周震祥，張俊平，何錫忠，李春華，楊惠萍，蔣鳳英，倪建平

(上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，上海201106)

鴿副黏病毒Ⅰ型病(又稱鴿瘟、鴿新城疫)是由鴿副黏病毒I型(Pigeon paramyxovirus type I，PPMV-I)感染引起的鴿的一種急性傳染病，主要臨床癥狀為腸炎、下痢和神經(jīng)癥狀,傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高[1-3]。近年來，國(guó)內(nèi)部分地區(qū)鴿群呈暴發(fā)流行，給我國(guó)養(yǎng)鴿業(yè)造成了巨大損失。疫苗接種是預(yù)防鴿副黏病毒Ⅰ型病的有效方法，目前市場(chǎng)僅有進(jìn)口的鴿瘟疫苗，且價(jià)格昂貴，國(guó)內(nèi)大部分鴿場(chǎng)采用雞新城疫疫苗免疫，雖能起到一定的預(yù)防作用，但免疫效果不理想，使該病仍時(shí)有發(fā)生[4-6]，因此研制鴿副黏病毒Ⅰ型病疫苗意義重大。本研究在進(jìn)行鴿副黏病毒Ⅰ型S-1株的分離與鑒定、生物特性鑒定、疫苗試制、免疫效力試驗(yàn)[7-11]的基礎(chǔ)上，用實(shí)驗(yàn)室制備的5批鴿副黏病毒滅活疫苗(S-1株)，在松江、青浦、嘉定等幾個(gè)規(guī)?；B(yǎng)鴿場(chǎng)進(jìn)行田間試驗(yàn)，以期驗(yàn)證該疫苗對(duì)鴿子的安全性和免疫效果。

1 材料與方法

1.1 材料

鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)，由上海佳牧生物制品有限公司試制，批號(hào)：20131018、20131108、20131122、20131206、20140107。鴿副黏病毒Ⅰ型(川沙株)，由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所分離、鑒定、保存，病毒含量為107.5ELD50/(0.1mL)。HI試驗(yàn)用抗原為雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。HI試驗(yàn)用紅細(xì)胞為1%紅細(xì)胞，由采自健康青年雞新鮮抗凝血按常規(guī)方法制備而成。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

30日齡抗體陰性幼齡鴿(HI抗體≤2)，120日齡抗體陰性青年鴿(HI抗體≤2)，180日齡抗體陰性種鴿(HI抗體≤2)由上海松江、青浦、嘉定等規(guī)模化養(yǎng)鴿場(chǎng)提供。

1.3 試驗(yàn)分組與免疫

分別在松江、青浦、嘉定等幾個(gè)規(guī)?；B(yǎng)鴿場(chǎng)取30日齡抗體陰性幼齡鴿、120日齡抗體陰性青年鴿各3 000只，隨機(jī)分為5組，600只/組；180日齡抗體陰性種鴿1 000只，隨機(jī)分為5組，200只/組。各試驗(yàn)組鴿分別肌肉注射鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)20131018批、20131108批、20131122批、20131206批、20140107批，幼齡鴿0.25mL/只，青年鴿和種鴿0.5mL/只；另分別取30只相同日齡的幼齡鴿、青年鴿和種鴿作為空白對(duì)照組，不免疫任何疫苗。各組試驗(yàn)鴿在相同條件下隔離飼養(yǎng)。

1.4 抗體檢測(cè)

分別于免疫后0d、14d、28d、60d、90d、120d、150d、180d每組隨機(jī)抽取10只采血測(cè)定HI抗體。

1.5 攻毒保護(hù)

各年齡試驗(yàn)鴿挑選2組在免疫后30d、90d、180d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，每組隨機(jī)抽取10只肌肉注射鴿副黏病毒Ⅰ型強(qiáng)毒株(川沙株)，攻毒劑量為105.5ELD50/只，攻毒后觀察14d，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)鴿發(fā)病率/死亡率。

