黃 芳，劉明學(xué)，2*，熊 杰，陳律奇，高竹欣，陳慧明，王丹妮

1. 西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 綿陽(yáng) 621010 2. 核廢物與環(huán)境安全省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，四川 綿陽(yáng) 621010

引 言

遠(yuǎn)紅外是一種電磁輻射，因人體的紅外吸收能量處于遠(yuǎn)紅外波長(zhǎng)范圍之內(nèi)，遠(yuǎn)紅外材料能夠?qū)θ梭w細(xì)胞產(chǎn)生較強(qiáng)的共振作用。遠(yuǎn)紅外材料，作為廣泛可用的功能材料，在醫(yī)療保健上受到關(guān)注。研究表明遠(yuǎn)紅外輻射能增加生物活性，利用此性能可以進(jìn)行理療(如熱桑拿)或制作各種保健產(chǎn)品(如遠(yuǎn)紅外熱燈、 紅外保健織物、 熱敷袋等)，可增強(qiáng)相關(guān)功效[1-2]。

精油因具有抗炎和抗氧化等多種生物活性而被越來越多地用于醫(yī)療保健、 美容等領(lǐng)域，被譽(yù)為“液體黃金”。利用精油的揮發(fā)性，通過嗅吸和皮膚滲透[3]而產(chǎn)生明顯的心理、 生理反應(yīng)，從而達(dá)到醫(yī)療保健、 美容的目的。

遠(yuǎn)紅外材料結(jié)合精油的醫(yī)療保健方式受到廣泛的關(guān)注。在李云平等[4]的研究中，利用遠(yuǎn)紅外線照射結(jié)合精油按摩的方式可提高療效。另外，市面上也有將精油添加到遠(yuǎn)紅外材料制品中制成的各種理療貼如遠(yuǎn)紅外磁療貼、 遠(yuǎn)紅外艾灸貼等。但未見遠(yuǎn)紅外材料對(duì)精油與牛血清蛋白(bovine serum albumin, BSA)相互作用影響的報(bào)道。研究遠(yuǎn)紅外材料對(duì)具有生物活性的精油小分子與生物大分子的相互作用，闡述兩者相互作用在醫(yī)療保健上的作用機(jī)制，具有一定的理論與應(yīng)用價(jià)值。

小分子與大分子相互作用的研究除了光譜法，有些還會(huì)結(jié)合各種色譜、 電化學(xué)以及分子對(duì)接等方法探究其機(jī)理，但用紅外熱成像技術(shù)研究小分子與BSA大分子作用的文章還鮮有報(bào)道。利用此技術(shù)，可以全面、 整體、 動(dòng)態(tài)地采集和分析物體的溫度信息，評(píng)價(jià)能量輻射的狀況[5]。如文建等[6]利用紅外熱成像觀察光子貼的療效，發(fā)現(xiàn)紅外熱成像對(duì)光子理療貼聯(lián)合法治療慢性膝痛的療效評(píng)價(jià)具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于精油小分子或納米材料作用于BSA的研究有相關(guān)報(bào)道[7-8]，但兩者結(jié)合以及使用具有遠(yuǎn)紅外射線輻射效應(yīng)的納米材料的研究未見報(bào)道。鑒于此，選用常見的遠(yuǎn)紅外輻射材料——遠(yuǎn)紅外陶瓷粉(far-infrared ceramic powder, cFIR)，利用光譜法及紅外熱成像技術(shù)研究cFIR對(duì)玫瑰精油(rose essential oil, REO)與BSA相互作用的影響及其作用機(jī)制，為遠(yuǎn)紅外材料結(jié)合精油的理療研究及應(yīng)用提供相關(guān)的科學(xué)基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

熒光分光光度計(jì)(F-7000，日本日立公司)；鈉燈(上海亞明照明有限公司)；紅外成像儀(TiS20，福祿克公司)；傅里葉變換紅外吸收光譜儀(Nicolet5700，美國(guó)熱電儀器公司)；紫外分光光度計(jì)(U-3900H，天美科學(xué)儀器有限公司)。

玫瑰護(hù)理精油(廣州美頌生物科技有限公司)；普通陶瓷粉(common ceramic powder，CCP)、 遠(yuǎn)紅外陶瓷粉(茂川礦業(yè))；BSA(阿拉丁試劑股份有限公司)，純度>98%；其余所用試劑均為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 溶液的配制

