金 立，龔國斌，葛亮亮，湯忠祥，李 文，胡華海，張幫林

(安徽豐樂農(nóng)化有限責(zé)任公司，合肥 230016)

大豆根腐病(Fusarium oxysporum)是由尖孢鐮刀菌引起的一種重要大豆病害，主要發(fā)生在大豆根部，幼苗或成株均染病。受害株根系不發(fā)達(dá)，根瘤少，地上部矮小瘦弱，葉色淡綠，分枝、結(jié)莢明顯減少[1]。小地老虎(Agrotis ypsilon)，又名土蠶，切根蟲，是我國重要的農(nóng)業(yè)害蟲，種類多且食性雜，對(duì)大豆幼苗危害很大，輕則造成缺苗斷壟，重則毀種重播，直接關(guān)系到大豆產(chǎn)量和質(zhì)量[2]。因此，尋找一種對(duì)兩者具有優(yōu)良防治效果的藥劑進(jìn)行合理混配是一種很好的選擇。

苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌和半知菌等引起的多種病害有持久的保護(hù)和治療活性，既可以用作葉面處理劑，又可以用作種子處理劑[3]?？┚?fludioxonil)可用于種子處理防治谷物及其他作物上的多種病害[4]。噻蟲嗪(Thiamethoxam)是一種全新結(jié)構(gòu)的第2代煙堿類高效低毒殺蟲劑，對(duì)害蟲具有胃毒、觸殺及內(nèi)吸活性，對(duì)地下害蟲具有較好的防治效果[5]。本試驗(yàn)開展了不同配比的噻蟲嗪、咯菌腈與苯醚甲環(huán)唑混劑分別對(duì)大豆根腐病和大豆小地老虎的聯(lián)合作用及其對(duì)作物的安全性評(píng)價(jià)研究，以期為混配制劑的研發(fā)及田間應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試病原菌與試蟲

大豆根腐病菌由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)病理實(shí)驗(yàn)室提供。

小地老虎：在成蟲發(fā)生期在田間用黑光燈誘捕成蟲，將成蟲移入養(yǎng)蟲籠內(nèi)，置于溫度(25±1)℃條件下，以糖水或蜂蜜液飼養(yǎng)。養(yǎng)蟲籠內(nèi)放入供產(chǎn)卵的白紙、紗布等，每天收集1次卵。將收集的卵置于溫度(25±1)℃條件下待其孵化，將初孵幼蟲置于養(yǎng)蟲盒內(nèi)，用新鮮的寄主植物飼養(yǎng)至3齡，備用。

1.1.2 供試藥劑

98%噻蟲嗪原藥(江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司)；97%咯菌腈原藥(江蘇云帆化工有限公司)；95%苯醚甲環(huán)唑原藥(江蘇七洲綠色化工股份有限公司)；24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑(安徽豐樂農(nóng)化有限責(zé)任公司)。

1.1.3 供試作物

大豆品種：冀豆17、中黃37、皖豆28。

1.1.4 試驗(yàn)儀器

FA1004A型電子天平(上海力辰儀器科技有限公司)；人工氣候箱(青島聚創(chuàng)環(huán)保集團(tuán)有限公司)；生物培養(yǎng)箱(常州金壇良友儀器有限公司)；可控日光溫室(12 h/12 h光暗交替、光照強(qiáng)度8 000～30 000 lx、溫度15～26 ℃，相對(duì)濕度65%～80%)，系青州暉耀溫室工程有限公司建。

1.2 試驗(yàn)方法

首先篩選苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈防治大豆根腐病菌的最佳配比，然后以此最佳配比組合與噻蟲嗪進(jìn)行混配篩選出對(duì)害蟲的最適配方。

1.2.1 苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈防治大豆根腐病菌的配比篩選設(shè)計(jì)

在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，用電子天平準(zhǔn)確稱取適量咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑原藥，用少量丙酮溶解定容獲得單劑母液。將咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑及兩者5種不同配比組合分別用0.1%吐溫80水溶液稀釋配制成 5個(gè)濃度梯度溶液待用。苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的比例設(shè)置如下：3∶1、1∶0.6、1∶1、0.6∶1、1∶3。

1.2.2 噻蟲嗪與苯醚甲環(huán)唑-咯菌腈最佳組合對(duì)小地老虎的配比篩選設(shè)計(jì)

