宋麗麗，聞格，霍姍浩，胡曉龍,3，彭惠

1(鄭州輕工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，河南 鄭州，450001)2(河南省人民醫(yī)院，河南 鄭州，450003) 3(河南仰韶酒業(yè)有限公司博士后創(chuàng)新實(shí)踐基地，河南 三門峽，472000)

多糖是構(gòu)成生命活動(dòng)的基本物質(zhì)之一，廣泛存在于動(dòng)物、植物及微生物細(xì)胞中，是一類由單糖通過α或β糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚物[1]。天然多糖除了有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤的生物學(xué)效應(yīng)外，還有抗衰老、抗疲勞、抗氧化、降血糖、抗凝血等作用，且其對(duì)機(jī)體毒副作用小[2]，在醫(yī)藥、發(fā)酵工業(yè)、食品工業(yè)等領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。

生姜，是我國(guó)傳統(tǒng)的香辛類蔬菜，作為衛(wèi)生部首批公布的藥食兼用植物資源，含有多種功能活性成分。生姜具有較好殺菌解毒、止吐、降血脂、抗炎、抗氧化、抑制腫瘤、保肝等保健功能，但其作用機(jī)理及對(duì)更多人類疾病的輔助治療作用都還有待深入研究[3]。目前市場(chǎng)上對(duì)生姜的深入開發(fā)利用較少，開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高附加值姜類產(chǎn)品將帶來(lái)更大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。生姜藥用以小種姜為好，小種姜又名小黃姜。小黃姜中的化學(xué)成分達(dá)兩百余種，其中含有多種對(duì)人體健康有益的成分，包括姜黃素、姜辣素、微量元素、姜糖蛋白和姜多糖等[4-6]。姜中含有的活性多糖是一種優(yōu)質(zhì)的功效成分資源。與普通生姜相比，云南小黃姜個(gè)頭小、肉質(zhì)緊實(shí)，姜辣素和姜精油含量更高，因此有“御姜”、“藥姜”和“月子姜”的美譽(yù)，具有潛在的藥用價(jià)值[7]。目前對(duì)小黃姜多糖的研究?jī)H限于提取工藝的優(yōu)化，而對(duì)多糖結(jié)構(gòu)和生理功能的解析較少[8]。

本研究以云南小黃姜作為原料，以復(fù)合酶解結(jié)合水提醇沉法提取小黃姜多糖，研究其理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)特征，進(jìn)一步考察其體外抗氧化活性，為小黃姜多糖活性成分的深入研究及藥用功能的發(fā)揮奠定研究基礎(chǔ)，為小黃姜資源的深入開發(fā)利用提供方向。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

(1)實(shí)驗(yàn)材料：新鮮小黃姜購(gòu)于云南當(dāng)?shù)夭耸袌?chǎng)，烘干，粉碎，待用。

(2)實(shí)驗(yàn)試劑：DEAE 纖維素-52，美國(guó)Whatman公司；Sephadex G-100，美國(guó)Pharmacia公司；KBr(光譜純)、單糖標(biāo)準(zhǔn)品、2,2′-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)、纖維素酶、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、剛果紅，美國(guó)Sigma-Aldrich公司；木瓜蛋白酶、NaCl、正丁醇、氯仿、苯酚、三氟乙酸、鄰苯三酚、鄰二氮菲、無(wú)水乙醇、FeSO4和H2O2等，天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

FW 100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；電熱恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；ME204/02電子天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；DHL-B電腦恒流泵、DBS-100電腦全自動(dòng)部分收集儀，上海青浦滬西儀器廠；LPS-1280B真空冷凍干燥機(jī)，無(wú)錫萊浦儀器設(shè)備有限公司；UV-1800紫外可見分光光度計(jì)，上海美譜達(dá)儀器有限公司；Vertex 70v傅里葉變換紅外光譜儀，德國(guó)布魯克儀器公司；高效液相色譜儀1260，美國(guó)安捷倫公司；Diamond TG/DTA綜合熱分析儀，美國(guó)Perkin Elmer公司；DAWNHELEOS Ⅱ 多角度激光散射凝膠色譜系統(tǒng)，美國(guó)懷雅特公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 小黃姜多糖的提取和精制