準(zhǔn)確稱取10.0 mg遠(yuǎn)紅外陶瓷粉，溶解在10.0 mL無水乙醇中，使用封口膜密封后超聲1 h后，用0.5 mol·L-1pH為7.4的Tris-HCl緩沖液配制成0.1 mg·mL-1的cFIR懸濁液；CCP懸濁液的配制方法同cFIR；準(zhǔn)確稱取0.5 g玫瑰精油，用丙二醇定容至10.0 mL，配制成0.05 g·mL-1的精油懸濁液；準(zhǔn)確稱取165.4 mg BSA，用Tris-HCl定容至50.0 mL，配制成5.0×10-5mol·L-1的BSA儲(chǔ)備液，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 方法

1.3.1 熒光光譜、 同步光譜的測(cè)定

準(zhǔn)確移取濃度為5.0×10-6mol·L-1的BSA溶液3.0 mL于比色管中，逐次加入5.0 μL的REO懸濁液，即為BSA-REO二元體系，依次測(cè)定熒光光譜。在另一組實(shí)驗(yàn)中，先逐次加入5.0 μL的cFIR懸濁液，依次測(cè)定；之后，向二元體系中逐次加入5.0 μL的Oil懸濁液，即為(BSA-cFIR)-REO三元體系，依次測(cè)定。在測(cè)試CCP對(duì)REO與BSA相互作用影響的熒光光譜時(shí)，只需將cFIR換成CCP即可，其余相同。

在熒光分光光譜的掃描中，參數(shù)設(shè)置為：激發(fā)波長(zhǎng)λex為280 nm，掃描范圍為200～550 nm，掃描速度為240 nm·min-1，狹縫寬度為5 nm。

同步熒光光譜的掃描中，Δλ=15 nm與Δλ=60 nm對(duì)應(yīng)的起始發(fā)射波長(zhǎng)分別為255和300 nm，激發(fā)波長(zhǎng)范圍均為240～340 nm。

1.3.2 三維熒光光譜的測(cè)定

在熒光分光光度計(jì)中測(cè)試常溫條件下cFIR和REO與BSA相互作用時(shí)的三維光譜；參數(shù)設(shè)置為：激發(fā)波長(zhǎng)λex為200～450 nm，發(fā)射波長(zhǎng)200～500 nm，掃描速度1 200 nm·min-1，掃描間距為5 nm，狹縫寬度為5 nm。在BSA體系中逐次加入5.0 μL REO和5.0 μL cFIR，共5次。

1.3.3 紅外光譜的測(cè)定

室溫下測(cè)定不同體系的傅里葉變換紅外光譜(FTIR)，分辨率為4 cm-1，掃描范圍為4 000～400 cm-1；將樣品均勻地鋪滿KBr晶片，掃描樣品光譜；用Omnic和Peakfit軟件進(jìn)行處理。

1.3.4 紅外成像的測(cè)定

用面膜模擬人的皮膚來測(cè)試紅外響應(yīng)溫度變化。將面膜剪成大小近似的小塊，晾干；然后將面膜放在不同的體系的離心管中，一段時(shí)間后取出來，晾干。在10 cm附近設(shè)鈉燈照射，用紅外成像儀測(cè)定在鈉燈照射下不同面膜的響應(yīng)溫度。將紅外成像儀設(shè)為自動(dòng)模式，每5 s捕捉一張，一次設(shè)置捕捉30張，在不同時(shí)間段重復(fù)實(shí)驗(yàn)，得到180組數(shù)據(jù)，用單因素方差分析的方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同體系的熒光光譜分析

圖1給出了陶瓷粉和精油對(duì)BSA猝滅曲線。熒光猝滅是由于猝滅劑與生色基團(tuán)的相互接觸而引起的熒光量子產(chǎn)率下降[9]。猝滅劑對(duì)蛋白質(zhì)的熒光猝滅分為靜態(tài)猝滅、 動(dòng)態(tài)猝滅。動(dòng)態(tài)猝滅主要是由分子擴(kuò)散引起，靜態(tài)猝滅主要是由于分子間相互作用形成復(fù)合物引起。由圖1可知，在激發(fā)波長(zhǎng)為280 nm的條件下，BSA最大熒光峰出現(xiàn)在340 nm左右。REO和cFIR與BSA作用的體系中，隨著猝滅劑的不斷加入，熒光強(qiáng)度逐漸下降，峰形也出現(xiàn)了略微的藍(lán)移；表明陶瓷粉和精油與BSA間發(fā)生了相互作用與能量轉(zhuǎn)移，使BSA的內(nèi)源性熒光發(fā)生了猝滅。而CCP-REO與BSA作用的體系，熒光強(qiáng)度也下降，說明與BSA也發(fā)生了相互作用，但并無規(guī)律。因此，在后續(xù)的研究中主要對(duì)cFIR-REO進(jìn)行探討。

