馬全鑫，張利棕，戎亦驪，何蒙娜，郁晨，蔡月琴，陳民利*

(1. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心/比較醫(yī)學(xué)研究所，杭州 310053)2. 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，超聲醫(yī)學(xué)科，杭州310003)

全球代謝綜合征患病率不斷上升同時(shí)，非酒精性脂肪肝病( non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)成為全球最常見(jiàn)的慢性肝病之一[1]。 導(dǎo)致NAFLD 的主要危險(xiǎn)因素包括肥胖、2 型糖尿病及血脂異常與代謝綜合征，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且目前尚不明確[2]。 動(dòng)物模型是研究疾病發(fā)病機(jī)制、研發(fā)治療藥物以及研究防治策略的重要環(huán)節(jié)。 目前已有多種NAFLD 動(dòng)物模型，主要分為膳食動(dòng)物模型、遺傳動(dòng)物模型和藥物誘導(dǎo)模型[3]。 迄今為止，大多數(shù)這些模型的共同之處在于有肝脂質(zhì)積聚，但沒(méi)有明顯的炎癥和纖維化[4]。

大小鼠是最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，遺傳信息明確且易于獲得。 但大小鼠模型血清血脂水平、脂蛋白構(gòu)成、脂質(zhì)代謝過(guò)程與人類存在較大差異，耐受高脂，極難形成肝纖維化[5]。 Wistar-SD 高脂血癥易感(Wistar-SD Hyperlipidemia，WSHc)大鼠是本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心發(fā)現(xiàn)并培育研究的一種特色實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系。 該品系來(lái)源于一只自發(fā)性突變的Wistar 大鼠，這只大鼠經(jīng)高脂飼料誘導(dǎo)后，血清TC 濃度高達(dá)20.26 mmol/L。 將其與SD 大鼠雜交后進(jìn)行保種傳代，經(jīng)過(guò)不斷選育，培育至第四代時(shí)雌性WSHc 大鼠經(jīng)高脂飼喂2 周時(shí)，血清TC 值大于5.0 mmol/L 的發(fā)生率約為80%，并在第8 周時(shí)達(dá)到血脂峰值，始終處于高于臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的高血脂狀態(tài)，且易形成心功能受損和早期動(dòng)脈粥樣硬化等心血管并發(fā)癥[6]。該大鼠具有特殊的脂代謝模式，對(duì)高脂血癥及相關(guān)并發(fā)癥易感，是具有潛力的脂代謝相關(guān)疾病的動(dòng)物模型。

基于此，本研究取培育的第五代WSHc 大鼠，篩選高脂血癥易感的雌性大鼠，通過(guò)高脂飼料誘導(dǎo)建立WSHc 大鼠NAFLD 疾病模型，觀察該模型肝脂質(zhì)沉積、炎癥反應(yīng)、纖維化程度，明確該模型發(fā)病的一般規(guī)律和病理特點(diǎn)，分析其應(yīng)用與科學(xué)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)20 只7 ～8 周齡雌性Wistar 大鼠，來(lái)源于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)有限公司【SCXK(滬)2017-0005】；20 只雌性7 ～8 周齡WSHc 大鼠，本課題組繁殖，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心屏障實(shí)驗(yàn)室【SYXK(浙) 2018-0012】，環(huán)境溫度：(22± 2)℃，相對(duì)濕度：50% ～60%，光照：12 h/12 h 明暗交替，噪聲＜50 dB；在IVC 籠內(nèi)飼養(yǎng)，自由飲食。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中按“3R”原則給予人道的關(guān)懷。 浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查委員會(huì)通過(guò)，決議編號(hào)：IACUC-20181126-02。

