趙 歐

(貴州師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550001)

很多的食品中會(huì)添加食品防腐劑[1]，常添加的食品防腐劑有山梨酸和苯甲酸以及他們的鹽類等[2]，而在眾多的防腐劑中山梨酸是安全性比較高[3]，但在食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中都會(huì)規(guī)定他們的用量[4]，部分的食品中添加的防腐劑量會(huì)超過規(guī)定量[5]。本實(shí)驗(yàn)采用的是高效液相色譜法[6]測(cè)定醬油、果汁中山酸梨酸含量，各類食品的前處理方法雖有新的規(guī)定，但是還不夠簡便[7]本實(shí)驗(yàn)參考有關(guān)資料[8-9]，操作方法簡單，便于快速的檢驗(yàn)樣品中山梨酸的含量。

1 材料與試劑

1.1 儀 器

LC2000D高效液相色譜儀，天美科學(xué)儀器有限公司；T2000P色譜工作站；CQ-100B-ST型超聲波清洗機(jī)，上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)機(jī)械廠；SHB-B95型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)易有限公司；pH酸度計(jì)，福州化志科學(xué)儀器有限公司；HZY-A200電子天平，福州化志科學(xué)儀器有限公司；FD.JH.JS型玻璃砂芯過濾裝置，飛達(dá)公司。

1.2 試 劑

品防腐劑山梨酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，中檢所BW3507 ；乙酸銨(分析純)，天津市化學(xué)試劑一廠；氨水，煙臺(tái)三河化學(xué)試劑有限公司；甲醇(色譜純)，天津市科密歐化學(xué)試劑；醬油(20190709)，產(chǎn)地廣東省佛山市高明區(qū)滄州江工資園東園；瑞麗江牌芒果汁，產(chǎn)地昆明瑞麗江食品飲料有限公司；1.54 g/L乙酸銨溶液：準(zhǔn)確稱取0.3850 g乙酸銨用蒸餾水溶解，最后定容至250 mL的容量瓶中，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，備用。

2 方法與實(shí)驗(yàn)

2.1 色譜分析方法

色譜柱：LVNA-5U-C18(2)-100A色譜柱(150 mm×4.6 mm)；流動(dòng)相：甲醇+1.54 g/L乙酸銨(5+95)；柱溫：25 ℃；流速：1.5 mL/min；檢測(cè)波長：UV-230 nm；進(jìn)樣量：10 μL。山梨酸分離較好，分離度大于1.5，拖尾因子基本符合要求，結(jié)果見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品、醬油和果汁中山梨酸的分離色譜圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備

4.146 g/mL山梨酸儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0.2073 g山梨酸倒入小燒杯中，加甲醇溶解，移入50 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，放入樣品瓶中備用。

2.3 供試品溶液的制備

稱取醬油、瑞麗江牌芒果汁1.00 g分別置于10 mL比色管中，加水至9 mL，用1+10的氨水調(diào)pH至7.0，定容至10 mL刻度，經(jīng)0.45 μm濾膜離心過濾后直接進(jìn)樣。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

分別配置不同濃度的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后經(jīng)過0.45 μm濾膜過濾，分別進(jìn)樣10 μL，在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分離測(cè)定。以山梨酸各標(biāo)準(zhǔn)的濃度為橫坐標(biāo)，所得的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過回歸計(jì)算得線性回歸方程為Y=136.49x-118.00，R2=0.9990。標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖2。

圖2 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取果汁同一號(hào)10 μL，按照“2.1色譜測(cè)定方法”下測(cè)定。準(zhǔn)確吸取醬油的同一號(hào)10 μL，按照“2.1色譜測(cè)定方法”下測(cè)定。測(cè)得兩組峰面積的RDS分別為0.45%、0.87%，表明方法的精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

分別取果汁和醬油按“2.3 供試品溶液的制備”下要求平行制備5份供試液，分別進(jìn)樣測(cè)定， 測(cè)得峰面積的RSD為0.98%、1.06%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精確吸取果汁和醬油同一號(hào)供試液樣品，分別于0、2、4、8、16 h測(cè)定面積并記錄，通過計(jì)算RSD分別為1.04%和0.92%。結(jié)果表明兩種樣品在16小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 樣品測(cè)定結(jié)果

以高效液相色譜儀作為檢測(cè)儀器，按照“2.1色譜測(cè)定方法”下測(cè)定供試品溶液各組樣品進(jìn)樣10 μL，測(cè)其峰面積并記錄(見圖1)，平均含量計(jì)算結(jié)果：果汁中含山梨酸量為0.07077 g/kg(表1)，醬油中含山梨酸量為0.2894 g/kg(表2)。

表1 果汁中山梨酸的測(cè)定(n=5)

表2 醬油中山梨酸的測(cè)定(n=5)

2.4.6 加樣回收實(shí)驗(yàn)

表3 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)

果汁與醬油樣品中山梨酸的提取方法是一致的，請(qǐng)參見“2.3 供試品溶液的制備”下的制備方法。 因此加樣回收以醬油

樣品為例，稱取醬油50.00 g左右置于1.00 L容量瓶中，加入適量的標(biāo)準(zhǔn)品，加水至900 mL，用1+10的氨水調(diào)pH至7.0，定容至1.00 L刻度，經(jīng)0.45 μm濾膜離心過濾后直接進(jìn)樣，測(cè)定含量、計(jì)算回收率。結(jié)果見表3，結(jié)果表明本方法的回收率良好。

3 結(jié) 論

該方法在3.445～27.560 μg的濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系(r=0.9990)，回收率也較好。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明，HPLC法測(cè)定醬油與果汁中的山梨酸操作簡便、靈敏度高、進(jìn)樣量小、分析速度快，可作為山梨酸的快速檢測(cè)方法。中國《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[10]規(guī)定醬油中的山梨酸含量不得超過1.0 g/kg，果汁(果味)型飲料中的山梨酸含量不得超過0.5 g/kg。經(jīng)測(cè)定該品牌醬油中山梨酸的含量為0.2894 g/kg，瑞麗江芒果果汁中山梨酸的含量為0.07077 g/kg，兩種樣品中的山梨酸含量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。