圖1 不同體系與BSA作用的熒光猝滅曲線Fig.1 Fluorescent quenching curves of BSA in different systems(a): (BSA-cFIR)-REO; (b): BSA-REO; (c): (BSA-CCP)-REO;(0—14): c(BSA)=5×10-6 mol·L-1; c(cFIR/CCP)(0—7): (0，0.19，0.38，0.57，0.76，0.95，1.14，1.33)×10-5 mol·L-1 (8—14): c(RE0)=(0.19，0.38，0.57，0.76，0.95，1.14，1.33)×10-4 mol·L-1 (15—22): c(BSA)=5×10-6 mol·L-1; c(RE0) (15—22): (0，0.19，0.38，0.57，0.76，0.95，1.14，1.33)×10-4 mol·L-1

假設(shè)遠(yuǎn)紅外陶瓷粉和/或精油與BSA作用的機(jī)制為動(dòng)態(tài)猝滅，利用Stern-Volmer方程(1)對(duì)不同體系的猝滅情況進(jìn)行計(jì)算，將結(jié)果列于表1中。

表1 二元/三元體系的Stern-Volmer常數(shù)Table 1 Stern-Volmer constants in binary/ternary systems

(1)

在式(1)中，F(xiàn)0和F分別代表未加入猝滅劑和加入猝滅劑時(shí)蛋白質(zhì)的熒光強(qiáng)度，KSV為Stern-Volmer熒光猝滅常數(shù)；Kq為動(dòng)態(tài)猝滅速率常數(shù)；[Q]為所加猝滅劑的濃度；τ0為不存在猝滅劑的情況下大分子物質(zhì)生物體內(nèi)的內(nèi)源熒光壽命(τ0≈10-8s)。

據(jù)報(bào)道，各類熒光猝滅劑對(duì)生物大分子的最大動(dòng)態(tài)猝滅速率常數(shù)為2.0×1010L·mol-1·s-1[7]；由表1可知，兩個(gè)體系的動(dòng)態(tài)猝滅常數(shù)均大于最大值，故判斷cFIR-REO與REO對(duì)BSA的猝滅機(jī)制均為靜態(tài)猝滅。其中REO的猝滅機(jī)制與Leila等[8]研究的百里香酚相似；另外，Sekar等[10]證明揮發(fā)油納米乳共軛物、 Riaz等[11]證明蓖麻油聚氨酯納米復(fù)合材料對(duì)蛋白質(zhì)的猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅。

2.2 結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n與表觀結(jié)合常數(shù)Ka

對(duì)于靜態(tài)猝滅方式，不同體系的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n與結(jié)合常數(shù)都可由靜態(tài)猝滅雙對(duì)數(shù)式(2)計(jì)算。將結(jié)果列于表2中。

表2 不同體系下的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n、 結(jié)合常數(shù)KaTable 2 The binding site number n and the binding constant Ka of different system

lg[(F0-F)]/F=nlg[Q]+lgKa

(2)

由表2可知，在cFIR的參與下，REO與BSA相互作用的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n與結(jié)合常數(shù)Ka明顯提高。兩個(gè)體系的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)分別與百里香酚[8]、 揮發(fā)油納米乳[10]類似。在三元體系中，n的值近似為1，說明BSA在cFIR和REO上存在一個(gè)有效結(jié)合位點(diǎn)；另外，結(jié)合常數(shù)達(dá)到了103(L·mol-1)以上，進(jìn)一步說明二者與BSA之間存在強(qiáng)有效的作用力，cFIR的存在可促進(jìn)REO與BSA的結(jié)合，其可能是REO與cFIR之間存在協(xié)同作用，使得與BSA作用時(shí)結(jié)合常數(shù)增大。

