(jìn)行治療，減少抗生素的使用。隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用和耐藥菌株的增多，細(xì)菌對常用抗生素的耐藥性愈來愈強(qiáng)，這給奶牛乳房炎治療的選擇用藥帶來很大困難，也給人類用藥帶來隱患。在防治奶牛乳房炎時，要進(jìn)行細(xì)菌的分離和鑒定，用藥敏試驗(yàn)選擇敏感性高的藥物，聯(lián)合用藥、輪換用藥，以減少細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)?？梢允褂闷渌挠盟幫緩?，如使用疫苗、生物制劑、純中藥制劑等防治奶牛乳房炎，這是新的發(fā)展趨勢。