孔敏　姚明　楊茂憲　俞聰聰　周煦燕　袁孝忠　施云超　趙文靜　徐龍生

[摘要] 目的 探討內(nèi)窺鏡輔助插管與透射光插管法兩種直視下氣管插管方法在大鼠插管中的應(yīng)用價(jià)值。 方法 40只SD大鼠隨機(jī)分為內(nèi)窺鏡輔助插管組（A組）和透射光插管組（B組），每組20只。比較兩組氣管插管操作時(shí)間、插管次數(shù)、大鼠麻醉蘇醒首次進(jìn)食時(shí)間、插管一次成功率和大鼠一周存活率。 結(jié)果 A組氣管插管操作時(shí)間為（21.25±4.17）s，顯著短于B組（26.25±7.55）s，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.016）;A組插管次數(shù)為（1.05±0.22）次，與B組（1.25±0.55）次比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.144）;A組大鼠麻醉蘇醒首次進(jìn)食時(shí)間為（123.85±16.32）min，與B組（147.25±32.69）min比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008）;A組插管一次成功率為95.0%，與B組（80.0%）相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.342）;兩組大鼠一周存活率均為100.0%。 結(jié)論 內(nèi)窺鏡輔助插管組能夠縮短氣管插管操作時(shí)間，改善麻醉蘇醒后首次進(jìn)食時(shí)間。

[關(guān)鍵詞] 大鼠;氣管插管;內(nèi)窺鏡;透射光

[中圖分類號(hào)] R-332? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）14-0038-04

[Abstract] Objective To explore the application value of the 2 methods of tracheal intubation under direct vision in rats， including endoscope-assisted intubation and transmission light intubation. Methods 40 SD rats were randomly divided into endoscope-assisted intubation group （group A） and transmission light intubation group （group B）， with 20 rats in each group. Between the two groups， the tracheal intubation operation duration， number of intubation operations， the first feeding time of rats after awakening from anesthesia， one-time success rate of intubation and the one-week survival rate of rats were compared. Results The tracheal intubation operation duration? in group A was（21.25±4.17）s， which was different from that in group B （26.25±7.55） s， with statistical significance（P=0.016）. The number of intubation operations in group A was（1.05±0.22）， which was different from that in group B（1.25±0.55）， but with no statistical significance（P=0.144）. When the first feeding time of rats after awakening from anesthesia was compared between group A（123.85±16.32） min and group B（147.25±32.69） min， the difference was statistically significant（P=0.008）. When the one-time success rate of intubation in group A（95.0%） was compared with that in group B（80.0%）， the difference was not statistically significant（P=0.342）. The one-week survival rate of rats in both groups was 100.0%. Conclusion Endoscopic assisted intubation group can have the tracheal intubation operation duration shortened and the first feeding time after awakening from anesthesia improved.

[Key words] Rat; Tracheal intubation; Endoscope;Transmission light

氣管插管可能導(dǎo)致喉痙攣、喉頭水腫，甚至誤入食管引起縱隔血腫等，導(dǎo)致機(jī)體的高應(yīng)激狀態(tài)[1]。建立急性呼吸窘迫綜合征、肺纖維化等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型也需要?dú)夤懿骞躘2]。某些需要大鼠作為研究對(duì)象的實(shí)驗(yàn)如心肺復(fù)蘇、肺臟缺血再灌注等研究，需要?dú)夤懿骞芎筮M(jìn)行呼吸機(jī)輔助通氣[3]。大鼠氣管插管前，需進(jìn)行全身麻醉，麻醉藥物引起氣道分泌物增多，阻塞呼吸道導(dǎo)致動(dòng)物窒息，降低實(shí)驗(yàn)成功率[4]?？梢晽l件下暴露聲門，可降低氣管插管時(shí)的損傷，提高氣管插管成功率[5]。內(nèi)窺鏡輔助插管法與透射光插管法兩種方法均可以顯示聲門，但氣管插管成功率、所用時(shí)間等方面在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中尚未見(jiàn)報(bào)道。本文旨在探討內(nèi)窺鏡輔助插管與透射光插管法兩種直視下氣管插管方法在大鼠插管中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