1.1.2 主要試劑和儀器

總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油( triylglycerides，TG )、 谷 丙 轉(zhuǎn) 氨 酶 ( alanine aminotransferase，ALT)、 谷 草 轉(zhuǎn) 氨 酶( aspartate aminotransferase，AST)檢測(cè)試劑，均購(gòu)自上海申能德賽診斷技術(shù)有限公司；蘇木色精，購(gòu)自上海伯奧生物科技有限公司；曙紅Y，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；天狼星紅染色試劑盒，購(gòu)自Servicebio 公司；油紅O 染料，購(gòu)自SIGMA 公司；CD68 抗體，購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz 公司；Mounting Medium With DAPI，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。 普通基礎(chǔ)飼料購(gòu)自南京愛(ài)立默科技有限公司，輻照全營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料。 高脂飼料配方：膽固醇1%、豬油10%、蛋黃粉10%、3 號(hào)膽鹽0.5%、基礎(chǔ)飼料78.5%。

Aixplorer 超聲成像儀(法國(guó)，聲科公司)，7020全自動(dòng)生化分析儀(日本，日立公司)；HM335E 半自動(dòng)石蠟切片機(jī)(德國(guó)，Microm 公司)；Nana Zoomer 2.0RS 數(shù)字切片掃描設(shè)備(日本，濱松公司)；自動(dòng)染色機(jī)(德國(guó)，Leica 公司)；VS120-S6-W 數(shù)字病理切片(熒光)掃描分析儀(日本，Olympus 公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立

取20 只7 ～8 周齡的SPF 級(jí)雌性Wistar 大鼠，隨機(jī)分為2 組，分別飼喂普通飼料(standard chows，SC)和高脂飼料(high-fat diet，HFD)，每組10 只，即Wistar + SC 組和Wistar + HFD 組。 取本中心培育的第五代7 ～8 周齡的雌性WSHc 大鼠，篩選10 只高脂誘導(dǎo)2 周后TC 水平在5.0 ～9.0 mmol/L 之間的大鼠(發(fā)病率約為80%)，為WSHc + HFD 組，另取10 只雌性WSHc 大鼠飼喂普通飼料，即WSHc +SC 組，持續(xù)飼喂高脂飼料時(shí)間為12 周。

1.2.2 血液生化檢測(cè)

動(dòng)物禁食12 h，頜下靜脈取血，3000 r/min 離心10 min，分離血清，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)TC、TG、ALT、AST 含量。

1.2.3 超聲瞬時(shí)彈性成像檢測(cè)

使用Aixplorer 超聲成像儀進(jìn)行實(shí)時(shí)剪切波檢測(cè)，F(xiàn)r 12 Hz 探頭，每只動(dòng)物反復(fù)測(cè)量肝最大葉5次，每次均包括該區(qū)的硬度及速度的最大值、最小值和平均值，將5 次所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)平均值作為最終實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.2.4 肝大體與病理組織學(xué)觀察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)大鼠實(shí)施安樂(lè)死，稱取體重與肝重。 取大鼠肝最大葉，一式三份，一部分經(jīng)中性甲醛固定后，常規(guī)脫水、石蠟包埋后切片，行HE 染色，在光鏡下觀察病變情況；一部分用冰凍切片包埋劑包埋，冰凍切片后，油紅O 染色，觀察脂質(zhì)沉積程度，使用Masson 染色觀察肝纖維化程度；另一部分凍存，用于肝脂質(zhì)含量測(cè)定。

1.2.5 肝脂質(zhì)含量檢測(cè)

取同部位肝組織200 mg 左右，并記錄重量，加2 mL 氯仿/甲醇(2 ∶1)混合液，使用生物樣本均質(zhì)機(jī)勻漿。 4500 r/min 離心10 min。 將上清相轉(zhuǎn)移到新的離心管中，并加0.2 倍體積的生理鹽水，搖晃10 min。 2000 r/min 離心5 min，分層。 將下層含油脂的液相小心的轉(zhuǎn)移到新的試管中，蒸發(fā)至液體揮干(過(guò)夜)。 用2 mL 含10% TritonX-100 的異丙醇溶液溶解油脂。 用試劑盒測(cè)定溶液中TC、TG 的濃度，并根據(jù)稱取的組織重量計(jì)算肝TC、TG 含量。