1.3.1.1 小黃姜粗多糖的提取

稱取50 g小黃姜粉，加入1 L蒸餾水(固液比為1∶20)，浸泡過夜后加入5 g/L纖維素酶，50 ℃水浴攪拌反應(yīng)3.5 h，再加入0.5 g/L木瓜蛋白酶反應(yīng)45 min后，轉(zhuǎn)移到90 ℃的水浴中保溫?cái)嚢? h。過濾，濾液減壓濃縮至1/5體積，加等體積的Sevage試劑[V(正丁醇)∶V(氯仿)=4∶1]，混合液離心15 min，保留上清液。將四倍量的乙醇緩慢加入并不斷攪拌，離心收集沉淀。少量蒸餾水溶解多糖沉淀物，將多糖溶液轉(zhuǎn)移至透析袋中流動(dòng)水透析24 h，真空冷凍干燥得到小黃姜粗多糖樣品。

1.3.1.2 小黃姜多糖的純化

稱取100 mg小黃姜粗多糖樣品溶于20 mL去離子水中，用0.22 μm孔徑的濾膜過濾后，加入已平衡好的DEAE纖維素-52色譜柱中。用0、0.01、0.02、0.03、0.04 mol/L的NaCl溶液依次進(jìn)行梯度洗脫，每梯度收集20管，每管5 mL，苯酚-硫酸法檢測(cè)波長(zhǎng)490 nm的吸光度，繪制洗脫曲線，收集同一組分多糖，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后用透析袋透析并冷凍干燥。

將DEAE纖維素-52柱層析收集的凍干組分配置成5 mg/mL的多糖溶液，通過Sephadex G-100柱層析。調(diào)整恒流泵使洗脫液流速為0.5 mL/min，每管5 mL收集。用苯酚硫酸法于490 nm處檢測(cè)多糖含量，以管數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制多糖純化曲線。收集主峰洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后用透析袋透析并冷凍干燥，得到精制小黃姜多糖。

1.3.1.3 小黃姜多糖含量和提取率的測(cè)定

多糖含量及提取率測(cè)定：多糖含量即多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)采用苯酚‐硫酸法測(cè)定[9]。多糖提取率(得率)的計(jì)算如公式(1)：

(1)

1.3.2 單糖的組分成分分析[10]

樣品前處理：稱取20 mg小黃姜多糖，加入15 mL 2 mol/L的三氟乙酸置于耐高溫的試管中，121 ℃油浴4 h，反應(yīng)結(jié)束后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，加入4 mL甲醇復(fù)溶再蒸干，重復(fù)2次。樣品用2 mL去離子水充分溶解，0.22 μm濾膜過濾，HPLC檢測(cè)。

制作標(biāo)樣：分別配制1 mg/mL的木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖溶液，0.22 μm濾膜過濾，HPLC檢測(cè)。

HPLC條件：Aminex HPX-87H色譜柱(Biorad)，流動(dòng)相為50 mmol/L H2SO4溶液，流速0.6 mL/min，采用示差折光檢測(cè)器，柱溫80 ℃，檢測(cè)器35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

1.3.3 紅外光譜分析

稱取1～2 mg多糖樣品和200 mg KBr充分研磨，壓制成均勻透明的圓形薄片。采用VERTEX 70v 紅外光譜儀進(jìn)行測(cè)定，設(shè)置分辨率4 cm-1，掃描范圍為400～4 000 cm-1。

1.3.4 剛果紅實(shí)驗(yàn)[11]

配制不同濃度(0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mol/L)的NaOH溶液。取2 mg/mL多糖溶液1.0 mL，加入3.0 mL上述各濃度的NaOH溶液，并加入0.5 mL蒸餾水和1.5 mL 0.2 mmol/L剛果紅溶液，充分混勻，靜置1 h后對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行200～800 nm全波長(zhǎng)掃描，記錄各NaOH濃度時(shí)反應(yīng)體系的最大吸收波長(zhǎng)，空白對(duì)照組以蒸餾水替代多糖溶液。