2.3 cFIR-REO對(duì)BSA構(gòu)象的影響

2.3.1 同步熒光光譜分析

因同步熒光光譜具有簡(jiǎn)單、 避免擾動(dòng)等優(yōu)點(diǎn)常用來研究蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化。熒光峰的位置與蛋白質(zhì)的構(gòu)象相關(guān)，極性的變化常常引起最大吸收波長(zhǎng)的變化，若發(fā)生紅移，則說明氨基酸周圍極性增大，反之減小。當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)之間的Δλ設(shè)置為15和60 nm時(shí)，同步熒光光譜給出了Tyr和Trp殘基的特征信息[10]。(BSA-cFIR)-REO體系的同步熒光光譜如圖2所示。

由圖2可以看出，在(BSA-cFIR)-REO體系中，Trp和Tyr的熒光強(qiáng)度都降低，Trp熒光峰規(guī)律性的下降，而Tyr在只加cFIR時(shí)逐漸減低，繼續(xù)加入REO后則無梯度規(guī)律性；另外，Trp的最大吸收峰出現(xiàn)了輕微的藍(lán)移，而Tyr的熒光峰幾乎沒有移動(dòng)，且Trp猝滅程度大于Tyr，說明REO和cFIR與BSA的結(jié)合更偏向色氨酸殘基，使Trp周圍的極性降低，疏水性增加，導(dǎo)致BSA構(gòu)象發(fā)生略微的變化。同步熒光光譜的說明cFIR的加入會(huì)使BSA的Trp暴露在一個(gè)相對(duì)疏水的環(huán)境。Trp的行為與Mahanthappa等[7]研究的納米硫化銅、 Riaz等[11]研究的兩親性材料類似。

圖2 (BSA-cFIR)-REO同步熒光光譜Fig.2 (BSA-cFIR)-REO synchronous fluorescence spectrum(a)：Δλ=60 nm；(b)：Δλ=15 nm c(BSA)=5×10-6 mol·L-1; c(cFIR)(0—5): (0，0.19，0.38，0.57，0.76，0.95)×10-5 mol·L-1; c(REO) (6—10): (0，0.19，0.38，0.57，0.76，0.95)×10-4 mol·L-1

2.3.2 三維熒光光譜分析

三維熒光光譜常用來揭示小分子對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響。為了進(jìn)一步探究cFIR和REO與BSA作用的影響，測(cè)定了BSA-REO-cFIR體系的三維熒光光譜圖。BSA的三維熒光圖見圖3。將所有體系的三維熒光光譜特征參數(shù)列于表3中。

圖3 BSA的三維熒光光譜圖Fig.3 Three-dimensional fluorescence spectrum of BSA

Peak a主要代表瑞利散射峰，常用來表示大分子直徑的變化。由表3可知隨著REO和cFIR的不斷加入Peak a的強(qiáng)度不斷增強(qiáng)，說明兩者與BSA相互作用形成了締合物，締合物使體系的摩爾質(zhì)量增大，導(dǎo)致瑞利光散射增強(qiáng)而內(nèi)源性熒光降低[7]。

Peak 1代表Tyr和Trp的熒光特征峰，其變化主要與氨基酸周圍極性的改變有關(guān)；Peak 2是BSA多肽骨架結(jié)構(gòu)的熒光光譜特征峰，該峰是由多肽骨架發(fā)生π→π*躍遷引起的，其變化與BSA二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)[7]；由表3可知，Peak 1和Peak 2的熒光強(qiáng)度隨著猝滅劑的加入在一定程度上都在不斷降低，且Peak 2伴隨輕微藍(lán)移，說明了BSA與cFIR和REO結(jié)合后多肽骨架受到影響，疏水性增強(qiáng)，以至BSA二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生略微的變化。該結(jié)論與同步熒光光譜一致。

表3 不同體系中的三維熒光光譜特征參數(shù)Table 3 Characteristic parameters of three-dimensional fluorescence spectra of different systems

Campana等[12]利用中子反射的研究觀察到BSA在油水界面有更高的吸附作用，提出在疏水性較強(qiáng)的界面處，蛋白質(zhì)的吸附性更高的結(jié)論。這一結(jié)論為該結(jié)果提供一定的論據(jù)，說明加入cFIR后，使蛋白質(zhì)處在相對(duì)疏水的環(huán)境，該環(huán)境更利于REO與BSA的結(jié)合。