1.2.6 非酒精性脂肪肝活動(dòng)性(Non-alcoholic fatty liver activity score，NAS)評(píng)分

參照美國(guó)NASH 臨床研究協(xié)作網(wǎng)推薦的半定量診斷方式，對(duì)肝的脂肪變性、小葉炎癥和肝細(xì)胞氣球樣變3 項(xiàng)組織學(xué)特征進(jìn)行評(píng)分，進(jìn)而評(píng)估脂肪肝受損的嚴(yán)重程度[7]。 并依據(jù)纖維化的范圍和形態(tài)，分為4 級(jí)(0 ～3)：0 分(無(wú)纖維化)；1 分(小葉內(nèi)局灶性或廣泛的竇周/細(xì)胞周纖維化)；2 分(纖維化擴(kuò)展到門管區(qū)，局灶性或廣泛的門管區(qū)星芒狀纖維化)；3 分(纖維化擴(kuò)展到門管區(qū)周圍，局灶性或廣泛的橋接纖維化)。 4 項(xiàng)得分相加即為NAS 評(píng)分總分。

1.2.7 巨噬細(xì)胞免疫熒光染色

取石蠟切片，脫蠟至水，經(jīng)修復(fù)后，加入3%H2O2溶液。 將稀釋后的CD68 抗體覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃孵育2 h 后，洗滌，加入熒光二抗，37℃孵育1 h 后DAPI 染色封片，其中激活的巨噬細(xì)胞呈紅色熒光，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行Studentt檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 WSHc 大鼠一般體征與血液生化的變化情況

如圖1 所示，高脂誘導(dǎo)12 周后，各組大鼠體重與采食量無(wú)顯著差異(P＞0.05)，與對(duì)應(yīng)品系的正常對(duì)照組大鼠比較，WSHc + HFD 組與Wistar +HFD 組大鼠血清TC 與ALT 水平均顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)，且WSHc + HFD 組TC 與ALT 顯著高于Wistar + HFD 組(P＜0.05，P＜0.01)。 各組之間TG 與AST 差異不具有顯著性(P＞0.05)。

2.2 WSHc 大鼠肝彈性成像的變化

由圖2 可見(jiàn)，與對(duì)應(yīng)品系的正常對(duì)照組大鼠比較，WSHc + HFD 組肝彈性模量值與剪切波穿透速度顯著增加(P＜0.05)，而Wistar + HFD 組變化無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，說(shuō)明飼喂高脂飼料的WSHc 大鼠肝硬度增加。

圖1 各組大鼠一般體征與血液生化的變化Note. A，Changes of TC content of rats in each group. B，Changes of TG content of rats in each group. C，Changes of ALT content of rats in each group. D，Changes of AST content of rats in each group.. E，Body weight of rats in each group. F，F(xiàn)ood intake of rats in each group.Compared with the ordinary feed group，*P＜0.05，**P＜0.01. Compared with the two groups fed with high-fat diet，#P＜0.05，##P＜0.01.(The same in the following Figures)Figure 1 Changes in the general signs and biochemicals of the blood of rats in each group

圖2 各組大鼠肝彈性成像與定量分析Note. A，Changes of weight in ZDF rats. B，Changes in liver elasticity modulus values of rats in each group. C，Changes in the rate of shear wave penetration of rats in each group.Figure 2 Liver elasticity imaging and quantitative analysis of rats in each group

2.3 WSHc 大鼠肝大體觀察與脂質(zhì)含量的變化

由圖3 可見(jiàn)，飼喂普通飼料的Wistar 與WSHc大鼠肝均未見(jiàn)異常，Wistar + HFD 組大鼠肝呈淡黃色，有紅色點(diǎn)狀散在，稍顯油膩；WSHc + HFD 組大鼠肝呈灰黃色，表面油膩。 經(jīng)定量檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，Wistar + HFD 組與WSHc + HFD 組肝中TC、TG 含量與肝系數(shù)均顯著增加(P＜0.01)，且WSHc +HFD 組脂質(zhì)含量略高于Wistar +HFD 組，但差異不具有顯著性(P＞0.05)。 (見(jiàn)圖3)