1.3.5 小黃姜多糖分子質(zhì)量的測(cè)定

利用尺寸排阻色譜、多角度激光光散射檢測(cè)器及示差折光檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)測(cè)定小黃姜多糖的絕對(duì)分子質(zhì)量及分子構(gòu)象。將小黃姜多糖配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL多糖樣品溶液，0.22 μm濾膜過濾。分析條件：流動(dòng)相為50 mmol/L NaNO3和3 mmol/L NaN3溶液，流速0.5 mL/min，進(jìn)樣量100 μL，樣品的比折光指數(shù)增量值設(shè)置為0.14[12]。數(shù)據(jù)的采集和計(jì)算使用ASTRA軟件。

1.3.6 多糖的熱穩(wěn)定分析

用熱重分析法(thermogravimetric，TG)對(duì)小黃姜多糖進(jìn)行熱穩(wěn)定性分析。用N2作載氣，從室溫升至500 ℃，升溫速率為10 ℃/min。

1.3.7 多糖的抗氧化活性分析

1.3.7.1 羥自由基清除率的測(cè)定

參考李順峰等[13]的方法并進(jìn)行了調(diào)整。取不同濃度的多糖溶液、8.9 mmol/L FeSO4和8.9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液各1 mL，混合均勻，再加入1 mL 8.7 mmol/L的H2O2溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，35 ℃水浴保溫35 min，在波長(zhǎng)510 nm測(cè)吸光度。樣品對(duì)照管為蒸餾水替代樣品，樣品本底管以蒸餾水代替H2O2，按公式(2)計(jì)算多糖溶液對(duì)羥自由基清除率：

(2)

式中：Ax為樣品吸光度;A0為空白管吸光度;Ax0為樣品本底吸光度。

1.3.7.2 超氧陰離子基清除率的測(cè)定

采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)定[14]。取50 mmol/L Tris-Hcl緩沖溶液(pH=8.2)4.5 mL，分別加1 mL不同濃度的多糖樣品溶液，加入0.2 mL 5 mmol/L 鄰苯三酚溶液于試管中混合，于325 nm處每隔30 s測(cè)量吸光度，共記錄300 s，空白對(duì)照以同體積蒸餾水代替多糖樣品。多糖對(duì)超氧陰離子自由基清除率計(jì)算如公式(3)：

(3)

式中：ΔA0為鄰苯三酚自氧化速率，ΔAx為加入多糖溶液后的鄰苯三酚氧化速率。

1.3.7.3 ABTS自由基清除率的測(cè)定[15]

ABTS+工作液：于200 mL蒸餾水中加0.385 g ABTS和0.135 g K2S2O4并混勻，于避光處?kù)o置15 h后，用95%的乙醇將ABTS溶液稀釋至734 nm下吸光度為0.70±0.01。

取4 mL ABTS+工作液和1 mL多糖樣品溶液混合均勻，避光反應(yīng)16 min，在734 nm下測(cè)吸光度；樣品本底對(duì)照為95%的乙醇替換ABTS+工作液；空白對(duì)照用95%乙醇替換樣品溶液。多糖對(duì)ABTS自由基清除率計(jì)算如公式(4)：

(4)

式中：A為多糖反應(yīng)管吸光度；A0為本底對(duì)照吸光度；Ax為空白對(duì)照吸光度。

1.3.7.4 DPPH自由基清除率的測(cè)定[16]

DPPH工作液的配制：準(zhǔn)確稱取9.86 mg DPPH固體粉末，溶于100 mL無(wú)水乙醇中，4 ℃避光保存。

取不同濃度的多糖溶液1 mL于試管中，加入1 mL DPPH工作液，混合均勻后，避光反應(yīng)30 min，在517 nm波長(zhǎng)下分別測(cè)其吸光度；空白對(duì)照為用無(wú)水乙醇代替樣品代替樣品溶液，樣品對(duì)照用無(wú)水乙醇代替DPPH溶液，小黃姜多糖對(duì)DPPH自由基清除率計(jì)算如公式(5)：

(5)

式中：A為多糖反應(yīng)管吸光度；A0為本底對(duì)照吸光度；Ax為空白對(duì)照吸光度。

1.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)3次取平均值，采用Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、Origin Pro 2017軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 小黃姜粗多糖柱純化結(jié)果