2.3.3 傅里葉變換紅外光譜分析

為定量分析BSA蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，利用Gaussian去卷積和二階導(dǎo)數(shù)擬合對(duì)酰胺Ⅰ帶進(jìn)行處理，如圖4所示。根據(jù)擬合的結(jié)果，計(jì)算BSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)比例。由表4可知，隨著cFIR，REO和cFIR-REO的加入，α-helix的比例均略微降低，其他結(jié)構(gòu)含量升高，說明兩者的加入會(huì)使蛋白質(zhì)分子變得更加松散，BSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生略微變化。另外，REO和cFIR共同作用時(shí)α-helix含量為26.66%，該值介于cFIR與REO單獨(dú)作用的值之間，說明二者存在協(xié)同作用。

圖4 不同體系的酰胺Ⅰ帶擬合圖Fig.4 Amide Ⅰ band fitting maps for different systems(a): BSA; (b): BSA-cFIR; (c): BSA-REO; (d): BSA-cFIR-REO

表4 不同體系的二級(jí)結(jié)構(gòu)擬合結(jié)果Table 4 Fitting results of secondary structures for different systems

2.4 從BSA到REO-cFIR的能量轉(zhuǎn)移

2.4.1 結(jié)合距離計(jì)算

根據(jù)F?rster非輻射能量轉(zhuǎn)移理論[14]，若供體與受體之間滿足以下三個(gè)條件，將會(huì)發(fā)生非輻射能量轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致熒光猝滅：①供體能夠給出熒光；②供體的熒光光譜與受體的紫外光譜有充分的重疊；③供體與受體的結(jié)合距離小于7 nm。根據(jù)此理論，非輻射能量轉(zhuǎn)移效率E、 供體與受體之間的結(jié)合距離r、 臨界能量轉(zhuǎn)移距離R0及光譜的重疊積分J可由式(3)—式(5)計(jì)算

(3)

(4)

J=∑F(λ)ε(λ)λ4Δλ/∑F(λ)Δλ

(5)

式中，K2為偶極空間取向因子，一般取平均值2/3；φ為量子產(chǎn)率，對(duì)于BSA，取0.118[14]；n為介質(zhì)的折射率，取水和有機(jī)物的平均值1.336；J為供體的熒光光譜與受體的紫外光譜的重疊積分；F與F0分別為受體存在與不存在時(shí)BSA的熒光強(qiáng)度；ε為受體在相應(yīng)波長(zhǎng)下的摩爾吸收系數(shù)[14]。圖5給出了cFIR存在或不存在時(shí)，BSA的熒光光譜與REO的紫外光譜重疊圖。

圖5 有(a)無(b)cFIR時(shí)BSA發(fā)射光譜與REO紫外光譜重疊圖Fig.5 The overlap of the emission spectrum of BSA and UV spectrum of REO with (a) or without (b) cFIR in the systems

利用Origin計(jì)算出當(dāng)cFIR存在與不存在時(shí)各個(gè)物理量的值，將結(jié)果列于表5中。

表5 有無cFIR時(shí)F?rster非輻射能量轉(zhuǎn)移特征參數(shù)Table 5 Characteristic parameters of nonradiative energy transfer of F?rster with or without cFIR

由表5的結(jié)果可知，兩個(gè)體系的結(jié)合距離都小于7 nm，說明在cFIR存在或不存在的情況下，REO對(duì)BSA熒光靜態(tài)猝滅的同時(shí)也伴隨著非輻射能量轉(zhuǎn)移；R0

2.4.2 不同體系對(duì)熱輻射的響應(yīng)分析

紅外熱成像是利用物體不同的輻射能力和對(duì)紅外線的反射強(qiáng)弱，將不可見的紅外輻射變成可見的熱圖像。紅外熱成像圖其實(shí)就是物體溫度分布的圖像。圖6展現(xiàn)了在鈉燈的照射下拍攝不同體系的特征紅外熱成像圖。

圖6 鈉燈照射下不同體系面膜的紅外熱成像圖(紅色區(qū)域代表面膜)Fig.6 Thermograph of the mask in different systems irradiated by sodium lamp (red area represents mask)

從圖6可以得出，在鈉燈照射下面膜的響應(yīng)溫度高于周圍的溫度。重復(fù)6次實(shí)驗(yàn)，將180組數(shù)據(jù)取平均值作圖，利用SPSS軟件，利用LSD法進(jìn)行方差分析，結(jié)果如圖7所示。

