劉建明， 褚洪忠， 陳幻喜， 楊光維， 李 濤， 施巧婷， 徐照學(xué)， 乃比江*

(1.伊犁州畜牧科學(xué)研究所，新疆 伊寧 835000；2.尼勒克縣烏贊鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，新疆 尼勒克 835700；3.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)所，鄭州 450008)

牛同期發(fā)情技術(shù)是利用外源性激素直接作用于卵巢，人為的調(diào)控母牛發(fā)情周期進(jìn)程，使群體母牛集中在某一時(shí)段同時(shí)發(fā)情[1]。同期發(fā)情對規(guī)模化牛場來說便于生產(chǎn)管理，促進(jìn)母牛群發(fā)情，使乏情母牛出現(xiàn)性周期活動(dòng)，是開展胚胎移植必要的過程，也便于培養(yǎng)人工授精技術(shù)人員[2]。對于牧區(qū)牛群來說，通過同期發(fā)情處理，可將母牛群集中到配種點(diǎn)，解決部分偏遠(yuǎn)牧區(qū)交通不便的問題。同期排卵—定時(shí)輸精技術(shù)是在同期發(fā)情基礎(chǔ)上發(fā)展的繁殖新技術(shù)，就是利用促性腺激素釋放激素(GnRH)、前列腺素(PG)等外源生殖激素處理母畜，根據(jù)排卵時(shí)間直接輸精，而不再需要觀察母畜發(fā)情，從而降低了工作量，也解決了養(yǎng)殖戶不會(huì)觀察牛只發(fā)情，錯(cuò)配、漏配的問題，并可提高母畜的利用率和受胎率[3]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者在奶牛、肉羊、生豬上廣泛開展了同期排卵—定時(shí)輸精技術(shù)試驗(yàn)，取得了較好的效果[4]，但同期排卵—定時(shí)輸精技術(shù)在不同品種、不同方法上應(yīng)用效果卻鮮有報(bào)道。

新疆褐牛主要分布在新疆天山北部、塔額盆地，是新中國成立以來我國自主培育的第1個(gè)乳肉兼用牛品種，具有抗病力強(qiáng)、適宜放牧等特點(diǎn)，深受廣大農(nóng)牧民養(yǎng)殖戶的喜愛[5]。近年來，隨著人工授精冷配技術(shù)在新疆褐牛上廣泛應(yīng)用，有力推動(dòng)了新疆褐牛的繁殖效率和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。但在新疆褐牛實(shí)際生產(chǎn)中，仍然存在母牛產(chǎn)后不發(fā)情，乏情，配種受胎率低，產(chǎn)犢間隔長的問題，除在生產(chǎn)管理、營養(yǎng)飼料等原因外，發(fā)情鑒定和輸精時(shí)間的把握是造成新疆褐牛繁殖效率低的重要原因。本試驗(yàn)通過比較同期發(fā)情和同期排卵—定時(shí)輸精不同處理方法在新疆褐牛上的應(yīng)用效果，旨在探索新疆褐牛效果最佳、成本最低的同期發(fā)情處理方法和同期排卵—定時(shí)輸精方法，為新疆褐牛生產(chǎn)實(shí)際提供指導(dǎo)，也為解決牧區(qū)人工授精推廣難提供方法，同時(shí)也為加快新疆褐牛選育提高和新品系選育步伐提供新的繁殖技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)地點(diǎn)選擇新疆伊犁州尼勒克縣2個(gè)新疆褐牛養(yǎng)殖合作社(I、Ⅱ)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇養(yǎng)殖合作社I中2胎以上45頭新疆褐牛健康、膘情較好母牛開展不同同期發(fā)情處理方法比較試驗(yàn)，選擇養(yǎng)殖合作社Ⅱ中2胎以上20頭新疆褐牛健康、膘情較好母牛開展不同同期排卵—定時(shí)輸精處理方法比較試驗(yàn)，2個(gè)養(yǎng)殖合作社均采用TMR飼糧飼喂，散欄飼養(yǎng)，自由采食、飲水。

1.3 試驗(yàn)藥品及凍精

孕酮為CUE-MATE孕酮栓，新西蘭產(chǎn)，含1.56 g孕酮；前列腺素為氯前列腺烯醇(PGF2α)，寧波三生生物科技有限公司產(chǎn)，0.5 mg，GnRH類似物促黃體素釋放激素A3(LHRH-A3)，寧波三生生物科技有限公司，25 μg。凍精為北京奶牛中心產(chǎn)美系褐牛凍精和德國寶牛育種中心產(chǎn)德系褐牛凍精。

1.4 同期發(fā)情、同期排卵—定時(shí)輸精處理分組

試驗(yàn)牛分為5組，即A、B、C、D、E組，A、B、C組為3種同期發(fā)情處理方法組，D、E組為2種同期排卵—定時(shí)輸精處理組。

A組：PG(PGF2α)+PG(PGF2α)法處理方法，即2次PG法，在母牛發(fā)情周期的任意一天，注射0.5 mg，2 mL PGF2α，記為第0天，在第11天再注射0.5 mg，2 mL PGF2α，之后開始仔細(xì)觀察發(fā)情情況，并做好發(fā)情時(shí)間、發(fā)情情況記錄。