小黃姜粗多糖經(jīng)DEAE纖維素-52柱層析洗脫純化時(shí)有3個(gè)峰，即3個(gè)組分，如圖1-a所示。組分1和2含量較低，鑒于其含量的多少，以組分3作為主要研究對(duì)象。將得率較高的0.2 mol/L NaCl洗脫組分進(jìn)一步經(jīng)Sephadex G-100柱層析純化，得到均一組分(圖1-b)，經(jīng)透析、冷凍干燥得到精制小黃姜多糖。

a-DEAE-52纖維素柱層析；b-Sephadex G-100柱層析
圖1 小黃姜多糖柱洗脫曲線
Fig.1 Elution profile ofZingiberofficinalepolysaccharide

2.2 小黃姜多糖的基本性質(zhì)

經(jīng)純化后得到的小黃姜多糖，易溶于熱水，不溶于高濃度乙醇、丙酮等有機(jī)試劑。苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量為(90.0±6.2)%，提取效率為(2.83±0.19)，ZHANG等[17]研究姜多糖的提取率為(2.50±4.32)%，與本研究中小黃姜多糖的提取率較為接近。如圖2所示，經(jīng)Sevage法除蛋白后，紫外掃峰在260 nm和280 nm處均無(wú)吸收峰，說(shuō)明多糖中基本不含有核酸和蛋白質(zhì)。經(jīng)酸水解、高效液相色譜分析其單糖成分，小黃姜多糖由葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖組成，其含量百分比分別為(81.7±2.1)%、(12.3±1.3)%和(6.0±0.2)%。

圖2 小黃姜多糖紫外掃描圖譜
Fig.2 UV spectrum ofZingiberofficinalepolysaccharide

2.3 小黃姜多糖紅外光譜分析

圖3 小黃姜多糖紅外光譜圖
Fig.3 FT-IR spectrum ofZingiberofficinalepolysaccharide

2.4 小黃姜多糖空間構(gòu)象分析

剛果紅能和具有三股螺旋結(jié)構(gòu)的多糖發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成的絡(luò)合物的最大吸收波長(zhǎng)會(huì)與剛果紅相比發(fā)生紅移[24]。由圖4可知，水對(duì)照組的最大吸收波長(zhǎng)，隨NaOH濃度增大而降低。而含有多糖溶液實(shí)驗(yàn)組的最大吸收波長(zhǎng)，在稀堿濃度范圍內(nèi)產(chǎn)生的明顯的紅移現(xiàn)象。說(shuō)明小黃姜多糖與剛果紅形成了絡(luò)合物，具有3股螺旋結(jié)構(gòu)。在堿的作用下，小黃姜多糖的3股螺旋結(jié)構(gòu)開始發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)變，形成單股螺旋，因此與剛果紅復(fù)合物的λmax發(fā)生了紅移[25]，并隨NaOH濃度的提高而紅移增加，在NaOH濃度為0.4 mL時(shí)趨于穩(wěn)定，增加NaOH濃度，最大吸收波下降，說(shuō)明隨著NaOH濃度的增加，多糖的3股螺旋結(jié)構(gòu)被破壞，形成自由彎曲結(jié)構(gòu)。

圖4 小黃姜多糖與剛果紅復(fù)合物在不同濃度NaOH 溶液中的λmax變化
Fig.4 Changes in the absorption maximum(λmax) ofZingiberofficinalepolysaccharide vatious concentrations of sodilum hydrolysis complexed with Congo red