圖7 不同體系的紅外響應(yīng)溫度情況注：用LSD法進(jìn)行多重比較，標(biāo)有不同字母表示組間差異顯著(p<0.05)，標(biāo)有相同字母表示組間差異不顯著Fig.7 Infrared response temperature of different systemsNote: Multiple comparisons are performed using the LSD method. Different letters of an alphabet are used to indicate significant differences between groups (p<0.05), and the same letters are used to indicate no significant differences between groups

圖6、 圖7結(jié)果顯示，純cFIR和BSA-cFIR體系在鈉燈照射后呈現(xiàn)最高的溫度響應(yīng)(兩者無顯著差異)，其次是純BSA、 純CCP、 純REO及BSA-CCP體系(四組間無顯著差異，與純cFIR和BSA-cFIR體系差異顯著，p<0.05)；溫度響應(yīng)最低的是BSA-REO體系(p<0.05)，而在該體系中加入陶瓷粉后(BSA-cFIR-REO體系和BSA-CCP-REO體系)溫度會(huì)升高，但仍然低于其他組(p<0.05)。這些現(xiàn)象說明單一體系、 二元體系、 三元體系呈現(xiàn)迥異的溫度響應(yīng)特征；與單一體系相比，精油可使生物分子的溫度降低，而cFIR可使生物分子溫度升高；共同作用時(shí)，cFIR的加入會(huì)使BSA-REO體系響應(yīng)的溫度增加，即熱效應(yīng)會(huì)增加(p<0.05)。按照李云平[4]等的說法，這個(gè)熱效應(yīng)可起擴(kuò)張血管、 加速新陳代謝等作用。與普通陶瓷粉相比，遠(yuǎn)紅外陶瓷粉的熱效應(yīng)更顯著。另一方面，用紅外成像技術(shù)用于研究小分子/納米顆粒與BSA之間相互作用受客觀因素的影響大，還需更廣泛的研究進(jìn)一步闡明其作用。

3 結(jié) 論

利用熒光光譜法得出REO和cFIR與BSA的作用機(jī)制與結(jié)合情況，以此基礎(chǔ)再繼續(xù)用各種分析方法研究REO和cFIR對(duì)BSA構(gòu)象的影響，最后用紅外熱成像技術(shù)表征二者對(duì)BSA能量輻射的影響?；谝陨系姆治觯傻贸鋈缦聨c(diǎn)結(jié)論：(1)熒光光譜法表明無論遠(yuǎn)紅外陶瓷粉是否存在，BSA與精油之間都存在相互作用和熒光猝滅，且主要作用機(jī)制主要為靜態(tài)猝滅；通過計(jì)算結(jié)合常數(shù)Ka與結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n表明遠(yuǎn)紅外陶瓷粉的加入會(huì)使精油與BSA的結(jié)合更加牢靠；(2)同步熒光光譜、 三維熒光光譜和FTIR的結(jié)果表明遠(yuǎn)紅外陶瓷粉和精油對(duì)BSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生略微的變化，兩者使氨基酸周圍的極性降低，疏水性增加，同時(shí)通過形成締合物的方式對(duì)BSA的內(nèi)源性熒光產(chǎn)生影響；F?rster非輻射能量轉(zhuǎn)移距離的計(jì)算進(jìn)一步表明無論遠(yuǎn)紅外陶瓷粉是否存在，精油與BSA之間都發(fā)生非輻射能量轉(zhuǎn)移，同時(shí)絡(luò)合物BSA-cFIR的形成改變了BSA的構(gòu)象，使其與精油的結(jié)合更加容易；(3)紅外熱成像結(jié)果表明遠(yuǎn)紅外材料的加入能提高BSA-REO體系響應(yīng)的溫度，具有熱效應(yīng)。

因此，具有納米尺寸效應(yīng)和遠(yuǎn)紅外射線輻射的納米紅外線陶瓷粉，在與精油共同作用于生物分子時(shí)，可通過形成締合物影響體系的微環(huán)境，從而影響熒光特征與能量傳遞。本研究結(jié)果可為精油結(jié)合遠(yuǎn)紅外材料在醫(yī)療保健上的進(jìn)一步應(yīng)用及機(jī)理研究提供參考。