杜顯龍 李 卓 孫雨薇 郭 婉

失眠是困擾老年人的常見臨床問題，我國(guó)老年人群體中存在睡眠障礙的患病率為47.2%，女性高于男性，隨著年齡的升高患病率逐步升高[1]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中記載：“補(bǔ)中益肝，堅(jiān)筋骨，助陰氣，皆酸棗仁之功也。”明代李時(shí)珍《本草綱目》中記載，棗仁“熟用療膽虛不得眠，煩渴虛汗之癥；生用療膽熱好眠，皆足厥陰少陽(yáng)藥也。”臨床研究表明，食用酸棗仁有寧?kù)o安神、養(yǎng)肝斂汗功效，同時(shí)也可以降血壓、降血脂，是失眠、神經(jīng)衰弱人群的不二之選[2]。據(jù)《本草綱目》記載，珍珠具有鎮(zhèn)靜安神、養(yǎng)陰息風(fēng)、明目消翳、解毒生肌等功效。有報(bào)道珍珠具有改善睡眠作用[3]。珍珠中含多種氨基酸、微量元素及牛磺酸[4]，主要化學(xué)成分碳酸鈣水解后除易被機(jī)體吸收，利于牙齒、骨骼生長(zhǎng)發(fā)育和保持血液電解質(zhì)平衡，也有一定的安神作用。本品在酸棗仁和珍珠粉的基礎(chǔ)上還添加了茯苓提取物和遠(yuǎn)志提取物。

本試驗(yàn)以小鼠為研究對(duì)象，研究酸棗仁珍珠粉膠囊對(duì)正常小鼠改善睡眠功能的影響。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[5]，對(duì)酸棗仁珍珠粉膠囊進(jìn)行改善睡眠功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

1.材料與方法

1.1 樣品 酸棗仁珍珠粉膠囊由某公司提供。人體口服推薦量為每日2次，每次2粒，成人體重按60kg計(jì)算，折合劑量0.02g/(kg·bw)。酸棗仁珍珠粉膠囊含有酸棗仁提取物、珍珠粉、茯苓提取物、遠(yuǎn)志提取物等。

1.2 動(dòng)物 長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供SPF級(jí)昆明種雌性小鼠120只。

1.3 實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件 實(shí)驗(yàn)條件為屏障環(huán)境。溫度23～24℃，濕度52%～54%。

1.4 儀器與試劑 秒表、電子天平、生理鹽水、戊巴比妥鈉、巴比妥鈉。

1.5 方法

1.5.1 劑量設(shè)定：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別為延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)Ⅰ組)、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)和直接睡眠試驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)Ⅱ組)、巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)Ⅲ組)，三組實(shí)驗(yàn)組再根據(jù)動(dòng)物體重隨機(jī)分為四個(gè)亞組，每組10只。設(shè)對(duì)照組及低[0.l0g/(kg·bw)]、中[0.20g/(kg·bw)]、高[0.60g/(kg·bw)]三組劑量(分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍)。試驗(yàn)時(shí)，分別取l.00g、2.00g、6.00g酸棗仁珍珠粉膠囊內(nèi)容物加蒸餾水至200ml，配成相應(yīng)劑量受試液，供各劑量組灌胃。對(duì)照組給予等體積蒸餾水。每日灌胃1次，灌胃量0.2ml/(10g·bw)，連續(xù)30天。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由攝食飲水。觀察動(dòng)物每天的活動(dòng)及生長(zhǎng)情況。

1.5.2 直接睡眠實(shí)驗(yàn)：參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》。

1.5.3 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)：參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》。

1.5.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)：參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》。

1.5.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)：參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》。

1.5.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化和統(tǒng)計(jì)分析。先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊，則對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’sT2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。

2.結(jié)果與分析

2.1 樣品對(duì)小鼠體重的影響 由表1～表3可以看出，酸棗仁珍珠粉膠囊各劑量組與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)期間體重均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；動(dòng)物生長(zhǎng)良好，未見明顯異常反應(yīng)。

表1 Ⅰ組小鼠體重

表2 Ⅱ組小鼠體重

表3 Ⅲ組小鼠體重

2.2 直接睡眠實(shí)驗(yàn) 由表4可見，酸棗仁珍珠粉膠囊各劑量組與對(duì)照組經(jīng)口灌胃后小鼠均不出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象。

表4 小鼠直接睡眠實(shí)驗(yàn)的影響

2.3 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間試驗(yàn) 由表5可見，酸棗仁珍珠粉膠囊各劑量組對(duì)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時(shí)間有延長(zhǎng)趨勢(shì)，中、高劑量組與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.05或P<0.01)。

表5 對(duì)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時(shí)間的影響

2.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 由表6可見，酸棗仁珍珠粉膠囊高劑量組小鼠睡眠發(fā)生率與對(duì)照組比較，差異有顯著性(P<0.01)。

表6 對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠發(fā)生率的影響

2.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn) 由表7可見酸棗仁珍珠粉膠囊各劑量組巴比妥鈉睡眠潛伏期與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。

表7 對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

3.討論

本研究以0.l0g/(kg·bw)、0.20g/(kg·bw)、0.60g/(kg·bw)劑量的酸棗仁珍珠粉膠囊給小鼠灌胃30天，劑量組小鼠體重與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)。對(duì)受試動(dòng)物無(wú)直接睡眠作用。0.20g/(kg·bw)、0.60g/(kg·bw)劑量能延長(zhǎng)閾劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間，0.60g/(kg·bw)劑量能增加閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.05或P<0.0l)，對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期無(wú)明顯影響。因此認(rèn)為酸棗仁珍珠粉膠囊具有改善睡眠作用。

目前可以改善睡眠狀況的原料有酸棗仁、林蛙油、珍珠粉、茯苓、遠(yuǎn)志、五味子等。張榮標(biāo)[6]等人的研究探討了復(fù)方酸棗仁茯苓口服液改善小鼠睡眠作用。韓俊偉[7]等人的研究探討了酸棗仁復(fù)方制劑改善睡眠功能。梁東[8]等人的研究探討了酸棗仁林蛙油復(fù)方膠囊改善睡眠功能。王麗云[9]等人的研究探討了超細(xì)珍珠粉對(duì)小鼠改善睡眠。酸棗仁為藥食同源的保健食品原料，酸棗仁中所含的酸棗仁總皂苷等具有改善血液微循環(huán)、鎮(zhèn)靜催眠以及抗驚厥作用，鎮(zhèn)靜催眠效果較好[10]。珍珠作為一種名貴的中藥材,在我國(guó)的應(yīng)用已有幾千年的歷史，珍珠性寒，味甘、咸，具有安神定驚、明目清翳、解毒生肌之功效，主治驚悸失眠、驚風(fēng)癲癇、目生云翳、瘡瘍不斂等癥[11]。茯苓用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安，驚悸失眠。遠(yuǎn)志安神益智、解郁，治驚悸，健忘，夢(mèng)遺，失眠，咳嗽多痰，癰疽瘡腫。實(shí)驗(yàn)證明酸棗仁珍珠粉膠囊具有改善睡眠功效，可以成為研究改善睡眠保健食品的一個(gè)方向。