2.5 小黃姜多糖分子質(zhì)量測(cè)定

采用1.3.5方法，測(cè)量小黃姜多糖的重均分子質(zhì)量(Mw)、均方根旋轉(zhuǎn)半徑(Rn)和多分散系數(shù)(Mw/Mn)。結(jié)果如表1所示，小黃姜多糖的重均分子質(zhì)量為(3.72±0.23)×105Da，均方根旋轉(zhuǎn)半徑為(40.0±1.4) nm。多分散系數(shù)為1.50，表明多糖的分子質(zhì)量分布較窄，分子結(jié)構(gòu)較為均一。通過軟件ASTRA 6.1模擬均方根半徑與分子量的雙對(duì)數(shù)曲線的斜率，可以判斷水溶液中多糖分子的構(gòu)象，一般v值為0.33、0.50～0.60或1.0時(shí)分別代表聚合物分子構(gòu)象為球形、柔順線團(tuán)狀或剛性桿狀[26-27]。計(jì)算可得，小黃姜多糖的雙對(duì)數(shù)曲線斜率為0.31，約為1/3，可知其在水溶液中均以球形構(gòu)象存在，是一種高度緊密且具有分支結(jié)構(gòu)的多糖聚合體。

2.6 小黃姜多糖熱穩(wěn)定性分析

多糖的熱反應(yīng)性質(zhì)與其組成、含水量以及聚集態(tài)結(jié)構(gòu)有關(guān)[28]。由TG-DTG曲線求TG-DTG可得DTG(derivative thermogtavimetric)曲線，根據(jù)導(dǎo)反應(yīng)曲線及表2可知，小黃姜多糖熱解反應(yīng)在50～140 ℃為第一階段，這一階段的質(zhì)量損失主要是多糖失去了物理吸附的水分。140～220 ℃為第二反應(yīng)階段，這一階段主要是發(fā)生的是多糖中的小分子揮發(fā)性熱解反應(yīng)，在220～500 ℃為第三階段，這一階段的質(zhì)量損失主要是多糖分子發(fā)生劇烈的熱分解，多糖降解成單糖并伴隨著C—O鍵和C—C鍵的斷裂，隨后單糖進(jìn)一步分解成水蒸氣和CO2。這個(gè)過程最大熱分解溫度為307.5 ℃，最大熱解速率為0.53%/℃，最后多糖的殘留質(zhì)量為33.89%。分析可知，多糖樣品雖然經(jīng)過冷凍干燥，但仍有一定的水分，這表明多糖會(huì)吸附部分水分，這與雞骨草多糖的TG曲線相似[29]。相較于大粒車前子多糖和苦丁茶冬青葉多糖的最大熱分解溫度分別為281.7 ℃和290 ℃[30-31]，小黃姜多糖最大熱分解溫度為307.5 ℃，具有較好的熱穩(wěn)定性。

表1 小黃姜多糖分子質(zhì)量參數(shù)Table 1 The molecular weight parameters of Zingiber officinale polysaccharide

注：Mn、Mw和Mz分別指數(shù)均分子質(zhì)量、重均分子質(zhì)量和平均分子質(zhì)量；Mw/Mn指多分散系數(shù)；Rn、Rw和Rz分別指數(shù)學(xué)均方旋轉(zhuǎn)半徑、重量均方旋轉(zhuǎn)半徑和均方旋轉(zhuǎn)半徑的均值；v為均方根半徑對(duì)分子質(zhì)量的雙對(duì)數(shù)曲線的斜率

2.7 小黃姜多糖抗氧化活性分析

2.7.1 羥自由基清除率

羥自由基普遍存在在生物體內(nèi)，是由機(jī)體新陳代謝產(chǎn)生的一類活性氧自由基，導(dǎo)致機(jī)體衰老與氧化損傷[32]。小黃姜多糖對(duì)羥自由基的清除率存在明顯濃度依賴性，由圖6-a可知，在0.1～5 mg/mL時(shí)小黃姜多糖對(duì)羥自由基有一定的清除作用，且清除效率隨濃度的增大而提高。當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí)，羥自由基清除率為(65±2)%，但低于VC的羥自由基清除率效果。李順峰等[13]對(duì)真姬菇多糖研究表明，在質(zhì)量濃度為10 mg/mL時(shí)對(duì)羥自由基的清除率為62%，說(shuō)明小黃姜多糖在較低濃度下即可達(dá)到與食用菌多糖同等的羥自由基清除效果。

圖5 小黃姜多糖的TG-DTG圖
Fig.5 TG/DTG curve ofZingiberofficinalepolysaccharide

表2 小黃姜多糖不同階段熱反應(yīng)參數(shù)
Table 2 The thermogravimetric parameters ofZingiberofficinalepolysaccharide during different reaction stages