SD雄性大鼠40只，體重250～300 g，由南京市青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)購(gòu)買，許可證號(hào)：SCXK（蘇）2017-0001。電子內(nèi)窺鏡（深圳浩特爾電子技術(shù)有限公司）、氣管插管（中國(guó)新航科技有限公司）、激光筆（深圳晶鼎光電子有限公司）、操作臺(tái)（中國(guó)新航科技有限公司）、電子秒表計(jì)時(shí)器（深圳市騰博訊科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組? 按隨機(jī)數(shù)字法分為內(nèi)窺鏡輔助插管組（A組）和透射光插管組（B組）兩組，A組為內(nèi)窺鏡輔助插管組，即采用內(nèi)窺鏡輔助插管法氣管插管;B組為透射光插管組，即采用透射光插管法氣管插管，每組20只。

1.2.2 插管前準(zhǔn)備? 術(shù)前12 h禁食，不禁飲。戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉3～5 min，大鼠翻正反射消失后，將大鼠仰面固定在手術(shù)操作臺(tái)，操作臺(tái)與水平面呈45°斜面。用橡皮筋將大鼠上頜門齒向后拉牽引固定，將鼠舌向外拉出口腔。用棉簽清除咽喉部黏液。

1.2.3 操作過(guò)程? A組：連接電子內(nèi)窺鏡和電腦，將電子內(nèi)窺鏡放入大鼠口腔中，在電腦顯示屏上可顯示會(huì)厭和聲門，在大鼠聲門開(kāi)啟時(shí)將氣管插管插入聲門。B組：將激光筆緊貼大鼠頸部，激光筆的光線穿過(guò)頸部皮膚和氣管照亮大鼠喉部，可見(jiàn)大鼠喉部有一亮區(qū)，聲門隨著大鼠呼吸運(yùn)動(dòng)開(kāi)啟和閉合。大鼠吸氣時(shí)將氣管導(dǎo)管插入。氣管插管完成后立即判斷氣管插管是否成功。判斷氣管插管成功的標(biāo)準(zhǔn)：連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，可見(jiàn)大鼠呼吸頻率、呼吸運(yùn)動(dòng)幅度與呼吸機(jī)一致。若插管不成功，立即拔除氣管導(dǎo)管。

1.3觀察指標(biāo)

不同插管方法術(shù)中所見(jiàn)喉部形態(tài)、氣管插管操作時(shí)間（A組：打開(kāi)電子內(nèi)窺鏡到確定插管成功所需時(shí)間;B組：激光筆緊貼大鼠頸部到確定插管成功所需時(shí)間，以s為單位）、插管次數(shù)、蘇醒首次進(jìn)食時(shí)間（以min為單位）、插管一次成功率、、一周存活率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用Fisher確切概率法檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩種插管法觀察大鼠聲門顯露

電子內(nèi)窺鏡法可以清晰觀察到喉咽部會(huì)厭、聲門裂（圖1a），聲門隨著呼吸運(yùn)動(dòng)周期性開(kāi)啟和閉合，可觀察到氣管插管進(jìn)入聲門的過(guò)程。透視法可清晰觀察到大鼠聲門口出現(xiàn)的透亮區(qū)（圖1b）。隨著呼吸運(yùn)動(dòng)的改變透亮區(qū)范圍周期性變大或變小，插管完成后透亮區(qū)消失。整個(gè)插管過(guò)程中可感覺(jué)導(dǎo)管頭端與氣管環(huán)相互摩擦產(chǎn)生的阻澀感。

2.2 兩組大鼠插管操作時(shí)間、插管次數(shù)、蘇醒首次進(jìn)食時(shí)間比較

A組插管操作時(shí)間為（21.25±4.17）s，顯著短于B組的（26.25±7.55）s，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.016）;A組插管次數(shù)為（1.05±0.22）次，B組（1.25±0.55）次，兩組插管次數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.144）;A組蘇醒首次進(jìn)食時(shí)間為（123.85±16.32）min，顯著短于B組的（147.25±32.69）min，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008）。見(jiàn)表1。

2.3 兩組大鼠插管一次成功率、一周存活率比較

A組插管一次成功率為95.0%，B組插管一次成功率為80.0%，兩組插管一次成功率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.342>0.05）;兩組大鼠一周內(nèi)存活率均為100.0%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