根據(jù)1.2.1試驗(yàn)結(jié)果選擇苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈(B)的最佳增效組合開展與噻蟲嗪(A)不同混配比例的篩選，具體比例設(shè)置如下：噻蟲嗪∶苯醚甲環(huán)唑及咯菌腈組合的配比分別為 22.8∶1.2、22.6∶1.4、22.4∶1.6、22.2∶1.8、22.0∶2.0。

藥劑溶解及梯度設(shè)置方法同1.2.1。

1.2.3 生物活性測(cè)定方法

⑴ 大豆根腐病菌

采用含毒培養(yǎng)基法[6]：在無菌操作條件下，將預(yù)先融化冷卻至約50 ℃的滅菌PSA培養(yǎng)基定量加入滅菌劃線三角瓶中，使培養(yǎng)基與劃線處(60 mL)平齊，然后從低濃度到高濃度依次吸取600 μL藥液，分別加入上述三角瓶中，充分搖勻，然后等量倒入4個(gè)培養(yǎng)皿(Φ 9 cm)中，制成5個(gè)濃度梯度帶藥平板，并設(shè)含等量丙酮的空白對(duì)照。挑選長勢(shì)均勻良好的菌種進(jìn)行接種。在無菌條件下用直徑為5 mm的打孔器，自菌落邊緣同一圓周上切取菌餅(保證供試病菌的菌齡相同)，用接種器將菌餅接入培養(yǎng)皿的含藥培養(yǎng)基中央，菌絲面朝下，蓋上皿蓋，于(25±1)℃培養(yǎng)箱中黑暗倒置培養(yǎng)。根據(jù)空白對(duì)照皿中菌絲生長情況，用卡尺測(cè)量菌落直徑。每個(gè)菌落采用十字交叉法垂直測(cè)量，取其平均值，計(jì)算抑菌率。將菌絲生長抑制機(jī)率值(Y)與藥劑濃度對(duì)數(shù)值(x)進(jìn)行線性回歸分析，求出回歸方程、EC50及其95%置信限。

菌餅直徑和菌絲生長抑制率的計(jì)算公式如下：

式中：D為菌落增長直徑(cm)；D1為菌落直徑(cm)；D2為菌餅直徑(cm)。

式中：I為菌絲生長抑制率(%)；D0為空白對(duì)照菌落增長直徑(cm)；Dt為藥劑處理菌落增長直徑(cm)。

2種或2種以上農(nóng)藥混配的聯(lián)合毒力作用方式采用共毒系數(shù)或增效系數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其計(jì)算公式如下[8]：

當(dāng) CTC≥120，表示增效作用；CTC≤80時(shí)，表示拮抗作用；80＜CTC＜120時(shí)，表示相加作用。當(dāng)殺菌劑對(duì)昆蟲的毒力或殺蟲劑對(duì)病原菌的毒力很低，可作為增效劑S看待，其毒力可以忽略不計(jì)。因此在計(jì)算殺菌劑與殺蟲劑混用的共毒系數(shù)時(shí)，此時(shí)共毒系數(shù)又稱為增效系數(shù)，其計(jì)算簡化為：

⑵ 大豆小地老虎

采用混藥飼料喂食法并稍改進(jìn)，即種子包衣的形式進(jìn)行無限量取食法[7]。將供試原藥或其不同混配組合以丙酮為溶劑加 5%木質(zhì)素磺酸鈉作為分散劑，2%十二烷基磺酸鈉作為潤濕劑，再加入一定量的水配制成一定質(zhì)量濃度的藥液，分別用不同等比用量對(duì)大豆種進(jìn)行拌種，并晾干形成6個(gè)藥劑梯度的大豆種子進(jìn)行種植。24%苯醚甲環(huán)唑·咯菌腈·噻蟲嗪種子處理懸浮劑直接按不同等比用量進(jìn)行包衣。97%咯菌腈原藥、95%苯醚甲環(huán)唑原藥按最高用量進(jìn)行拌種。以不含原藥成分的配制藥液最高量進(jìn)行拌種作為空白對(duì)照。

選擇適宜小地老虎生活的沙壤土，過850 μm篩，用遠(yuǎn)紅外快速干燥器在120 ℃下消毒處理4 h。在消毒后的土中加入適量水，使土壤含水量約18%。將一定量的該土裝入養(yǎng)蟲盒內(nèi)，放入供試大豆種子100粒作為食物，并覆蓋一定量的土。每處理4次重復(fù)，每重復(fù)試蟲30頭。