2.4 WSHc 大鼠肝病理學(xué)變化

2.4.1 WSHc 大鼠肝常規(guī)病理染色及評(píng)分

飼喂普通飼料的Wistar 與WSHc 大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清晰，小葉中央靜脈結(jié)構(gòu)完好，肝索排列整齊、肝竇清晰可見(jiàn)，肝細(xì)胞形態(tài)正常，胞漿紅染，匯管區(qū)清晰可見(jiàn)。 WSHc + HFD 組與Wistar + HFD 組肝小葉結(jié)構(gòu)邊界不清，肝細(xì)胞排列紊亂，索狀結(jié)構(gòu)消失，大量肝細(xì)胞濁腫，出現(xiàn)小泡性脂肪變性，且WSHc +HFD 組出現(xiàn)較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)圖4A。

與對(duì)應(yīng)品系的正常對(duì)照組大鼠比較，WSHc +HFD 組與Wistar + HFD 組大鼠肝組織脂肪變性、炎癥程度、氣球樣變和纖維化評(píng)分均顯著升高(P＜0.01)，且WSHc + HFD 組炎癥程度和纖維化程度顯著高于Wistar + HFD 組(P＜0.05)，脂肪變性和氣球樣變差異不具有顯著性(P＞0.05)，見(jiàn)圖4B。

2.4.2 WSHc 大鼠肝油紅O 染色與Masson 染色

油紅O 染料可與脂質(zhì)結(jié)合，呈紅色。 由圖5A可見(jiàn)，飼喂普通飼料的Wistar 與WSHc 大鼠肝均未見(jiàn)陽(yáng)性染色，Wistar+ HFD 組肝陽(yáng)性染色呈小顆粒散在分布，WSHc + HFD 組肝陽(yáng)性染色匯聚成較大顆粒。

Masson 染色中，膠原沉積呈藍(lán)色。 由圖5B 可見(jiàn)，飼喂普通飼料的Wistar、WSHc 大鼠及Wistar +HFD 組大鼠肝均未見(jiàn)異常膠原沉積，WSHc + HFD組肝小葉內(nèi)可見(jiàn)局灶性的竇周膠原沉積存在。

2.4.3 WSHc 大鼠巨噬細(xì)胞染色結(jié)果

如圖6 所示，CD68 標(biāo)記激活的巨噬細(xì)胞。 免疫熒光結(jié)果可見(jiàn)，飼喂普通飼料的Wistar 與WSHc 大鼠肝CD68 陽(yáng)性表達(dá)較少，Wistar + HFD 組與WSHc+ HFD 組陽(yáng)性陽(yáng)性表達(dá)顯著增多，且WSHc + HFD組陽(yáng)性表達(dá)顯著多于Wistar + HFD 組。

圖3 各組大鼠肝大體與脂質(zhì)含量變化Note. A，Livers in each group of rats were generally observed. B，Changes in TC content of rats in each group. C，Changes in TG content of rats in each group. D，Changes in liver weight of rats in each group. E，Changes in liver index of rats in each group.Figure 3 Changes in the gross and lipid content of liver in each group of rats

圖4 各組大鼠肝HE 染色結(jié)果與NAS 評(píng)分Note. A，HE staining of liver in each group of rats，the red arrow refers to inflammatory cells immersion.B，NAS score of rats in each group.Figure 4 HE staining results and NAS score of liver in each group of rats