B組：PG(PGF2α)法處理方法，即1次PG法，在母牛發(fā)情周期的任意一天，注射0.5 mg，2 mL PGF2α，之后觀察發(fā)情，并做好發(fā)情時(shí)間、發(fā)情情況記錄。

C組：孕酮(CIDR)+PG(PGF2α)法處理方法，即在母牛發(fā)情周期的任意一天，陰道埋CIDR栓，記為第0天，在第11天去栓，再注射0.5 mg，2 mL PGF2α，之后開始仔細(xì)觀察發(fā)情情況，并做好發(fā)情時(shí)間、發(fā)情情況記錄。

D組：GnRH(LHRH-A3)+PG(PGF2α)+GnRH(LHRH-A3)+AI，即在母牛發(fā)情周期的任意一天，注射LHRH-A3，記為第0天，第7天再注射PGF2α，在48 h后注射LHRH-A3，16～24 h內(nèi)進(jìn)行人工授精配種。

E組：孕酮(CIDR)+GnRH(LHRH-A3)+PG(PGF2α)+GnRH(LHRH-A3)+AI，即在母牛發(fā)情周期的任意一天埋植CIDR栓，并同時(shí)注射LHRH-A3，記為第0天，第7天撤CIDR栓，并同時(shí)注射PGF2α，48 h后再注射LHRH-A3，16 h后進(jìn)行人工授精配種。

1.5 妊娠檢測

人工授精配種后60 d后用直腸B超法進(jìn)行妊娠診斷，統(tǒng)計(jì)懷胎率。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

原始數(shù)據(jù)經(jīng)過Excel軟件進(jìn)行整理，用SPSS 19.0軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同同期發(fā)情處理方法母牛發(fā)情情況分析

由表1可知，3種不同同期發(fā)情處理方法母牛主要集中在12～24 h內(nèi)發(fā)情，其中12～24 h內(nèi)A組和C組處理方法母牛發(fā)情率極顯著高于B組處理方法(P<0.01)，C組比A組高出32.3%，A組和C組處理方法差異不顯著(P>0.05)；24～48 h內(nèi)C組處理方法母牛發(fā)情率最高，顯著高于A組處理方法(P<0.05)，極顯著高于B組處理方法(P<0.01)，A組處理方法極顯著高于B組處理方法(P<0.05)；48～72 h內(nèi)A組處理方法顯著高于B組和C組(P<0.05)，3種處理方法總發(fā)情率中C組最高為93.3%，A組為86.7%，B組最低為40.0%，C組與A組總發(fā)情率極顯著高于B組(P<0.01)。

表1 同期發(fā)情率分析

2.2 不同同期發(fā)情處理方法母牛發(fā)情后配種妊娠情況分析

由表2可知，經(jīng)3種同情發(fā)情處理后的3組中發(fā)情母牛數(shù)分別為13頭，6頭，14頭，對3組發(fā)情母牛進(jìn)行人工授精配種，60 d后經(jīng)直腸B超妊娠檢測定胎，A、B、C 3組情期受胎頭數(shù)分別為9頭，4頭，10頭，受胎率分別為69.2%，66.7%，71.4%，三者差異不顯著(P<0.05)。

表2 同期發(fā)情配種妊娠情況分析

2.3 不同同期排卵—定時(shí)輸精方法母牛配種妊娠情況分析

由表3可知，2種不同同期排卵—定時(shí)輸精方法在輸精時(shí)E組母牛全部發(fā)情，發(fā)情率達(dá)100%，D組發(fā)情率達(dá)到90%，發(fā)情母牛按照處理方法要求配種時(shí)間前，經(jīng)直腸檢查排卵情況，D組排卵5頭，E組排卵6頭，排卵率分別為50%，60%，二者差異顯著(P<0.05)，發(fā)情排卵率二者差異不顯著(P>0.05)，經(jīng)人工授精冷配后，60 d B超妊娠檢測定胎，總懷胎率D組與E組相同，均為50%。