將處理后的養(yǎng)蟲盒置于溫度為 24 ℃的實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)。每天用小型噴霧器對(duì)養(yǎng)蟲盒表層土進(jìn)行適量噴水，保持土壤濕度。7 d后檢查試蟲死亡情況(死亡標(biāo)準(zhǔn)：蟲體明顯收縮或觸之不能正常爬行)，并計(jì)算死亡率。如對(duì)照死亡率小于10%，根據(jù)試蟲校正死亡率機(jī)率值(Y)及劑量對(duì)數(shù)(x)用Excel軟件計(jì)算各藥劑的毒力回歸方程和LC50。

死亡率和校正死亡率分別按式(3)和式(4)計(jì)算：

式中：P1為死亡率(%)；K為死亡蟲數(shù)(頭)；N為處理總蟲數(shù)(頭)。

式中：P2為校正死亡率(%)；Pt為處理死亡率(%)；P0為空白對(duì)照死亡率(%)。

若對(duì)照死亡率＜5%，無需校正；對(duì)照死亡率為5%～20%，應(yīng)按公式(4)進(jìn)行校正；對(duì)照死亡率＞20%，試驗(yàn)需重做。

1.2.4 作物安全性試驗(yàn)方法

⑴ 發(fā)芽試驗(yàn)

采用玻皿法[8]。試驗(yàn)設(shè) 3個(gè)施藥劑量處理，即24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑劑量分別為120 g a.i./100 kg(1)、240 g a.i./100 kg(2)、480 g a.i./100 kg(3)以及清水對(duì)照(4)，將種子包衣后，放在兩層濾紙間，噴灑一定量水使濾紙潤濕，放入塑封袋，25 ℃恒溫持續(xù)光照培養(yǎng)，每天噴灑一定量水，保持濾紙濕潤，處理5、10 d后分別測(cè)定發(fā)芽勢(shì)，每個(gè)處理4次重復(fù)。

⑵ 出苗試驗(yàn)

采用盆栽法。將營養(yǎng)一致、土壤孔隙度相似及含水量在60%左右的土壤裝于花盆(90 mm×80 mm×65 mm)中，把經(jīng)不同濃度藥劑(藥劑劑量設(shè)置同發(fā)芽試驗(yàn))包衣處理后的種子分別播種于土壤表面，覆土5 mm，毎處理4次重復(fù)，毎重復(fù)75粒種子，25 ℃恒溫保濕培養(yǎng)。藥后20 d，觀察大豆植株形態(tài)和葉片顏色，播種20 d后，以莖基部與根部的結(jié)合部為節(jié)點(diǎn)，按根系/莖葉部分開，分別測(cè)定其新生長度。

⑶ 生長速率抑制率

生長速率按式(5)計(jì)算，生長速率抑制率按式(6)計(jì)算：

式中：R為生長速率，mm/d；L為植株新生長度，mm；D為時(shí)間，d。

式中：I為生長速率抑制率(%)；Rck為空白對(duì)照組生長速率(%)；Rt為藥劑處理組生長速率(%)。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)處理采用Excel和DPS7.05軟件處理計(jì)算差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)配比篩選

苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的不同配比組合對(duì)大豆根腐病菌的聯(lián)合作用不同(表1)。由表1可見，當(dāng)苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的配比為3∶1、0.6∶1和1∶3時(shí)，其對(duì)大豆根腐病菌的毒力表現(xiàn)為相加作用，其共毒系數(shù)分別為115.74、102.69和99.36，而當(dāng)苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的配比為1∶1和1∶0.6時(shí)，其對(duì)大豆根腐病菌的毒力表現(xiàn)為增效作用，其共毒系數(shù)分別為138.17和125.32，其中以1∶1混配組合的增效作用最明顯。因此，確定該配比為苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈的最佳混配組合。

將苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈最佳配比(1∶1)混劑(B)與噻蟲嗪(A)按不同配比混配防治大豆小地老虎和大豆根腐病菌結(jié)果見表2和表3。

從表2可以看出，噻蟲嗪對(duì)大豆小地老虎具有較高的活性，LC50為1.086 1 mg/L，加入不同含量的殺菌劑苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈(1∶1)混劑后，對(duì)大豆小地老虎的LC50為1.138 3～1.411 4 mg/L，與噻蟲嗪單劑對(duì)大豆小地老虎的活性差異不明顯，說明苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈對(duì)噻蟲嗪的殺蟲活性無明顯影響，其中，當(dāng)噻蟲嗪(A)與B按22.4∶1.6混配時(shí)，LC50與噻蟲嗪單劑LC50最接近，為1.138 3 mg/L，可作為3種藥劑防治大豆小地老虎的最適配比。