2 結(jié)果與分析

2.1 鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)對(duì)幼齡鴿免疫效果

用實(shí)驗(yàn)室試制的5批鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)免疫30日齡抗體陰性幼齡鴿，試驗(yàn)期內(nèi)未見任何不良反應(yīng)。免疫后14d抗體水平逐漸升高，于28—60d達(dá)到高峰，最高的抗體水平可達(dá)到26.3，之后抗體水平逐漸下降，免疫后180d抗體水平保持在25.0左右，高滴度抗體水平可維持6個(gè)月以上。具體抗體水平測(cè)定情況見表1。

表1 30日齡幼齡鴿免疫后平均抗體水平(log2)

挑選2組在免疫后30d、90d、180d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果表明免疫后30d、90d、180d 攻毒保護(hù)率均在90%以上。具體攻毒保護(hù)情況見表2。

表2 30日齡幼齡鴿免疫后的攻毒保護(hù)率

Table 2 The protective rate of 30-day-old pigeons immunized with pigeon paramyxovirus type 1 inactivated vaccine(S-1 strain)against pigeon paramyxovirus type 1 virulent chuansha strain%

2.2 鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)對(duì)青年鴿的免疫效果

用實(shí)驗(yàn)室試制的5批鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)免疫120日齡抗體陰性青年鴿，試驗(yàn)期內(nèi)未見任何不良反應(yīng)。免疫后14d抗體水平逐漸升高，于28—60d達(dá)到高峰，最高的抗體水平可達(dá)到28.7，之后抗體水平逐漸下降，免疫后180d抗體水平保持在25.2左右，高滴度抗體水平可維持6個(gè)月以上。具體抗體水平測(cè)定情況見表3。

表3 120日齡青年鴿免疫后抗體水平

挑選2組在免疫后30d、90d、180d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果表明免疫后30d、90d、180d攻毒保護(hù)率均在90%以上。具體攻毒保護(hù)情況見表4。

表4 120日齡青年鴿免疫后的攻毒保護(hù)率

Table 4 The protective rate of 120-day-old pigeons immunized with pigeon paramyxovirus type 1 inactivated vaccine(S-1 strain)against pigeon paramyxovirus type 1 virulent chuansha strain%

2.3 鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)對(duì)種鴿的免疫效果

用實(shí)驗(yàn)室試制的5批鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)免疫180日齡種鴿，試驗(yàn)期內(nèi)未見任何不良反應(yīng)。免疫后14d抗體水平逐漸升高，于60d達(dá)到高峰，最高的抗體水平可達(dá)到210.4，之后抗體水平逐漸下降，免疫后180d抗體水平保持在27.2左右，高滴度抗體水平可維持6個(gè)月以上。具體抗體水平測(cè)定情況見表5。

表5 180日齡種鴿免疫后抗體水平

挑選2組在免疫后30d、90d、180d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果表明免疫后30d、90d、180d攻毒保護(hù)率均為100%，具體攻毒保護(hù)情況見表6。

表6 180日齡種鴿免疫后的攻毒保護(hù)率

Table 6 The protective rate of 180-day-old pigeons immunized with pigeon paramyxovirus type 1 inactivated vaccine(S-1 strain)against pigeon paramyxovirus type 1 virulent chuansha strain%

3 結(jié)論

3.1 幼齡鴿及青年鴿免疫前抗體水平普遍較低，種鴿免疫前抗體水平普遍較高，免疫后14d抗體水平逐漸升高，于28—60d達(dá)到峰值，幼齡鴿、青年鴿、種鴿的最高抗體水平分別達(dá)26.3、28.7、210.4，之后抗體水平逐漸下降，幼齡鴿、青年鴿、種鴿180d抗體水平分別保持在25.0、25.2、27.2左右，高滴度抗體水平可維持6個(gè)月以上。

3.2 5批鴿副黏病毒Ⅰ型滅活疫苗(S-1株)實(shí)驗(yàn)室制品免疫抗體陰性鴿，免疫后30、90、180d攻毒保護(hù)率均可達(dá)到90%以上。

3.3 試驗(yàn)結(jié)果證明，應(yīng)用鴿副黏病毒油乳劑滅活疫苗(S-1株)對(duì)控制鴿副黏病毒Ⅰ型病安全有效。