隨著建立復(fù)雜臨床模型的迫切需求以及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中更復(fù)雜、長(zhǎng)時(shí)間的處理手段，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生因窒息而死亡導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的保障措施必不可少，氣管切開(kāi)行機(jī)械通氣，創(chuàng)傷大，影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物恢復(fù)，不適合行為學(xué)監(jiān)測(cè)[6]，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行氣管插管是創(chuàng)傷小、最有效的方法，本研究比較了兩種插管方式在大鼠中的應(yīng)用，內(nèi)窺鏡輔助插管組大鼠較透射光插管組所用時(shí)間更少，進(jìn)食時(shí)間更早。

大鼠氣道口徑大小影響經(jīng)氣管內(nèi)給藥復(fù)制動(dòng)物模型的實(shí)施，由于氣管口徑小，在復(fù)制動(dòng)物模型過(guò)程中氣道阻塞、引起窒息等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡而影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程及效果。既往的研究表明，大鼠體重在250～300 g，經(jīng)氣管內(nèi)給藥可減少上述并發(fā)癥的發(fā)生[7]。成年大鼠聲門張開(kāi)時(shí)的內(nèi)徑為1.5～2.5 mm。本研究選擇1.7 mm外徑的氣管插管，所有大鼠插管成功，說(shuō)明該型號(hào)的氣管插管適合250～300 g大鼠。由于麻醉藥物會(huì)引起氣道分泌物增多，插管前需要及時(shí)清理分泌物保證視野清晰，有利于大鼠咽部結(jié)構(gòu)的暴露，便于插管實(shí)施。

由于大鼠口腔狹長(zhǎng)，其縱軸遠(yuǎn)大于口腔橫軸，外來(lái)光源進(jìn)入咽喉部不佳，聲門暴露困難，經(jīng)口插管具有一定的挑戰(zhàn)性[8]。透射光插管法減輕了光線經(jīng)口腔進(jìn)入聲門的難度，改善了咽喉部亮度[9-11]。電子內(nèi)窺鏡插管法可以通過(guò)顯示屏，清晰觀察聲門及其周圍組織，將氣管插管輕柔的插入聲門，完成明視插管[12-15]。透射光插管法能夠觀察到聲門位置，成功完成氣管插管。但對(duì)咽喉部結(jié)構(gòu)分辨能力差，不熟練者易會(huì)引起咽喉部損傷;電子內(nèi)窺鏡插管法在圖像引導(dǎo)下將插管直接送入氣管，減少對(duì)咽喉部周圍組織的損傷，對(duì)于新進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室研究人員有很好的輔助幫助作用，可縮短插管時(shí)間，大鼠恢復(fù)較快，麻醉蘇醒后進(jìn)食時(shí)間明顯縮短。

目前報(bào)道的大鼠氣管插管方法包括有創(chuàng)插管法和無(wú)創(chuàng)插管法。有創(chuàng)插管法主要包括氣管切開(kāi)插管法、逆行插管法[16-17]。有創(chuàng)插管法在操作過(guò)程中容易引起出血增加窒息風(fēng)險(xiǎn)，甚至引起術(shù)后感染，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果[18]。無(wú)創(chuàng)插管法主要是包括盲探插管法、額鏡、耳鏡輔助插管法、光導(dǎo)纖維輔助插管法等。盲探插管法，需要初學(xué)者進(jìn)行一定程度的訓(xùn)練，不斷實(shí)踐，積累經(jīng)驗(yàn)，熟練插管技術(shù)[19]。額鏡、耳鏡輔助插管法、光導(dǎo)纖維輔助插管法能夠完成插管，但是需要一定的設(shè)備[20]。采用不同的體位對(duì)插管過(guò)程產(chǎn)生不同的影響。在操作過(guò)程中，保持大鼠口軸線、咽軸線、喉軸線成一條直線，避免氣道牽拉扭曲，能夠降低氣管插管難度。在臨床大力發(fā)展可視化技術(shù)的今天，將可視化技術(shù)應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)研究中，能降低對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的不必要損傷，提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在造模過(guò)程中的存活率，改善動(dòng)物的生活質(zhì)量，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性，特別是在一些需要進(jìn)行行為學(xué)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)中，減少插管損傷，能減少因損傷對(duì)行為學(xué)測(cè)定的干擾。