表3 不同同期排卵—定時(shí)輸精方法母牛配種妊娠情況分析

3 討 論

3.1 不同同期發(fā)情處理方法新疆褐牛母牛發(fā)情情況的影響

人工授精技術(shù)的廣泛應(yīng)用，有力推動(dòng)了優(yōu)質(zhì)種公牛遺傳物質(zhì)的推廣和地方牛品種改良、育種等進(jìn)程[6]，同期發(fā)情技術(shù)可有效提高人工授精的效率，它是利用外源激素對母牛進(jìn)行處理，以提高母牛發(fā)情的同步率。對規(guī)?；B(yǎng)殖場來說，利用同期發(fā)情技術(shù)，在預(yù)定的時(shí)間對待配母畜進(jìn)行集中配種，查發(fā)情方便省力，產(chǎn)仔時(shí)間相近，統(tǒng)一管理，縮短產(chǎn)犢間隔，降低飼養(yǎng)成本，提高養(yǎng)殖效益[7]。對于牧區(qū)放牧新疆褐牛來說，利用同期發(fā)情技術(shù)，可有效提升牧區(qū)牛羊分群集中人工授精冷配點(diǎn)的工作效率，減少偏遠(yuǎn)牧區(qū)人工授精推廣難的問題。母牛在1個(gè)發(fā)情周期中可分為黃體期和卵泡期過程，PG具有溶解黃體的作用，外源注射PG后引起黃體退化造成孕酮合成和分泌量降低，解除孕酮對卵泡發(fā)育的抑制作用，卵泡恢復(fù)發(fā)育形成新的優(yōu)勢卵泡，雌激素分泌量增加，母牛表現(xiàn)發(fā)情并排卵[2]。當(dāng)運(yùn)用CIDR栓埋植在母牛陰道中，持續(xù)、緩慢釋放孕酮，撤CIDR栓后，孕酮水平急速下降，解除孕酮對卵泡發(fā)育的抑制，而誘使母牛發(fā)情并排卵則。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，利用PG、CIDR等對母牛進(jìn)行外源激素處理，2次PG法和CIDR+PG法在同期發(fā)情處理中都取得了較好的效果，2次PG法的成本要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于CIDR+PG法，因此，選用2次PG法在新疆褐牛上應(yīng)用更為合適。1次PG法發(fā)情率低的主要原因是由于PGF2α對前5 d或無黃體的母牛處理無反應(yīng)，這與李金輝等人的研究結(jié)果[8]相似。因此，若要進(jìn)一步降低同期發(fā)情處理費(fèi)用，利用1次PG法，首先應(yīng)開展母牛直腸黃體情況檢測，進(jìn)行選擇性處理。

3.2 不同同期發(fā)情處理方法新疆褐牛母牛配種妊娠情況的影響

同期發(fā)情處理后母牛配種妊娠懷胎率情況主要受配種時(shí)是否排卵的決定，同時(shí)也受到母牛膘情、飼養(yǎng)管理等方面的影響[9]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)?zāi)概橐?guī)?；B(yǎng)殖場的母牛，總體來說膘情較好，3組處理方法情期受胎率達(dá)到了66.7%以上，因此，同情發(fā)情處理技術(shù)在新疆褐牛上應(yīng)用，在配種懷胎率方面可取得較好的效果，但首先要控制好母牛膘情。同時(shí)，本試驗(yàn)中試驗(yàn)牛數(shù)較少，且在5月份氣候較適宜，同期發(fā)情率較肖杰和高慶華等研究報(bào)道同期發(fā)情率82.5%，75%高[2,10]，配種懷胎率與李靜等人的研究[11]相似。

3.3 不同同期排卵—定時(shí)輸精方法新疆褐牛母牛配種妊娠情況的影響

家畜同期排卵—定時(shí)輸精(TAI)技術(shù)是在同期發(fā)情技術(shù)上發(fā)展而來的一種家畜繁殖新技術(shù)，母畜通過外源激素處理后，使其同期發(fā)情和同期排卵，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)直接人工輸精配種[2]。Pursley等首次報(bào)道了促性腺激素釋放激素和前列腺素處理母牛達(dá)到同期排卵的目的，并對該項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行命名同期排卵—定時(shí)輸精[12]。同期排卵的基本原理為母牛發(fā)情周期的任意一天注射GnRH，促進(jìn)垂體分泌促卵泡素(FSH)和促黃體素(LH)，使卵巢上卵泡成熟并排卵，未妊娠，形成黃體，之后第7天再注射PGF2α誘導(dǎo)黃體溶解，黃體溶解使孕酮減低促進(jìn)卵泡發(fā)育，48 h后母牛發(fā)情并注射GnRH，促進(jìn)LH分泌，引起排卵。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，兩種處理方法中發(fā)情率都比較高，E組處理方法甚至達(dá)到了100%，直腸檢測排卵情況D組、E組處理方法都超過或?yàn)?0%，說明同期排卵效果較好，總懷胎率方面兩者差異不顯著。因此，從生產(chǎn)成本上來說，D組方法更具有優(yōu)勢。本試驗(yàn)中配種時(shí)間D組在16～24 h，E組在16 h，下一步在配種時(shí)間還有待于進(jìn)一步研究，以提高新疆褐牛同期排卵—定時(shí)輸精懷胎率，得出最優(yōu)技術(shù)方案。

4 結(jié) 論

新疆褐牛同期發(fā)情處理應(yīng)用2次PG(PGF2α)法、CIDR+PG法(PGF2α)都取得了較好的發(fā)情率(86.7%，93.3%)，但從處理成本上來說，2次PG(PGF2α)法更經(jīng)濟(jì)適用；若要進(jìn)一步降低同期發(fā)情處理費(fèi)用，利用1次PG法，首先應(yīng)開展母牛直腸黃體情況檢測，進(jìn)行選擇性處理。同期排卵—定時(shí)輸精宜采用GnRH(LHRH-A3)+PG(PGF2α)+GnRH(LHRH-A3)+AI方法，成本低，且受胎率較好，適宜在牧區(qū)集中人工授精冷配點(diǎn)推廣。