從表3可以看出，苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈0.8∶0.8混劑對(duì)大豆根腐病菌具有較高的活性，EC50為0.578 4 mg/L。加入不同配比的殺蟲劑噻蟲嗪后，對(duì)大豆根腐病菌的EC50為0.618 2～0.770 3 mg/L，與苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈0.8∶0.8混劑對(duì)大豆根腐病菌的活性差異不明顯。因此，噻蟲嗪對(duì)苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈混劑的抑菌活性無明顯影響。其中，當(dāng)噻蟲嗪(A)與B按22.4∶1.6混配時(shí)，EC50與苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈0.8∶0.8混劑的EC50最接近，為0.618 2 mg/L，可作為3種藥劑防治大豆根腐病菌的最適配比。

綜上所述，當(dāng)噻蟲嗪、咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑按22.4∶0.8∶0.8比例混配時(shí)，對(duì)大豆小地老虎和大豆根腐病菌的活性為所有配比組合中最高，且與噻蟲嗪對(duì)小地老虎以及咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑混劑對(duì)大豆根腐病菌的活性最接近。因此，將其用于田間防治大豆小地老虎和大豆根腐病具有合理性。

表1 苯醚甲環(huán)唑與咯菌腈不同配比組合對(duì)大豆根腐病菌的聯(lián)合毒力

表2 苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈與噻蟲嗪的不同混配組合對(duì)大豆小地老虎的活性

表3 苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈與噻蟲嗪的不同混配組合對(duì)大豆根腐病菌的活性

2.2 作物安全性試驗(yàn)

2.2.1 24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑對(duì)大豆發(fā)芽的影響

由表4可知，供試的3個(gè)品種大豆種子對(duì)照發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率接近且均較高，經(jīng) 24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑對(duì)大豆種子包衣后，當(dāng)藥種比為1∶200，即藥劑用量為120 g a.i/100 kg，當(dāng)藥種比為1:100，即藥劑用量為240 g a.i/100 kg時(shí)，3種大豆種子發(fā)芽勢(shì)都在 80%以上，發(fā)芽率都在 94%以上。除處理3外，處理1，2與對(duì)照相比均差異不顯著。綜合結(jié)果表明，24%苯醚·咯·噻蟲懸浮種衣劑以使用量120 g a.i/100 kg和240 g a.i/100 kg對(duì)大豆種子包衣后，不影響大豆最終發(fā)芽率；當(dāng)種衣劑使用量為480 g a.i/100 kg，即藥種比1∶50時(shí)，大豆種子發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率有所降低。

表4 24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑對(duì)大豆種子發(fā)芽的影響

2.2.2 24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑對(duì)大豆出苗的影響

用藥20 d后，藥種比例為480 g a.i/100 kg時(shí)，冀豆17、中黃37、皖豆28生長抑制率超過10%。其余藥劑處理對(duì)葉片和植株均無不良影響，未出現(xiàn)葉片褪綠、黃化，植株形態(tài)正常，無畸形等癥狀，生長抑制率均在5%以下。

3 結(jié) 論

室內(nèi)藥效配方篩選測(cè)定結(jié)果表明，噻蟲嗪與苯醚甲環(huán)唑及咯菌腈按 22.4∶0.8∶0.8比例混配時(shí)，對(duì)大豆小地老虎和大豆根腐病菌的活性為所有配比中最高，和噻蟲嗪對(duì)大豆小地老虎以及苯醚甲環(huán)唑和咯菌腈混劑對(duì)大豆根腐病菌的活性相當(dāng)，且其生產(chǎn)成本也較低。同時(shí)，可一次施藥達(dá)到病蟲兼治的效果，符合田間病蟲害復(fù)合發(fā)生的自然規(guī)律，且可大大降低勞動(dòng)力成本，在田間推廣具有較好的市場(chǎng)前景。

表5 24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑對(duì)大豆出苗的影響(盆栽試驗(yàn)20 d結(jié)果)

通過不同濃度 24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑包衣對(duì)3種大豆品種安全性研究表明，24%苯醚·咯·噻蟲種子處理懸浮劑在藥種比為120 g a.i./100 kg和240 g a.i./100 kg時(shí)不影響大豆種子的發(fā)芽、出苗和生長，說明此產(chǎn)品在以上劑量范圍和試驗(yàn)條件下對(duì)大豆安全，可作為推薦劑量在田間示范推廣。至于田間安全性，有待于田間試驗(yàn)進(jìn)一步的驗(yàn)證。