3 討論

NAFLD 是全球最常見(jiàn)的慢性肝病，普通成人NAFLD 患病率介于6.3% ～45%[8]。 NAFLD 的病理生理過(guò)程目前尚不能完全闡述，理想的動(dòng)物模型在研究NAFLD 的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。 然而，目前常用的大小鼠動(dòng)物模型均無(wú)法較好的模擬人類NAFLD 的發(fā)生發(fā)展和病理特征[9]。 Wistar-SD 高脂血癥易感(WSHc)大鼠是本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心目前自主培育并研究的一個(gè)大鼠新品系，來(lái)源于本課題組偶然發(fā)現(xiàn)的一只Wistar 大鼠，該大鼠經(jīng)4 周高脂飼料誘導(dǎo)后血清TC 濃度高達(dá)20.26 mmol/L，而此時(shí)同一批次的其余Wistar 大鼠TC 平均值僅為(2.20 ± 0.34) mmol/L。 將該大鼠與SD 大鼠交配后進(jìn)行保種傳代，目前已形成一定數(shù)量的封閉群。該群第四代大鼠經(jīng)過(guò)高脂誘導(dǎo)后，約75%的雌性大鼠TC 水平在5.0 ～14.9 mmol/L 之間，雖然低于始發(fā)現(xiàn)的大鼠，卻依然具有高膽固醇血癥的特性，并能長(zhǎng)期保持穩(wěn)定[6]。 而雄性大鼠TC 水平與常規(guī)大鼠無(wú)顯著差異。 提示W(wǎng)SHc 大鼠存在性別差異，遺傳模式可能為伴性遺傳。 本課題組對(duì)WSHc 大鼠肝基因表達(dá)分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，WSHc 大鼠肝Srebp1 基因表達(dá)異常升高。 文獻(xiàn)報(bào)道，Srebp1 在肝脂質(zhì)代謝中起關(guān)鍵作用，持續(xù)高表達(dá)會(huì)加速NAFLD 的發(fā)生[10]。由此可見(jiàn)，WSHc 大鼠作為高脂血癥易感大鼠，具有獨(dú)特的脂代謝模式，在NAFLD 模型的建立和應(yīng)用方面具有一定的優(yōu)勢(shì)和的潛力。 本研究通過(guò)高脂飼料誘導(dǎo)建立WSHc 大鼠NAFLD 疾病模型，檢測(cè)血液生化并觀察病理特征，分析高脂誘導(dǎo)WSHc 大鼠NAFLD 模型的特點(diǎn)和價(jià)值。

血脂紊亂是NAFLD 的重要危險(xiǎn)因素[11]。NAFLD 患者肝內(nèi)游離脂肪酸氧化增加，肝糖原利用受到抑制，表現(xiàn)為脂質(zhì)成分在肝細(xì)胞中沉積，進(jìn)一步發(fā)生血脂紊亂[12]。 本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，Wistar 大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)后，TC 水平有一定程度的上升，但與臨床上的高脂血癥標(biāo)準(zhǔn)相距甚遠(yuǎn)。 而WSHc 大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)后，TC 平均水平能達(dá)到8.0 mmol/mL 以上，表明高脂環(huán)境下，WSHc 大鼠血脂水平較常規(guī)大鼠更接近臨床，推測(cè)其原因可能是WSHc 大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)發(fā)生了肝細(xì)胞損傷。 ALT 與AST 在肝細(xì)胞中承擔(dān)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的作用，兩者均是肝細(xì)胞損傷的標(biāo)記物。 臨床研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD 患者與嚴(yán)重的肝纖維化患者血清ALT 水平均顯著高于正常人群，且ALT/AST 比值異常[13]。 本研究發(fā)現(xiàn)，WSHc 大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)后，ALT 水平顯著上升，而在Wistar 大鼠中未見(jiàn)這一現(xiàn)象，提示高脂環(huán)境下，WSHc 大鼠更易發(fā)生肝細(xì)胞損傷。