階段最大反應(yīng)溫度/℃TG/%DTG/(%·℃-1)質(zhì)量損失/%第一階段77.594.160.147.88第二階段182.561.160.136.73第三階段307.533.890.5348.68

2.7.2 超氧陰離子自由基清除率

由圖6-b可以看出小黃姜多糖對(duì)超氧陰離子自由基清除率較低，在多糖質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí)，自由基清除率僅為(37±3)%，而許女等研究雞腿菇多糖在質(zhì)量濃度為8 mg/mL時(shí)對(duì)超氧陰離子自由基的清除率只有21%[33]。研究表明超氧陰離子自由基清除能力與其羥基數(shù)量有關(guān)，由于多糖的立體空間構(gòu)型，使羥基被束縛在內(nèi)部，不能與外周的超氧陰離子自由基反應(yīng)，導(dǎo)致自由基清除率較低[34]。

2.7.3 ABTS自由基清除率

如圖6-c所示，小黃姜多糖對(duì)ABTS自由基的清除率較強(qiáng)，當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí)，ABTS自由基清除率達(dá)到(96±4)%，與VC的效果相當(dāng)。經(jīng)線性擬合計(jì)算多糖半抑制濃度IC50為0.30 mg/mL，優(yōu)于牛肝菌多糖的抗氧化效果[35]。

2.7.4 DPPH自由基清除率

小黃姜對(duì)DPPH自由基清除能力如圖6-d所示，可以看出小黃姜多糖對(duì) DPPH自由基的清除能力隨樣品濃度的提高而明顯提高，當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為2 mg/mL時(shí)，自由基清除率達(dá)(83±3)%，繼續(xù)增加多糖濃度，則自由基清除能力趨于平緩，經(jīng)計(jì)算其IC50為0.57 mg/mL，ZHANG等[17]的研究表明生姜多糖對(duì)DPPH自由基的IC50為0.34～0.87 mg/mL，與本研究結(jié)果一致。

a-羥自由基清除率;b-超氧陰離子自由基清除率;c-ABTS自由基清除率;d-DPPH自由基清除率
圖6 小黃姜多糖抗氧化活性
Fig.6 Antioxidation activity ofZingiberofficinalepolysaccharide

通過對(duì)比小黃姜多糖對(duì)4種自由基清除能力可知，小黃姜多糖具有一定的體外抗氧化活性，其中對(duì)ABTS自由基和DPPH自由基的清除能力較強(qiáng)?？赡苁芷淇臻g構(gòu)型的影響，超氧陰離子自由基清除能力較弱，研究發(fā)現(xiàn)含有β-構(gòu)型比α-構(gòu)型的多糖抗氧化能力更強(qiáng)，具有抗氧化活性的多糖大多數(shù)都具有β-(1→3)-D-葡聚糖的主鏈結(jié)構(gòu)[24,27]，本研究中小黃姜多糖為β-吡喃糖構(gòu)型，且具有3股螺旋結(jié)構(gòu)，具有較高的體外抗氧化活性。

3 結(jié)論

本研究以小黃姜為原料，采用復(fù)合酶解結(jié)合水提醇沉法提取多糖組分，小黃姜多糖中總糖含量為(90.0±6.2)%，主要由葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖組成，含量百分比分別為(81.7±2.1)%、(12.3±1.3)%和(6.0±0.2)%。結(jié)構(gòu)分析表明小黃姜多糖為β-吡喃型多糖，具有三股螺旋結(jié)構(gòu)；多糖的重均分子質(zhì)量為(3.72±0.23)×105Da，水溶液中多糖分子的構(gòu)象為高度緊密的球形聚合體；小黃姜多糖具有較高的熱穩(wěn)定性，最大熱分解溫度為307.5 ℃，最大熱解速率為0.53%/℃；體外抗氧化活性表明小黃姜多糖對(duì)ABTS和DPPH自由基具有較強(qiáng)的清除能力，最大清除率分別為(96±4)%和(83±3)%，IC50分別為0.30 mg/mL和 0.57 mg/mL，具有較高的體外抗氧化活力。本研究為小黃姜多糖資源的深度開發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)。