NAFLD 涉及一系列廣泛的肝組織病理變化，如脂質(zhì)異常沉積、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化，根據(jù)肝不同病理變化進(jìn)行疾病分期診斷依然是目前臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。 肝脂質(zhì)沉積是NAFLD 最具特征性的病變，病癥不同階段，脂質(zhì)沉積的部位和數(shù)量不同。臨床研究表明[14]，在單純肝脂質(zhì)沉積階段，肝細(xì)胞脂肪沉積呈小泡狀；而脂肪性肝炎階段則表現(xiàn)為肝細(xì)胞大泡性或以大泡性為主的混合型脂肪變。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)肝脂質(zhì)成分定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，WSHc 大鼠與Wistar 大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)后，均有大量脂質(zhì)沉積于肝組織，但通過(guò)觀察肝內(nèi)脂滴形態(tài)可見(jiàn)，高脂飼喂的Wistar 大鼠肝組織中，脂滴細(xì)密均勻，而高脂飼喂的WSHc 大鼠肝中則多見(jiàn)大泡性脂滴，提示W(wǎng)SHc 大鼠肝除了單純的脂肪變性之外，還發(fā)生了脂肪肝炎病變。

目前，超聲彈性成像技術(shù)已被用于多種肝疾病的診斷[15]，如病毒型肝炎性肝纖維化、肝硬化等，具有良好的靈敏度及特異度。 而剪切波彈性成像(shear wave elastography，SWE)是臨床上一種新興的超聲彈性成像技術(shù)，可通過(guò)剪切波的穿透速度測(cè)算設(shè)定區(qū)域的肝彈性模量值。 多項(xiàng)研究表明，隨著NAFLD 的發(fā)生發(fā)展，肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性、壞死，繼而出現(xiàn)膠原沉積形成肝纖維化，肝纖維化形成后，肝組織硬度逐漸增加，繼而可反映在剪切波穿透速度和肝彈性值模量值上[16]。 本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼喂高脂飼料的Wistar 大鼠彈性模型值無(wú)顯著增加，而飼喂高脂飼料的WSHc 大鼠彈性模型值顯著增加，進(jìn)一步Masson 染色可見(jiàn)，高脂飼喂的WSHc 大鼠肝纖維化程度顯著提高，提示W(wǎng)SHc 大鼠相比于Wistar 大鼠，更易受高脂飼料誘導(dǎo)形成肝膠原異常沉積。

NAFLD 的發(fā)展過(guò)程中，伴隨著炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和肝巨噬細(xì)胞的激活和極化[17]。 當(dāng)肝發(fā)生損傷時(shí)，巨噬細(xì)胞大量增殖，并與其他定居細(xì)胞等共同招募循環(huán)中的單核細(xì)胞遷移至炎性灶并分化成更多的巨噬細(xì)胞[18]。 巨噬細(xì)胞的增多在嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用，會(huì)進(jìn)一步加重肝毒性，巨噬細(xì)胞的數(shù)量可反應(yīng)肝損傷與炎癥程度[19]。 本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，高脂誘導(dǎo)的WSHc 大鼠肝中存在較多的白細(xì)胞浸潤(rùn)，尤其是在較大脂滴的富集，常?？梢?jiàn)明顯的炎癥灶；通過(guò)免疫熒光染色可見(jiàn)，高脂飼喂的WSHc 大鼠肝中活化的巨噬細(xì)胞顯著增多，而高脂誘導(dǎo)的Wistar 大鼠則增多不明顯，進(jìn)一步證實(shí)了高脂環(huán)境下WSHc 大鼠較常規(guī)大鼠易產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和肝組織損傷。

綜上所述，WSHc 大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)后，血清總膽固醇顯著升高并與臨床高脂血癥患者接近；肝脂質(zhì)異常沉積并形成大泡性脂滴；脂滴周圍有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)形成炎癥灶，巨噬細(xì)胞增多；可見(jiàn)散在的纖維化病變。 然而，這些病理變化在高脂誘導(dǎo)的Wistar大鼠肝組織中并未發(fā)現(xiàn)。 由此可見(jiàn)，相較于常規(guī)大鼠，高脂誘導(dǎo)WSHc 大鼠可建立一種更接近臨床的NAFLD 動(dòng)物模型，其特色在于與臨床水平接近的血液生化指標(biāo)、嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)和肝纖維化。 其發(fā)病機(jī)制尚不明確，需進(jìn)一步研究探討。